一种利用线虫咽动检测铜的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种检测铜的方法。
【背景技术】
[0002]秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，缩写为C.elegans)为线虫动物门泄管纲动物，作为一种典型模式生物在科研领域被广泛应用。秀丽隐杆线虫通体透明，易于观察形态和行为，生命周期短，培养方便且廉价，易于保存和便于试验操作。秀丽隐杆线虫的实验研究已形成一系列国际标准化与规范化操作。咽球是线虫重要的进食和运动器官，线虫咽动频率是表征其健康的一个重要行为指标，也是线虫毒理学常用的行为端点。
[0003]铜作为典型重金属，随着应用范围和市场的增加，铜三废排放导致的生态环境和人类健康问题不断出现，评价及控制铜的生态环境风险日益引起人们关注。常规的铜检测方法存在操作复杂，仪器依赖度大，造成鉴定成本高。
【发明内容】
[0004]本发明是为了解决现有的铜检测方法存在操作复杂，仪器依赖度大，造成鉴定成本高的技术问题，而提供一种利用线虫咽动检测铜的方法。
[0005]本发明的一种利用线虫咽动检测铜的方法是按以下步骤进行的:
[0006]—、制备混合液并灭菌:将CaCl2、MgS04、NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaClJ^浓度为0.1X 10 3g/mL?0.12X10 3g/mL，MgSOj^浓度为 0.11X10 3g/mL ?0.13X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 2X 10 3g/mL ?3X10 VmL，KCl 的浓度为 2X10 3g/mL ~ 3X10 3g/mL ；
[0007]二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动，如果秀丽隐杆线虫的咽动频率小于100下/分钟则表明待检液体中含有铜，如果秀丽隐杆线虫的咽动频率大于或等于100下/分钟则表明待检液体中不含有铜。
[0008]本发明优点:本发明的检测方法利用了秀丽隐杆线虫的咽动频率作为指标，与传统的利用分析仪器鉴定铜的方法相比，可以直观高效的甄别铜；此外，本发明的检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，实验操作方便，成本低廉，易于培训和掌握。
[0009]本发明应用于检测水溶液中铜的浓度大于或等于0.013 ymol/L的液体。
【具体实施方式】
[0010]【具体实施方式】一:本实施方式为一种利用线虫咽动检测铜的方法是按以下步骤进行的:
[0011]—、制备混合液并灭菌:将CaCl2、MgS04、NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaClJ^浓度为0.1X 10 3g/mL?0.12X10 3g/mL，MgSOj^浓度为 0.11X10 3g/mL ?0.13X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 2X 10 3g/mL ?3X10 VmL, KCl 的浓度为 2X10 3g/mL ~ 3X10 3g/mL ；
[0012]二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动，如果秀丽隐杆线虫的咽动频率小于100下/分钟则表明待检液体中含有铜，如果秀丽隐杆线虫的咽动频率大于或等于100下/分钟则表明待检液体中不含有铜。
[0013]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点是:步骤一中将CaCl2、MgSO4, NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌20min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液。其他与【具体实施方式】一相同。
[0014]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一或二的不同点是:步骤二中向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入10条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动。其他与【具体实施方式】一或二相同。
[0015]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一至三的不同点是:步骤二所述的待测液体为铜的浓度大于或等于0.013 μπιοΙ/L的液体。其他与【具体实施方式】一至三相同。
[0016]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一至四的不同点是:步骤一所述的混合液中CaCl^浓度为0.1X10 3g/mL，MgSO^浓度为0.12X10 3g/mL，NaCl的浓度为3X10 3g/mL，KCl的浓度为3X 10 3g/mL。其他与【具体实施方式】一至四相同。
[0017]通过以下试验验证本发明的有益效果:
[0018]试验一:本试验为对比试验:
[0019]—、制备混合液并灭菌:将CaCl2、MgSO4, NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaClj^浓度为0.1X10 3g/mL，MgSOj^浓度为0.12X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 3X 10 3g/mL，KCl 的浓度为 3X 10 3g/mL ；
[0020]二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动。
[0021]步骤二中所述的待测液体为去离子水。
[0022]肉眼观测得到秀丽隐杆线虫的咽动高于200下/分钟。
[0023]试验二:本试验为一种利用线虫咽动检测铜的方法，具体是按以下步骤进行的:
[0024]—、制备混合液并灭菌:将CaCl2、MgSO4, NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaClj^浓度为0.1X10 3g/mL，MgSOj^浓度为0.12X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 3X 10 3g/mL，KCl 的浓度为 3X 10 3g/mL ；
[0025]二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动。
[0026]步骤二中所述的待测液体为铜离子浓度为0.013 μ mo I/L的溶液。
[0027]肉眼观测得到秀丽隐杆线虫的咽动小于100下/分钟。
[0028]试验三:本试验为一种利用线虫咽动检测铜的方法，具体是按以下步骤进行的:
[0029]—、制备混合液并灭菌:将CaCl2、MgSO4, NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaClj^浓度为0.1X10 3g/mL，MgSOj^浓度为0.12X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 3X 10 3g/mL，KCl 的浓度为 3X 10 3g/mL ；
[0030]二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动。
[0031]步骤二中所述的待测液体为铜离子浓度为0.13 μ mo I/L的溶液。
[0032]肉眼观测得到秀丽隐杆线虫的咽动小于100下/分钟。
[0033]试验四:本试验为一种利用线虫咽动检测铜的方法，具体是按以下步骤进行的:
[0034]—、制备混合液并灭菌:将CaCl2、MgSO4, NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaClj^浓度为0.1X10 3g/mL，MgSOj^浓度为0.12X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 3X 10 3g/mL，KCl 的浓度为 3X 10 3g/mL ；
[0035]二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动。
[0036]步骤二中所述的待测液体为铜离子浓度为1.3 μ mo I/L的溶液。
[0037]肉眼观测得到秀丽隐杆线虫的咽动小于100下/分钟。
【主权项】
1.一种利用线虫咽动检测铜的方法，其特征在于利用线虫咽动检测铜的方法是按以下步骤进行的: 一、制备混合液并灭菌:将CaCl2,MgSO4,NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌15min?25min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液；所述的混合液中CaCl；^9浓度为0.1 X 10 3g/mL?0.12 X 10 3g/mL，MgSO4的浓度为 0.11X10 3g/mL ?0.13X10 3g/mL，NaCl 的浓度为 2X10 3g/mL ~ 3X10 3g/mL，KCl 的浓度为 2X10 3g/mL ~ 3X10 3g/mL ； 二、加线虫并观察:向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入8条?12条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动，如果秀丽隐杆线虫的咽动频率小于100下/分钟则表明待检液体中含有铜，如果秀丽隐杆线虫的咽动频率大于或等于100下/分钟则表明待检液体中不含有铜。2.根据权利要求1所述的一种利用线虫咽动检测铜的方法，其特征在于步骤一中将CaCl2,MgSO4,NaCl和KCl溶于蒸馏水中，得到混合液，将混合液放入高压蒸汽灭菌锅中在温度为120°C的条件下灭菌20min，取出后冷却，得到灭菌后的混合液。3.根据权利要求1所述的一种利用线虫咽动检测铜的方法，其特征在于步骤二中向24孔培养皿的每个孔中依次加入ImL步骤一得到的灭菌后的混合液、1yL待测液体和入10条秀丽隐杆线虫，培养24h时后肉眼观测秀丽隐杆线虫的咽动。4.根据权利要求1所述的一种利用线虫咽动检测铜的方法，其特征在于步骤二所述的待测液体为铜的浓度大于或等于0.013 ymol/L的液体。5.根据权利要求1所述的一种利用线虫咽动检测铜的方法，其特征在于步骤一所述的混合液中CaCl^浓度为0.1X10 3g/mL，MgSO^浓度为0.12X10 3g/mL，NaCl的浓度为3X10 3g/mL，KCl 的浓度为 3X 10 3g/mL。
【专利摘要】一种利用线虫咽动检测铜的方法，涉及一种检测铜的方法。本发明是为了解决现有的铜检测方法存在操作复杂，仪器依赖度大，造成鉴定成本高的技术问题。本发明的一种利用线虫咽动检测铜的方法是按以下步骤进行的：一、制备混合液并灭菌；二、加线虫并观察。本发明优点：本发明的检测方法利用了秀丽隐杆线虫的咽动频率作为指标，与传统的利用分析仪器鉴定铜的方法相比，可以直观高效的甄别铜；此外，本发明的检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，实验操作方便，成本低廉，易于培训和掌握。本发明应用于检测水溶液中铜的浓度大于或等于0.013μmol/L的液体。
【IPC分类】G01N33/00
【公开号】CN105021772
【申请号】CN201510400626
【发明人】王云彪, 陈展彦
【申请人】中国科学院东北地理与农业生态研究所
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月9日