蜈蚣药材的质量控制方法

蜈蚣药材的质量控制方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种蜈蚣药材的质量控制方法，属于中药领域。
【背景技术】
[0002] 娱蚁为娱蚁科动物少棘巨娱蚁Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch的干 燥体。春、夏二季捕捉，用竹片插入头尾，绷直，干燥。具有熄风镇痉，通络止痛，攻毒散结之 功效，用于肝风内动，痉挛抽搐，小儿惊风，中风口喁，半身不遂，破伤风，风湿顽痹，偏正头 痛，疮疡，瘰疬，蛇虫咬伤。
[0003] 蜈蚣主要含组织胺样物质及溶血性蛋白质，此外尚含氨基酸、脂肪酸、胆固醇及微 量元素（苗明三.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000:1055)。 《中国药典》2010年版一部中蜈蚣的质量控制项目仅有性状、水分、总灰分、浸出物（国家药 典委员会.中华人民共和国药典[S]. 2010年版一部.化学工业出版社，2010:335-336)，缺 乏专属性强的薄层色谱鉴别或含量测定等质量控制项目，使得蜈蚣药材的质量难以得到有 效地保证。
[0004] 国内有报道对蜈蚣中氨基酸类成分（吴刚.少棘蜈蚣研究[J].生物化学杂志， 1992,24(11) :650)和组织胺（邓芳，方红.蜈蚣药材中毒性成分组织胺的含量测定[J].中 草药，1997, 28(8) :472)进行测定，氨基酸类成分及组织胺在多数动植物组织中广泛存在， 此类成分专属性不强，难以有效控制蜈蚣的质量。韩国学者从蜈蚣中分离得到喹啉类化合 物 3,8_ 二羟基喹啉，具有抗肿瘤活性（Surk-Sik Moon 等.Jineol，a Cytotoxic Alkaloid from the Centipede Scolopendra subspinipes[J]. Nat. Prod. 1996, 59:777-779)，但未见 以对蜈蚣中的3,8-二羟基喹啉为指标成分建立测定方法的报道。本发明人从蜈蚣中分离 得到了 3,8_二羟基喹啉，其为黄绿色粉末，以此成分作为蜈蚣的指标成分，首次建立了蜈 蚣药材的质量控制方法。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的是提供一种蜈蚣药材的质量控制方法。该方法是以蜈蚣中的3， 8-二羟基喹啉为指标成分，采用高效液相色谱法控制蜈蚣中指标性成分3,8-二羟基喹啉 的重量百分比或用薄层色谱法鉴别蜈蚣中3,8-二羟基喹啉。
[0006] 本发明技术方案以高效液相色谱法测定蜈蚣中的3,8_二羟基喹啉，包括下列步 骤：
[0007] 1)对照品溶液制备：精密称取3,8_二羟基喹啉对照品，用甲醇溶解，配制成对照 品溶液；
[0008] 2)供试品溶液的制备：取蜈蚣药材粉末，精密称定，加25倍量甲醇，称重，超声处 理30分钟，取出，放冷，补重，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0009] 3)样品的测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定， 色谱条件：进样体积5y1 ;流速：0. 6 - 1. 0ml/min;检测波长252nm;柱温：35- 50°C;流动 相：甲醇一 lOmmol/L磷酸二氢钾溶液=28- 36 :72- 64。
[0010] 优选地，步骤1)所述3,8-二羟基喹啉对照品浓度为0. 00362mg/ml。
[0011] 优选地，步骤3)所述色谱条件为：进样体积5 y 1 ;流速：0. 6ml/min ;检测波长： 252nm ;柱温：40°C ;流动相：甲醇一 10mmol/L磷酸二氢钾溶液=28 :64。
[0012] 本发明技术方案已薄层色谱法鉴别蜈蚣中3,8-二羟基喹啉，包括以下步骤：
[0013] 1)对照品溶液的制备：取3,8_二羟基喹啉对照品适量，加甲醇溶解，配制成浓度 为0? lmg/ml -1. Omg/ml的3,8_二羟基喹啉对照品溶液；
[0014] 2)供试品溶液的制备：取蜈蚣药材粉末，精密称定，加10倍量甲醇，超声处理30 分钟，取出，滤过，水浴蒸干，残渣加水溶散，用乙酸乙酯提取1次，分取乙酸乙酯层，水浴蒸 干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；
[0015] 3)点样、展开：分别吸取对照品溶液、供试品溶液点于同一薄层板上，以氯仿：甲 醇：甲酸=10 :〇. 8-1. 5 :1为展开剂，展开，取出，瞭干，254nm紫外光灯下检视。
[0016] 优选地，步骤1)所述3,8_二羟基喹啉对照品溶液的浓度为为0. 8mg/ml。
[0017] 优选地，步骤3)所述展开剂最佳为三氯甲烷：甲醇：甲酸=10:1.2:1。
[0018] 与现有技术比较，本发明蜈蚣药材的质量控制方法首次将3,8-二羟基喹啉作为 蜈蚣药材质量控制的指标成分，采用高效液相色谱法和薄层色谱法对蜈蚣药材进行质量控 制，操作简便，条件可控，专属性强，稳定性和重现性好，可有效弥补中国药典中蜈蚣药材质 量控制方法的不足，具有很强的实用性。本发明技术方案也可为中药制剂中蜈蚣的质量控 制提供参考。
【附图说明】
[0019] 图1是3，8-二羟基喹啉对照品的HPLC图；
[0020] 图2是蜈蚣药材的HPLC图，其中峰1是3,8-二羟基喹啉；
[0021] 图3是不同批次的蜈蚣的薄层色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 以下通过【具体实施方式】对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本 领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但只要不脱离本发明的 基本思想，均在本发明的范围之内。
[0023] 实施例1蜈蚣药材质量控制方法
[0024] 1)对照品溶液的制备：精密称取3，8-二羟基喹啉，用甲醇溶解，配制成 0? 00362mg/ml的3,8-二羟基喹啉对照品溶液；
[0025] 2)供试品溶液的制备：取蜈蚣药材粉末lg，精密称定，加甲醇25ml，称重，超声处 理30min，取出，放冷，补重，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0026] 3)样品的测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定， 色谱条件：色谱柱：Kromasil C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)流速：0? 6ml/min ;检测波长252nm ; 柱温：35°C ;进样体积5 y 1 ;流动相：甲醇-10mm〇l/L磷酸二氢钾=28 :64。
[0027]4)标准曲线的绘制：精密吸取浓度为0. 00362mg/ml的3，8-二羟基喹啉对照 品溶液1 y 1、2 y 1、4 y 1、8 y 1、10 y 1、12 y 1，按上述色谱条件测定的峰面积，以进样量 为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y = 7774. 301X-44. 053, r = 9994,线性范围 0. 00362 yg- 0.04344 yg。
[0028] 5)精密度试验：按照《中国药典》2010年版一部附录记载的方法，分别精密吸取同 一对照品溶液5 y 1，连续进样6次，按上述条件测定3,8-二羟基喹啉的峰面积，其RSD为 0? 657%〇
[0029] 6)稳定性试验：按照《中国药典》2010年版一部附录记载的方法，精密吸取同一供 试品溶液5 y 1，分别在0, 2,4,6,8h进样，按上述色谱条件测定3,8-二羟基喹啉的峰面积， 其 RSD 为 0? 785%。
[0030] 7)重复性试验：按照《中国药典》2010年版一部附录记载的方法，取蜈蚣6份，精 密称定，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定3,8-二羟基喹 啉的含量，其RSD为0. 536%。
[0031] 8)回收率试验：按照《中国药典》2010年版一部附录记载的方法，取6份已知含量 的药材粉末约〇. 5g，精密称定，分别精密加入0. 34mg的3,8-二羟基喹啉，按照供试品溶液 的制备方法制成加样供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，结果平均回收率 为 99. 22%，RSD 为 0? 373%。
[0032] 实施例2蜈蚣药材质量控制方法
[0033]1)对照品溶液的制备：精密称取3，8-二羟基喹啉，用甲醇溶解，配制成 0? 00362mg/ml的3,8-二羟基喹啉对照品溶液；
[0034] 2)供试品溶液的制备：取蜈蚣药材粉末lg，精密称定，加甲醇25ml，称重，超声处 理30min，取出，放冷，补重，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0035] 3)样品的测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定， 色谱条件：色谱柱：Kromasil C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)流速：0? 8ml/min ;检测波长252nm ; 柱温：40°C ;进样体积5 y 1 ;流动相：甲醇-10mm〇l/L磷酸二氢钾=32 :68。
[0036] 其他步骤同实施例1。
[0037] 实施例3蜈蚣药材质量控制方法
[0038]1)对照品溶液的制备：精密称取3，8-二羟基喹啉，用甲醇溶解，配制成 0? 00362mg/ml的3,8-二羟基喹啉对照品溶液；
[0039] 2)供试品溶液的制备：取蜈蚣药材粉末lg，精密称定，加甲醇25ml，称重，超声处 理30min，取出，放冷，补重，摇匀，滤过，作为供试品溶液；
[0040] 3)样品的测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定， 色谱条件：色谱柱：Kromasil C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)流速：0? 9ml/min ;检测波长252nm ; 柱温：45°C ;进样体积5 y 1 ;流动相：甲醇-10mm〇l/L磷酸二氢钾=34 :67。
[0041] 其他