一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全技术和分析化学技术领域，设及一种检测样品中氯霉素浓度 的方法，特别设及一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法。
【背景技术】
[0002] 氯霉素是一种白色针状的结晶粉末，在水溶液中比较稳定难W分解，作为一种广 谱抗菌素，它可W与核糖体结合，达到抑制细菌蛋白质合成的作用。因其效高价廉，在畜牧 业中得到广泛的应用。但是氯霉素具有较强的副作用和毒性，长期接触容易导致再生障碍 性贫血和粒细胞缺乏症，此外，长期微量摄入氯霉素，也可使大肠杆菌、沙口氏菌等产生耐 药性，引起机体正常菌落的失调，是人们易感染各种疾病。氯霉素可在食用动物中残留，可 通过食物链传给人类，对人类的健康造成危害。世界上许多国家禁止此药用于生产食品动 物，并规定了其在畜产品中最高残留限量。发达国家对检出限的要求越来越严格，其检测限 问题已成为人们关注的焦点。目前氯霉素的检测方法分为微生物法、免疫分析方法、色谱 法和其他方法。
[0003] 核酸适配体是通过指数富集配体的系统进化技术（SELE幻筛选而来的，选择性 地绑定到各种具有高亲和力的目标物如小分子、蛋白质和药物等。与传统的分子识别系统 相比，核酸适配体由于易合成而有很大的优势，而且其容易被标记，可W长期稳定存储，具 有优良的稳定性，、广泛的适用性W及高敏感特性。因此，它们的优异属性使其在医学诊 断、环境监测、生物分析方面的应用有很大潜力。金纳米粒子具有独特的光学特性和较好的 生物相容性，已在共振散射光谱，紫外吸收光谱等分析中得到应用，已有研究基于核酸适配 体修饰的纳米金与共振瑞利散射光谱，实现了对祀分子、等的高灵敏度高选择性的检测。基 于氯金酸制备得到的纳米金溶液呈现出酒红色，少量的电解质存在时能诱导金纳米颗粒团 聚，相对应的溶液的颜色会从酒红色逐渐变为藍紫色。所W在金纳米溶液中加入适量的阳 离子聚合物时会引起溶液吸光度的变化。
[0004] 基于氯霉素与其对应核酸适配体的特异作用，阳离子聚合物性质和金纳米特性分 析可知：阳离子聚合物与核酸适配体能够形成稳定的复合物，不能引起金纳米颗粒的聚集。 但在氯霉素存在下，核酸适配体优先与氯霉素结合形成发夹结构，从而不能结合阳离子聚 合物。溶液中多余的阳离子聚合物会引起金纳米颗粒的聚集，导致体系的紫外吸收值发生 变化。因此，结合体系产生吸光信号的强度与氯霉素浓度的关系，本实验研究结合W上原理 设计一种测定氯霉素的生物比色传感新方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法，用W实 现溶液中氯霉素的简单、快速、高灵敏检测。
[0006] 本发明通过W下技术方案来实现；一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的 方法，包括： (1) 将金纳米颗粒、能够对氯霉素特异性识别的核酸适配体和阳离子聚合物混合，阳离 子聚合物和核酸适配体形成稳定的复合物； (2) 将待测样品和上述混合物混合，待测样品中的氯霉素与核酸适配体形成稳定的发 夹结构，释放出阳离子聚合物； (3) 金纳米颗粒在阳离子聚合物的作用下团聚成较大颗粒，导致不同波长处的紫外吸 收峰强度减弱或增强W及相对应的颜色变化； (4) 基于步骤（3)中颜色的变化，确定所述样品中的氯霉素浓度。
[0007] 进一步的，所述的能够对氯霉素特异性识别的核酸适配体的DNA序列具有如SEQ IDNO;1所示的核巧酸序列。由此，可W进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测 的效率和灵敏度。
[000引进一步的，所述的核酸适配体的浓度为15nM。由此，可W进一步提高利用本发明方 法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0009] 进一步的，所述的阳离子聚合物选用PDDA。由此，可W进一步提高利用本发明方法 进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0010] 进一步的，所述的P孤A的浓度为15nM。由此，可W进一步提高利用本发明方法进 行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0011] 进一步的，所述的氯霉素浓度为0-10000nM。由此，可W进一步提高利用本发明方 法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0012] 进一步的，所述的氯霉素浓度为50-4000nM。由此，可W进一步提高利用本发明方 法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0013] 进一步的，基于下列线性方程，确定所述样品中氯霉素的浓度： Y=0. 305化0G(C)-0. 1282， (Y=Aew/Ag2。）为不同氯霉素浓度下紫外吸收值比率，C为相应氯霉素的浓度。由此，可W进一步提高利用本发明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0014] 根据本发明的实施例，基于体系的颜色变化，确定所述样品中的氯霉素浓度是通 过将所述体系的紫外可见吸收光谱与标准曲线进行比较而完成的，其中，所述标准曲线是 基于已知氯霉素浓度分别为 0nM、10nM、50nM、100nM、500nMUOOOnM、2000nM、4000 nM、6000nMUOOOOnM的标准样品进行平行实验而建立的。由此，可W进一步提高利用本发 明方法进行氯霉素浓度检测的效率和灵敏度。
[0015] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0016]图1是利用不同氯霉素浓度标准样品进行检测的吸收光谱图； 图2是利用不同氯霉素浓度标准样品进行检测所绘制的标准曲线图； 图3显示了根据本发明一个实施例的特异性分析图。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但不应理解为对本发明的 限制： 实施例1设计与合成相应的寡核巧酸片段 通过查阅相关文献，设计一段能够对氯霉素特异性识别的DNA片段，序列通过DNA合成 仪制备。
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