利用电化学检测的免疫测定的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于检测样品中的分析物的免疫测定，并且尤其是涉及电化学传感器 的免疫测定。
【背景技术】
[0002] 夹心（sandwich)测定形式因在样品中的分析物的免疫学检测而众所周知。在夹 心测定中，分析物被夹在固定在固相上的捕获抗体和游离在溶液中的标记的检测抗体之 间。夹心测定通常需要，在检测步骤以前洗掉多余的标记的检测抗体，以使待检测的信号产 生自抗体-分析物复合物而不是未结合试剂。
[0003] 减少为进行免疫测定所需要的步骤的数目（包括洗涤步骤）对于许多应用将是所 期望的。
【发明内容】
[0004] 本发明涉及以下免疫测定，在存在未结合试剂的情况下，其使用电化学传感器来 检测在样品中的分析物。
[0005] 本发明的第一方面提供了用于检测在样品中的分析物的方法，包括：
[0006] a)提供电化学传感器，包括：
[0007] 对照传感元件，
[0008] 检测传感元件以及
[0009] 磁体，相对于对照传感元件，其选择性地吸引磁珠到检测传感元件，
[0010] 其中在暴露于检测溶液之后，每个传感元件产生信号，其指示在检测溶液中并在 传感元件处存在的酶标记的量，
[0011] b)将电化学传感器暴露于检测溶液，
[0012] 其中检测溶液包含：
[0013] i)待测试分析物的存在的样品，
[0014] ii)检测抗体，附接于酶标记的该检测抗体与所述分析物反应，以及
[0015] iii)分离抗体，附接于磁珠的该分离抗体与所述分析物反应，
[0016] 使得在样品中存在分析物的情况下，在检测溶液中形成免疫复合物，其包含分析 物、检测和分离抗体、酶标记以及磁珠，以及
[0017] c)测量由检测和对照传感元件产生的信号，以及
[0018] d)由所述信号确定在检测溶液中并在检测传感元件和对照传感元件处酶标记的 量，
[0019] 其中相对于对照传感元件，在检测传感元件处酶标记的量的增加指示在样品中分 析物的存在或量。
[0020] 本发明的第二方面提供了用于检测在样品中的分析物的方法，包括：
[0021] (i)提供电化学传感器，其包括对照和检测传感元件以及磁体，相对于对照传感元 件，磁体选择性地吸引磁珠到检测传感元件，
[0022] 每个传感元件包括工作电极、对电极（反电极，counter electrode)、和可选的参 比电极，
[0023] 每个工作电极具有保持第一试剂和/或第二试剂的导电基质，上述第二试剂是用 于第一试剂的氧化剂或其前体；
[0024] 其中导电基质是导电含碳或含石墨基质或导电多孔基质以及在第一试剂和氧化 剂之间的反应是通过酶标记可催化的，从而提供在工作电极处的可检测信号；
[0025] (ii)将对照和检测传感元件暴露于检测溶液，其包含：
[0026] a)用于测试分析物的存在的样品，
[0027] b)检测抗体，附接于酶标记的该检测抗体与所述分析物反应，以及
[0028] c)分离抗体，附接于磁珠的该分离抗体与所述分析物反应，
[0029] 使得在样品中存在分析物的情况下，在检测溶液中形成免疫复合物，其包含分析 物、检测和分离抗体、酶标记、以及磁珠；以及
[0030] (iii)保持在检测和对照传感元件中在工作电极与对电极和/或参比电极（当存 在时）之间的电势；以及
[0031] (iv)测量在检测和对照传感元件中在测试和对照工作电极与对电极和/或参比 电极（当存在时）之间通过的电流，
[0032] 相对于在对照传感元件中在对照工作电极与对电极和/或参比电极（当存在时） 之间通过的电流的量，在检测传感元件中在工作电极与对电极和/或参比电极（当存在时） 之间通过的电流的量的增加指示在样品中分析物的存在或量。
[0033] 本发明的第三方面提供了用于检测在溶液中的分析物的电化学传感器，包括：
[0034] 对照传感元件，
[0035] 检测传感元件以及
[0036] 磁体，相对于对照传感元件，其选择性地吸引在溶液中的磁珠到检测传感元件，
[0037] 使得在暴露于溶液之后，每个所述传感元件产生信号，其指示在溶液中并在传感 元件处存在的酶标记的量。
[0038] 本发明的第四方面提供了如上所述的电化学传感器在用于检测分析物的方法中 的用途。
[0039] 本发明的第五方面提供了传感装置，包括：
[0040] 根据第三方面的电化学传感器，
[0041] 采样器，用于容纳来自个体的样品，以及可选地，将所述样品引入电化学传感器，
[0042] 电子阅读器，用于依据由电化学传感器的传感元件产生的信号来确定在样品中分 析物的量并提供指示所述量的输出。
[0043] 本发明的第六方面提供了用于检测分析物的试剂盒，包括：
[0044] 根据第三方面的电化学传感器或根据第四方面的传感装置，
[0045] 检测抗体，附接或可附接于酶标记的该检测抗体与所述分析物反应，
[0046] 分离抗体，附接或可附接于磁珠的该分离抗体与所述分析物反应；以及
[0047]可选的一种或多种缓冲剂或其它试剂。
【附图说明】
[0048] 图1是根据本发明的一些实施方式的检测的示意图。
[0049] 图2是如本文描述的传感元件的示意图。
[0050] 图3示出在缓冲液中辣根过氧化物酶（HRP)标记磁珠的检测。WE1是具有磁体的 传感元件以及电极2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0051] 图4示出借助于检测抗体在缓冲液中HRP标记磁珠的检测。WE1是具有磁体的传 感元件以及电极2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0052] 图5示出借助于比色检测的C反应蛋白（CRP)珠测定的结果。
[0053] 图6示出借助于洗涤和电化学检测，对于0. 0 y g/mL CRP珠测定的电流对时间的 瞬态。WE1是具有磁体的传感元件以及WE2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0054] 图7示出借助于洗涤和电化学检测，对于0. 23 yg/mL CRP珠测定的电流对时间的 瞬态。WE1是具有磁体的传感元件以及WE2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0055] 图8示出借助于洗涤和电化学检测的CRP珠测定。WE1是具有磁体的传感元件以 及WE2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0056] 图9示出借助于电化学检测，对于0. 0 y g/mL CRP珠测定（没有洗涤）的电流对 时间的瞬态。WE1是具有磁体的传感元件以及WE2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0057] 图10示出借助于电化学检测对于0? 23yg/mLCRP珠测定（没有洗涤）的电流对 时间的瞬态。WE1是具有磁体的传感元件以及WE2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
[0058] 图11示出借助于电化学检测并且没有洗涤的CRP珠测定。WE1是具有磁体的传感 元件以及WE2是没有磁体的传感元件（如图1所示）。
【具体实施方式】
[0059] 本发明涉及在免疫测定中电化学传感器用于检测在样品中的分析物的用途。
[0060] 电化学传感器可以用来定性或半定量地确定在配置传感器的环境中存在的分析 物的量。例如，可以将电化学传感器暴露于包含生物样品或其部分的检测溶液以检测在样 品或部分中分析物的存在和/或测量在样品或部分中分析物的量。
[0061] 在一些实施方式中，电化学传感器可以用来确定在样品中分析物的水平是处于生 理水平（即在健康受试者中预期的水平）还是临床水平（其是异常水平，或相关于疾病状 态的水平）。
[0062] 电化学传感器包括对照传感元件和检测传感元件。用于传感器的适宜的传感元件 描述于W02010/055306,其全部内容以引用方式结合于本文。
[0063] 在暴露于检测溶液之后，每个传感元件产生信号，其指示在检测溶液中并在传感 元件处存在的酶标记的量。例如，信号可以指示在由传感元件的电极限定的电解质空间中 的检测溶液中存在的酶标记的量。
[0064] 检测传感元件伴随有磁体，相对于对照传感元件，其将在检测溶液中的磁珠选择 性地吸引到检测传感元件。换句话说，相比于到对照传感元件，磁体将磁珠更强烈地吸引到 检测传感元件。优选地，磁体将在检测溶液中的磁珠吸引到检测传感元件并且并不吸引磁 珠到对照传感元件。
[0065] 可以根据电极的几何形状和间隔、电极传感器基板的厚度、和磁珠的尺寸来调节 磁体的强度以优化磁珠到检测传感元件的选择性吸引。在一些实施方式中，适宜的磁体可 以具有150至300g的强度，例如160、210、250或290g。
[0066] 用于如本文描述的电化学传感器的适宜的磁体可容易获自商业来源（例如 Supermagnete DE)并且包括镀镍（Ni-Cu-Ni)钕（NdFeB)磁体。
[0067] 如果分析物存在于样品中，那么此分析物将存在于检测溶液中。在检测溶液中，检 测和分离抗体结合于分析物。这种结合引起形成免疫复合物，其包含酶标记、磁珠和分析 物。因为它包含磁珠，所以磁体吸引上述免疫复合物到检测传感元件但并不到对照传感元 件。因此免疫复合物被选择性地吸引到检测电极，从而在免疫复合物中存在的酶标记有助 于由检测传感元件产生的信号而不是由对照传感元件产生的信号。因此，相对于来自对照 传感元件的信号，在检测溶液中分析物的存在引起来自检测传感元件的信号增加。
[0068] 相对于传感元件来定位磁体，以相对于对照传感元件，选择性地吸引磁珠到检测 传感元件。换句话说，磁体的位置产生在传感器中的磁场，其在检测传感元件处比在对照传 感元件处更强，使得相比于对照传感元件，磁珠被更强烈地吸引到检测传感元件。优选地， 定位磁体以在传感器中在检测传感元件处但不在对照传感元件处产生磁场，使得磁珠被吸 引到检测传感元件但不被吸引到对照传感元件。
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