一种禽白血病检测样品前处理的改进方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种禽白血病检测样品前处理的改进方法。
【背景技术】
[0002]近年来，禽白血病(ALV)的广泛发生与流行，给我国养鸡业造成了巨大经济损失。禽白血病的危害，主要表现为感染鸡群出现肿瘤病及慢性消耗性死亡、生长发育不良、生产性能下降和免疫抑制等。目前，禽白血病尚无商品化疫苗，也未见有特效治疗药物，控制禽白血病的主要措施是对现有的种鸡群进行检测、净化，及时淘汰阳性鸡。现阶段，禽白血病病毒检测方法主要有抗原、抗体ELISA、免疫荧光、PCR、斑点杂交和病毒分离等。禽白血病的检测是一项系统工程，影响因素较多，其中检测样品的前处理是个重要环节。检测样品的前处理其中心宗旨是充分释放寄生在机体细胞中的病毒，以提尚检测的灵敏性和准确性。检测的样品主要包括包括肛拭子、蛋清、外周血和病变组织等，国内现有的禽白血病检测样品前处理方法很难适应当前高通量、快速检测技术要求。_20°C冻融3次，至少需要40分钟，这对于大批量样品的快速检测带来了时间上的滞后，特别是I日龄的雏鸡，肛拭子要求在24小时一36小时内完成检测，给实际操作进度造成了很大困难；另外，_80°C条件下的冻融，需要价格昂贵的超低温冰箱或冰柜，而且实际运行成本也很高，这对于国内许多鸡场来说，仅为了禽白血病检测配备好几万元的硬件设施，难以切合实际。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种禽白血病检测样品前处理的改进方法，采用了该方法后不仅大大缩短了检测时间，而且还提高了检测的准确性。
[0004]本发明采用了以下技术方案:一种禽白血病检测样品前处理的改进方法，它包括以下步骤:步骤一，将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好；步骤二，将装有容器的指形管架放入密封箱内，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准；步骤三，注氮作业结束后，迅速将密封箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置1-3分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品；步骤四，将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36-38?水浴锅回温3-5分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在每分钟1000转的条件下离心30秒即可，这样就可以将检测样品用于检测。
[0005]所述的密封箱为泡沫箱。本发明步骤三中密封后静置的时间为I分钟。本发明步骤三中密封后静置的时间为2分钟。本发明步骤三中密封后静置的时间为3分钟。本发明步骤四中将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36°C水浴锅回温3分钟。本发明步骤四中将冻结后的检测样品迅速拿出后放入37°C水浴锅回温4分钟。本发明步骤四中将冻结后的检测样品迅速拿出后放入38°C水浴锅回温5分钟。
[0006]本发明具有以下有益效果:采用了以上技术方案后，本发明的技术方案为:首先将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好；其次将装有容器的指形管架放入密封箱内，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准；等注氮作业结束后，迅速将密封箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置1-3分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品；将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36-38?水浴锅回温3-5分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在每分钟1000转的条件下离心30秒即可，这样就可以将检测样品用于检测，这种处理方法用液氮来替代超低温冰箱或冰柜的超低温制冷、冻结样品环境，用适度大小、密封的泡沫箱盛装液氮来冻融检测样品，不但操作简单，只需提供日用的液氮保存和水浴回温条件，成本低，而且每批次样品可缩时30分钟即可满足后续检测手段能准确、高效地捕获到禽白血病病毒，科学性和实用性较强，不仅大大缩短了样品检测前处理时间，而且实际可操作性较强，特别适合在实验室检测条件一般的种鸡场应用推广。
【附图说明】
[0007]图1为本发明实施例二的流程图。
【具体实施方式】
[0008]下面通过以下实施例进一步说明本发明。
[0009]实施例一，本发明提供了一种禽白血病检测样品前处理的改进方法，它包括以下步骤:步骤一，将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好；步骤二，将装有容器的指形管架放入密封箱内，密封箱为泡沫箱，泡沫箱为大小适中，密封性能好的泡沫箱，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准；步骤三，注氮作业结束后，迅速将泡沫箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置I分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品；步骤四，将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36°C水浴锅回温3分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在每分钟1000转的条件下离心30秒即可，这样就可以将检测样品用于检测。
[0010]在图1中，实施例二，本发明提供了一种禽白血病检测样品前处理的改进方法，它包括以下步骤:步骤一，将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好；步骤二，将装有容器的指形管架放入密封箱内，密封箱为泡沫箱，泡沫箱为大小适中，密封性能好的泡沫箱，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准；步骤三，注氮作业结束后，迅速将泡沫箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置2分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品；步骤四，将冻结后的检测样品迅速拿出后放入37°C水浴锅回温4分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在每分钟1000转的条件下离心30秒即可，这样就可以将检测样品用于检测。
[0011]实施例三，本发明提供了一种禽白血病检测样品前处理的改进方法，它包括以下步骤:步骤一，将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好；步骤二，将装有容器的指形管架放入密封箱内，密封箱为泡沫箱，泡沫箱为大小适中，密封性能好的泡沫箱，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准；步骤三，注氮作业结束后，迅速将泡沫箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置3分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品；步骤四，将冻结后的检测样品迅速拿出后放入38°C水浴锅回温5分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在每分钟1000转的条件下离心30秒即可，这样就可以将检测样品用于检测。
【主权项】
1.一种禽白血病检测样品前处理的改进方法，它包括以下步骤: 步骤一，将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好； 步骤二，将装有容器的指形管架放入密封箱内，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准； 步骤三，注氮作业结束后，迅速将密封箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置1-3分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品； 步骤四，将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36-38?水浴锅回温3-5分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在离心速度为每分钟1000转的条件下离心30秒即可，这样就可以将检测样品用于检测。
2.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是所述的密封箱为泡沫箱。
3.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是步骤三中密封后静置的时间为I分钟。
4.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是步骤三中密封后静置的时间为2分钟。
5.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是步骤三中密封后静置的时间为3分钟。
6.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是步骤四中将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36°C水浴锅回温3分钟。
7.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是步骤四中将冻结后的检测样品迅速拿出后放入37°C水浴锅回温4分钟。
8.根据权利要求1所述的禽白血病检测样品前处理的改进方法，其特征是步骤四中将冻结后的检测样品迅速拿出后放入38°C水浴锅回温5分钟。
【专利摘要】本发明公开了禽白血病检测样品前处理的改进方法，一，将备检的肛拭子样品、蛋清样品或细胞病毒分离培养物样品放入容器中并进行标记，并将放入检测样品的容器在指形管架上排好；二，将装有容器的指形管架放入密封箱内，然后将充满的液氮罐快速向密封箱内注入液氮，注入液氮的量以溢满指形管架为准；三，注氮作业结束后，迅速将密封箱的箱盖盖上并用重物压在箱盖上进行密封，然后静置1-3分钟后，掀开箱盖既可以看到经过液氮彻底冻结的检测样品；四，将冻结后的检测样品迅速拿出后放入36-38℃水浴锅回温3-5分钟，最后将回温后的检测样品通过离心机在离心速度为每分钟1000转的条件下离心30秒即可，从而可以将检测样品用于检测。
【IPC分类】G01N1-28
【公开号】CN104792586
【申请号】CN201410432812
【发明人】范建华, 俞燕, 韦玉勇, 何友义, 高明燕, 徐步
【申请人】范建华, 江苏省家禽科学研究所
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2014年8月29日