同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明的实施方式涉及烟叶化学成分分析技术领域，更具体地，本发明的实施方 式涉及一种同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法。
【背景技术】
[0002] 烟草中含有数量众多、变化复杂的酚类化合物，其种类在烟叶和烟气中已鉴定出 的有280多种。按照酚类化合物中羟基数目的不同，可分为简单酚和多酚两类。简单酚在烟 草中的种类较多，但含量极微。多酚的种类相对来说较少，但含量高，也较为重要。这是因 为烟草中的多酚一般具有令人愉快的香气，在燃吸时由于干馏、氧化和裂解等作用，可产生 多种具有芳香气味的成分。多酚类物质在卷烟燃吸时还能产生酸性反应，中和烟气的部分 碱性，使卷烟的吃味醇和。研宄显示，烟草中多酚类物质的含量高低与烟叶的等级相一致， 与卷烟制品的等级也呈正相关，多酚类物质含量高的卷烟，其等级也越高，反之亦然。因此， 曾有学者提出将烟草中酚类物质含量与蛋白质氮含量的比值定义为"芳香值"，作为判断烟 草香、吃味的化学指标。目前，多酚类物质也是烟草科研工作者和卷烟企业的配方人员比较 关心的一类化学成分，对它的研宄越来越多，也越来越具体。
[0003] 烟草中的多酚主要有咖啡单宁类（新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸等）、黄酮类（芸 香苷和莰菲醇基-3-芸香糖苷等）和香豆素类（莨菪亭和莨菪灵等）等。绿原酸和芸香苷 是烟草中含量最高的两种多酚，新绿原酸和隐绿原酸是绿原酸的异构体。一些研宄显示，绿 原酸、芸香苷、新绿原酸和隐绿原酸是烤烟中含量最高的4种多酚，而且对卷烟的感官质量 有重要影响。莰菲醇基-3-芸香糖苷和芸香苷的结构非常相似，都是黄酮类芸香糖苷，在 烟草中的含量也比较高。莨菪亭是典型的香豆素类多酚，对烟叶和卷烟的品质也有重要影 响。因此，研宄能准确、快速地测定烟草中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪亭、芸香苷和莰 菲醇基-3-芸香糖苷的分析方法具有重要意义。超高效液相色谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography, UPLC)是Waters公司在2004年时推出的，其技术核心是在非常高 的压力下（其柱压最高可达到18, 000PSI)，通过降低固定相的粒度（可采用1. 7 μπι的色谱 柱填料），提高流动相线速度的方法，对复杂样品进行高效、快速的分离和分析。目前，采用 超高效液相色谱法同时测定烤烟中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪亭、芸香苷和莰菲醇 基-3-芸香糖苷6种多酚的分析方法尚未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明克服了现有技术的不足，提供一种利用超高效液相色谱法同时测定烤烟 中6种多酚含量的分析方法，解决新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪亭、芸香苷和莰菲醇 基-3-芸香糖苷6种多酚含量分析方法复杂和结果不准确的问题。
[0005] 为解决上述的技术问题，本发明的一种实施方式采用以下技术方案：
[0006] -种同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，它包括以下步骤：
[0007] (1)将烤烟烟叶干燥后粉碎，获得烟叶粉碎料；
[0008] (2)称取少量上述烟叶粉碎料，用甲醇溶液萃取后过滤，得到滤液；
[0009] (3)将所述滤液采用超高效液相色谱法进行分析获得烤烟烟叶的超高效液相色谱 图，其分析条件为：采用HSS T3色谱柱，其柱温为30°C，进样量为1 μ L ;流动相包括流动相 A和流动相Β，所述流动相的流速为0. 4mL/min ;所述流动相A为冰乙酸的水溶液，其冰乙酸 与水的体积比为2:100 ;所述流动相B为冰乙酸的甲醇溶液，其冰乙酸与甲醇的体积比为 2:100 ;梯度洗脱程序如下：
[0010]
【主权项】
1. 一种同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于它包括以下步骤： (1) 将烤烟烟叶干燥后粉碎，获得烟叶粉碎料； (2) 称取少量上述烟叶粉碎料，用甲醇溶液萃取后过滤，得到滤液； (3) 将所述滤液采用超高效液相色谱法进行分析获得烤烟烟叶的超高效液相色谱图， 其分析条件为：采用HSST3色谱柱，其柱温为30°C，进样量为1yL;流动相包括流动相A和 流动相B，所述流动相的流速为0. 4mL/min;所述流动相A为冰乙酸的水溶液，其冰乙酸与水 的体积比为2:100 ;所述流动相B为冰乙酸的甲醇溶液，其冰乙酸与甲醇的体积比为2:100 ; 梯度洗脱程序如下：
;紫外检测器采用二极管阵列检测器，其检测波长为342nm，其参比波长为480nm，检测 波长的带宽为4nm，参比波长的带宽为100nm; (4) 根据上述超高效液相色谱图，以保留时间定性，用外标法定量，获得烤烟烟叶中新 绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪亭、芸香苷和莰菲醇基-3-芸香糖苷共6种多酚的含量。
2. 根据权利要求1所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于步骤 (1)所述干燥是将烤烟烟叶在40°C下干燥8h，干燥后采用YC/T31 - 1996标准中规定的方 法测定烤烟烟叶的含水量，在步骤（4)计算烤烟烟叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪 亭、芸香苷和莰菲醇基-3-芸香糖苷共6种多酚的含量时排除水分对6种多酚含量的影响。
3. 根据权利要求1所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于步骤 (1) 所述烟叶粉碎料全部能够通过40目筛。
4. 根据权利要求1所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于步骤 (2) 所述萃取的方法是：将称取的烟叶粉碎料放入样品瓶，按照烟叶粉碎料的重量与甲醇 溶液的体积之比为〇. 095~0. 105g:50mL向上述样品瓶中加入甲醇溶液，所述甲醇溶液中 甲醇与水的体积比为1:4,然后将样品瓶放入超声波清洗器中萃取30~35min。
5. 根据权利要求4所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于所述 烟叶粉碎料的重量与甲醇溶液的体积之比为〇.lg:50mL。
6. 根据权利要求1所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于所述 HSST3 1.8ym色谱柱的尺寸为 2.1mmX100mm。
7. 根据权利要求1所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于所述 以保留时间定性和用外标法定量前，分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪亭、芸香苷 和莰菲醇基-3-芸香糖苷适量，用甲醇溶液溶解和稀释，所述甲醇溶液中甲醇与水的体积 比为1:4,配置成6种多酚的下述浓度的标准溶液，下述浓度均以yg/mL为计量单位：
将上述所有标准溶液分别采用步骤（3)所述的超高效液相色谱法进行分析，根据标准 溶液的浓度及色谱图的响应峰面积，建立标准溶液的线性工作曲线，该线性工作曲线用于 外标法定量。
8.根据权利要求1所述的同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，其特征在于步骤 (2)所述过滤是采用孔径为0. 22ym的水系滤膜过滤。
【专利摘要】本发明公开了一种同时测定烤烟中6种多酚含量的分析方法，先将烤烟烟叶粉碎后用甲醇溶液萃取，过滤后滤液用超高效液相色谱法进行分析，采用HSST3色谱柱和二极管阵列检测器，其检测波长为342nm，其参比波长为480nm，检测波长的带宽为4nm，参比波长的带宽为100nm；流动相的流速为0.4mL/min；流动相A为冰乙酸的水溶液，流动相B为冰乙酸的甲醇溶液，以梯度淋洗的方式同时测定了烤烟中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、莨菪亭、芸香苷和莰菲醇基-3-芸香糖苷这6种多酚的含量。本发明所述方法的加标回收率在95.6～109.3％之间，检出限为3.7～9.9μg/g，相对标准偏差为0.5～3.9％(n＝4)，标准溶液的相关系数均大于0.9995，而且方法的前处理简单，分析时间短。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104777256
【申请号】CN201510204399
【发明人】李力, 李东亮, 戴亚, 肖克毅
【申请人】川渝中烟工业有限责任公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月27日