一种稳心颗粒中挥发性成分的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中成药检测方法领域，尤其是涉及一种稳心颗粒中挥发性成分的检测 方法。
【背景技术】
[0002] 稳心颗粒作为常用抗心律失常中成药，主要由党参、黄精、三七和甘松等药材组 成，具有益气养阴，定悸复脉，活血化瘀之功效。国家批准文号为：Z10950026。主治：气阴 两虚兼心脉瘀阻所致的心悸不宁，气短乏力，头晕心烦，胸闷胸痛。适用于各种原因引起的 早搏、房颤、窦性心动过速等心律失常。临床应用疗效显著。除辅料外，方中主要成分为多 糖、皂苷和挥发性成分（甘松挥发油），2010版《中国药典》收载稳心颗粒项下，规定以党参、 三七和黄精进行鉴别，以三七皂苷R 1、人参皂苷RgJP Rb i的总含量来进行含量测定，对主要 来源于甘松的挥发性成分的规范并未涉及。甘松在方中为"使药"，且近年来在抗心律失常 方面的临床作用和药理机制报道较多，越来越受到关注。本发明在明确甘松在方中的"地 位"、解决面临的资源紧缺问题及对稳心颗粒方进行优化精简等方面具有十分重要的意义。
[0003] 顶空固相微萃取（head space-solid phase microextraction, HS-SPME)是 20世纪90年代兴起的一项新颖的样品前处理与富集技术，是在固相萃取（solid phase extraction，SPE)基础上发展起来的一种具有萃取速度快、操作简单、富集效率高、所需样 品少等特点的萃取分离技术。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种稳心颗粒中挥发性成分的检测方法，目的在于，用于稳心颗粒的 质量评价，并且为稳心颗粒中的挥发性成分质量控制有效地途径。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供的一种稳心颗粒中挥发性成分的检测方法，本 发明采用顶空固相微萃取技术提取稳心颗粒中的挥发性成分，并利用气相色谱-质谱联用 分析鉴定。
[0006] 本发明稳心颗粒中的挥发性成分的检测方法，其中所述顶空固相微萃取技术步骤 为，取稳心颗粒、饱和氯化钠水溶液，进行搅拌，插入萃取头，萃取时间25~35min，取出，将 萃取所得的挥发性成分，注入气相色谱仪进样口，进样口温度250°C，解吸时间4~6min，进 样模式为不分流进样，并利用气相色谱-质谱联用分析鉴定。
[0007] 优选的，所述的萃取头的型号为100 μ m PDMS。
[0008] 优选的，所述的萃取时间30min。
[0009] 优选的，所述的解吸时间5min。
[0010] 优选的，所述气相色谱-质谱联用分析鉴定条件为：色谱条件：HP-5MS， 60mX320 ymX0· 25ym ;载气：He，流量 0· 8mL/min ;汽化温度：25(TC ;接口温度：28(TC ;色 谱柱初始温度50°C，保持lmin，以10°C /min升温速率升至130°C，保持6min，以1°C /min升 温速率升至145°C，保持5min，以1°C /min升温速率升至160°C，保持3min，以3°C /min升 温速率升至220 °C，保持Imin ;
[0011] 质谱条件：电离方式：EI源，能量70eV ;离子源温度：230°C ;四极杆温度：150°C ; 质量扫描范围：35~800amu ;电子倍增器电压：1400V。
[0012] 进一步地，按照上述所建立的测定方法，测定稳心颗粒中挥发性成分得到的指纹 图谱，依照该方法生成的指纹图谱中有19个共有特征指纹峰，依次得到的保留时间为：1号 峰为 10. 78±0· 006min、2 号峰为：20· 42±0· 007min、3 号峰为：21· 03±0· 007min、4 号峰 为 21. 39±0· 007min、5 号峰为：22· 56±0· 008min、6 号峰为 23. 36±0· 009min、7 号峰为： 24. 71±0· 014min、8 号峰为：25· 23±0· 012min、9 号峰为：26· 11±0· 037min、10 号峰为： 27. 42±0· 022min、ll 号峰为：34· 80±0· 014min、12 号峰为：36· 09±0· 018min、13 号峰为： 37. 25±0· 035min、14 号峰为：37· 70±0· 048min、15 号峰为：40· 85±0· 262min、16 号峰为： 41. 19±0· 053min、17 号峰为：44· 29±0· 012min、18 号峰为：44· 64±0· 014min、19 号峰为： 60. 81 ±0. 008min。
[0013] 进一步地，按照上述所建立的测定方法，测定稳心颗粒中挥发性成分得到的指纹 图谱，依照该方法生成的指纹图谱中有19个共有特征指纹峰，其中1号峰为=Eucalypt 0I 桉叶素，2号峰为：δ -EIemene δ -榄香稀，3号峰为：a -Cubebene α -荜澄前油稀，4号峰 为：Tetracyclo [4. 4. I. 1 (7, 10) · 0 (2, 5) ] dodec-3-en-l 1_〇1，5 号峰为：a -Copaene α -胡 椒稀，6号峰为：β -Patchoulene β -广藿香稀，7号峰为：Cadinene杜松稀，8号峰为： (+)-Calarene 白菖稀，9 号峰为：（_)-Aristolene 马兜铃稀，10 号峰为：Caryophyllene 丁香稀，11号峰为：Spathulenol匙叶桉油稀醇，12号峰为：Globulol蓝桉醇，13号峰为： (-)-Spathulenol (-)-匙叶桉油稀醇，14 号峰为：Isoaromadendrene epoxide 异香授稀环 氧化物，15号峰为：Humulene epoxide2薄草稀环氧化物2,16号峰为：1，3a_Ethano (IH) inden-4-〇l，octahydro-2, 2, 4, 7a_tetramethyl-，17 号峰为：Widdrol 韦得醇，18 号峰为： Patchouli alcohol 广藿香醇，19 号峰为：4-(3, 3-Dimethyl-but-1-ynyl)-4-hydroxy-2, 6 ，6-trimethylcyclohex-2_enone〇
[0014] 本发明采用挥发性成分的定性定量分析，经过化学工作站处理及用面积归一化法 从总离子流图中计算各组分百分含量，并对总离子流图中各色谱峰计算其KI值，利用各色 谱峰对应的质谱图进行NIST08. L标准谱库检所确定各组分。经过多批次挥发性成分含量 测定，采用优选的气相色谱-质谱联用分析条件，对随机抽取的10批稳心颗粒进行分析，选 取代表峰进行统计处理。
[0015] 顶空固相微萃取（head space-solid phase microextraction, HS-SPME)具有萃 取速度快、操作简单、富集效率高的特点。
[0016] 本发明技术方案采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术 (HS-SPME-GC-MS)对稳心颗粒进行了提取与分析，共分离确定了 74个组分，占总峰面积的 80. 90 % 〇
[0017] 本发明采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术，对10批稳心颗粒进行了 提取与分析，选取了 19个代表峰进行相对含量统计，19个代表峰的相对面积之和不低于总 面积的40%。
[0018] 本发明的有益效果：
[0019] 本发明首次采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用法对稳心颗粒中挥发 性成分进行提取与分析，通过大量的实验研宄，优化了气相色谱条件-质谱条件。并对10 个批次的样品进行了含量考察，弥补了以往对稳心颗粒挥发性物质分析的不足，还构建了 稳心颗粒挥发性成分的GC/MS总离子流图。本发明采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱 联用技术对稳心颗粒进行了提取与分析，共分离鉴定出挥发性成分74个，占总挥发性成分 的80. 90 %。能比较客观反映稳心颗粒主要挥发性组分的化学成分及其含量，有效地表征稳 心颗粒挥发性成分的质量。并且，对随机抽取的10批稳心颗粒进行分析，选取分离度好、纯 度高的19个代表峰进行统计处理，结果发现，各个峰的保留时间和峰面积都比较稳定。这 也说明了本发明所建立的检测方法，具有良好的重现性和可靠性，为稳心颗粒中挥发性成 分的质量控制提供了可靠的途径。
【附图说明】
[0020] 图1是稳心颗粒中挥发性成分的GC-MS总离子流图。
[0021] 图2是10批次稳心颗粒中挥发性成分的GC-MS总离子流叠放图。
[0022] 图3是10批次稳心颗粒代表色谱峰相对含量结果。其中图3中19个 色谱峰所代表的化合物名称分别为I-Eucalyptol桉叶素，2- δ -EIemene δ -榄 香稀，3_ a-Cubebenea