龙加通络胶囊中薯蓣皂苷含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药制剂含量测定技术领域，涉及龙加通络胶囊中薯蓣皂苷含量的测 定方法。
【背景技术】
[0002] 龙加通络胶囊是天津世纪天龙药业有限公司生产的中药六类新药，该药具有活血 化瘀、益气通络的功效，临床用于中风病（轻中度脑梗塞）恢复期气虚血瘀证，症见半身不 遂，口舌歪斜，语言蹇涩或不语，偏身麻木，手足肿胀，舌暗或有瘀斑，苔薄白。临床疗效确 切，使用安全。
[0003] 龙加通络胶囊，专利【申请号】02156786. 7。发明名称：一种治疗中风的药物组合 物、其制备方法和应用。它是由穿山龙和刺五加或由穿山龙和刺五加浸膏制成。组方中穿山 龙属为薯截科植物穿龙薯截Makino,以根状莖入药，具有舒筋活络， 祛风止痛功效。刺五加为五加科植物刺五加Jca/?从se/?(ico>sw>s(Rupr.etMaxim.) Harms，以干燥根和根茎或茎入药，具益气健脾，补肾安神功效。
[0004]目前龙加通络胶囊在质量的控制上采用对薯蓣皂苷元进行测定，此方法须经酸 水解、萃取、调节pH等步骤，存在操作繁琐，检测时间长，易产生误差等问题。尚没有龙加 通络胶囊中薯蓣皂苷的定量测定方法。为了更好的控制龙加通络胶囊的质量，现对龙加通 络胶囊中的薯蓣皂苷含量进行测定，摸索建立了薯蓣皂苷的高效液相色谱一蒸发光散射 (HPLC-ELSD)测定法，从而完成了本发明。本法预处理操作简单，检测时间短，更适于大生产 的要求。
【发明内容】
[0005] 本发明建立了高效液相法测定龙加通络胶囊中薯蓣皂苷含量的方法，它是采用 DiamonsilC18 (1) (4.6mmX250mm，5um)色谱柱，流动相：乙腈-水（53-58:45);流 速：1.〇1111，111-1，设置温度 ：9〇1：，气流量：2.4171^11;柱温：351：。结果 ：薯蓣皂苷在 1. 03-6. 18吒范围内峰面积呈良好的线性关系，（r=0. 9998)，平均回收率100. 96%，RSD= 1. 97%。结论：本方法简便、准确、重现性好，可用于龙加通络胶囊中薯蓣皂苷的质量控制。
[0006] 为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容： 一种龙加通络胶囊的含量测定方法，其特征在于它是采用高效液相色谱一蒸发光散射 测定法，测定胶囊中薯蓣皂苷的含量，按如下的步骤进行： (1) 对照品溶液的制备：取薯蓣皂苷对照品约5mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用； (2) 供试品溶液的制备：龙加通络胶囊内容物研细，取约0. 5g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，备用； (3) 测定：分别精密吸取步骤（1)得到的对照品溶液10ul、20ul，步骤（2)提取的供试 品溶液7?20ul，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算含量。色谱条件： 反相高效液相色谱仪一蒸发光散射检测器检测，流动相乙腈与水的体积比为53-58:45，色 谱柱为DiamonsilC18 (1) (4.6mmX250mm，5ym)，流速为 1. 0 设置温度为 90°C，气体流速设置为2. 4L/min，柱温为35°C，理论板数以薯蓣皂苷峰计算应不低于4000 ; 每粒龙加通络胶囊含穿山龙按薯蓣皂苷（C27H42 03)计不得少于3mg。其中所述的超声处理指 的是：功率120W，频率40KHz，30分钟。
[0007] 本发明在对成品薯蓣皂苷含量测定的方法研究中，参考了 2010年版《中国药典》 一部（国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药出版社，2010: 250.)收载的穿山龙药材薯蓣皂苷含量测定方法，但因龙加通络胶囊为复方中药制剂，以药 典法203nm的紫外末端作为检测波长，基线不平，干扰大，使检测的灵敏度降低。故无法完 全按药典方法对龙加通络胶囊进行含量测定。
[0008] 本发明更加详细的制备方法及测定方法如下： 1仪器与试药 1.1仪器4§116拉1260高效液相色谱(美国安捷伦公司）411仏(* 200(^5￡1^0检 测器；9860D超声波清洗器(天津科贝尔光电技术有限公司）；电子分析天平(梅特勒-托利 多公司）。
[0009] 1.2试药薯蓣皂苷对照品(供含量测定用，批号111707-200501)由中国药品生 物制品检定所提供；乙腈(色谱纯，天津康科德科技有限公司）;其余试剂均为分析纯；市售。 龙加通络胶囊(本公司生产；规格：〇.45g/粒；批号：1312203,1312204,1312205)。
[0010] 2方法与结果 2. 1 色谱条件反相高效液相色谱仪一蒸发光散射检测器检测，流动相为乙腈-水 (53-58:45)，色谱柱为DiamonsilC18( 1 )(4. 6mmX250mm，5um)，流速为 1. 0ml.MinS 设置温度为90°C，气体流速设置为2. 4L/min，柱温为35°C，理论板数以薯蓣皂苷峰计算应 不低于4000。
[0011] 2. 2溶液的制备 2. 2. 1对照品溶液的制备取薯蓣皂苷对照品约5mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用； 2.2.2供试品溶液的制备龙加通络胶囊内容物研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量。超声处理(功率120W，频率40KHz)30分钟，放冷，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0012] 2. 2. 3阴性对照溶液的制备取缺穿山龙的处方药，按制备工艺制成阴性样品，按 供试品溶液处理方法制成阴性对照液。
[0013] 2. 3方法学考察 2. 3. 1专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液适量，注入液相 色谱仪，按"2. 1项"下色谱条件实验，结果表明供试品色谱中薯蓣皂苷色谱峰与其他成分 的色谱峰分离良好，且阴性样品溶液色谱峰未见干扰(见图1-3)。
[0014] 2.3.2 线性关系精密吸取薯蓣皂苷对照品溶液（0. 206mg/ml)5、10、15、 20、25、30yl，注入高效液相色谱仪，测定色谱峰面积，以峰面积对数值为纵坐标，进样量 (Ug)对数值为横坐标，绘制标准曲线。
[0015] 其回归方程：Y=l. 6784X+5. 7976g=0. 9998 结果表明，薯蓣皂苷在l.〇3~6. 18呢范围内线性关系良好。
[0016] 2.3.3精密度试验取"2. 2.1项"下配制的对照品溶液，重复进样6次，得薯蓣皂 苷峰面积RSD=0. 94%，结果表明本方法精密度较好。
[0017] 2.3.4稳定性试验取同一制备样品溶液(批号1312203)，分别于0、2、4、6、8、 12、24、26、28小时进样测定，RSD=1. 1% (n=9)，结果表明供试品溶液在28小时内含量稳 定。
[0018] 2. 3. 5重复性试验取上稳定性试验同批样品，按"2. 2. 2项"下方法制备6份 样品溶液，按"2. 1项"下色谱条件分别测定，结果该批样品每粒中含薯蓣皂苷的平均值为 3. 58mg，RSD=1. 71% (n=6)，表明所用方法重复性好。
[0019] 2.3.6加样回收率试验取已知准确含量的样品适量，共6份，精密称定，分别精 密加入对照品，按"2. 2. 2项"下方法，制备供试液，依"2. 1项"下色谱条件测定，计算加样回 收率（％ )，试验结果表明平均回收率为100. 96%，RSD为1. 97%。所采用的测定方法准确。
[0020] 2. 4样品含量测定取龙加通络胶囊3批，分别按"2. 2. 2项"下方法制备样品溶 液，依"2. 1项"下方法测定，计算出每1粒中薯蓣皂苷的平均含量，结果见下表。
【主权项】
1. 一种龙加通络胶囊中薯蓣皂苷含量的测定方法，其特征在于它是采用高效液相色谱 一蒸发光散射测定方法，测定胶囊中薯蓣皂苷的含量，按如下的步骤进行： (1) 对照品溶液的制备：取薯蓣皂苷对照品约5mg，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用； (2) 供试品溶液的制备：龙加通络胶囊内容物研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，备用； (3) 测定：分别精密吸取步骤（1)得到的对照品溶液10ul、20ul，步骤（2)提取的供试 品溶液7?20ul，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算含量； 色谱条件：反相高效液相色谱仪一蒸发光散射检测器检测，流动相乙腈与水的体积比 为 53-58:45,色谱柱为 Diamonsil C18(l)(4.6 mmX250 mm，5 iim)，流速为 1.0 设置温度为90°C，气体流速设置为2. 4L/min，柱温为35°C，理论板数以薯蓣皂苷峰计算应 不低于4000 ;每粒龙加通络胶囊含穿山龙按薯截阜苷（C27H4203)计不得少于3mg。
2. 权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述的超声处理指的是：功率120W，频 率40KHz，30分钟。
【专利摘要】本发明公开了龙加通络胶囊中薯蓣皂苷含量的测定方法。它是样品以甲醇超声提取,采用Diamonsil C18（1）（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（53-58:45）；流速：1.0ml?Min-1，设置温度：90℃，气流量：2.4L/min；柱温：35℃。结果：薯蓣皂苷在1.03-6.18μg范围内峰面积呈良好的线性关系，(r=0.9998)，平均回收率100.96%，RSD＝1.97%。本发明建立了高效液相色谱一蒸发光散射检测法(HPLC—ELSD)对成品中薯蓣皂苷进行含量测定的方法，克服了在紫外末端检测时流动相带来的干扰，所得图谱基线平直，灵敏度高，与杂质有很好的分离度，提高了方法的专属性，测定结果更为准确。
【IPC分类】G01N30-89
【公开号】CN104614482
【申请号】CN201410726072
【发明人】任为之, 王现昌, 于丽云, 李云鹏, 段丽萌, 王顺先
【申请人】天津世纪天龙药业有限公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2014年12月4日