专利名称：用于消除在对白蛋白进行测定时血红蛋白干扰的方法
技术领域：
本发明涉及一种采用光学测量对含有游离的血红蛋白的试样中的白蛋白进行测定的方法。
已知对血清和血浆中的白蛋白进行的非免疫的测定(例如采用溴甲酚绿方法)将受到血红蛋白(Hb)和与血红蛋白类似的化合物的干扰，其中由于该干扰物质的存在，因而所获得的白蛋白值将被虚假地增大。其原因在于血红蛋白与色素的反应，从而使血红蛋白(Hb)的数量被当成了白蛋白(Doumas等，临床化学学报(Clin.Chim.Acta)31,87-96页(1971年))。
在专利说明书EP 0268 025 B1中指出，通用的两点测量并不能消除白蛋白测试的Hb干扰。而且建议，根据溶血度与测量误差的关系求出修正系数并借助此修正系数(在单独测定溶血度后)对针对某样品获得的具有误差的白蛋白结果进行计算修正。
Jay和Provasek(临床化学(Clin.Chem.)39/9,1804～1810页(1993年)指出，在其实验室内对可检测的溶血试样单独测定该试样的血红蛋白含量并采用计算机程序对分析测定的(虚假的)结果进行计算修正。接着在分析化验的结果中反映出此修正的量度。
在公开说明书DE 44 274 92 A1中记载了另外一种用于修正血红蛋白对白蛋白测定干扰的方法。在这里不对溶血度单独进行测定，这是因为可以由前置于固有的主反应的前置反应推导出该溶血度。根据所谓的Rateplus方法，将利用求出的溶血度与干扰程度的关系对在主反应中获得的测量结果进行计算修正。
采用迄今所述的、用于消除在测定白蛋白时血红蛋白干扰的方法时一般需要对分析结果计算修正一个与血红蛋白含量相应的数值。对血红蛋白含量及溶血度或者通过单独测量(例如通过多波长分析或独立的方法)求出或者通过前置反应推导出，其中总是需要双试剂试验。
但目前经常采用的是利用单试剂的单点测量形式白蛋白的测定，其中通过试样与试剂的混合开始颜色反应(例如Fa.Boehringer MannheimGmbH的白蛋白-试剂)。这种测定的优点是除了操作简单外，而且成本低廉。但消除血红蛋白的干扰是昂贵的，不管是单试剂和对血红蛋白含量单独求出，还是双试剂试验和省去单独求出血红蛋白含量。在任何情况下都需要接着对所获得的分析结果进行计算修正。
另外在对含有血红蛋白的血清-或血浆试样进行测定时主反应(白蛋白与试剂)被干扰反应(血红蛋白与试剂)和伴随干扰反应的血红蛋白吸收信号的递减所叠加。另外依赖于所采用的白蛋白试剂，无论是主反应还是干扰反应的吸收光谱都是不同的。
意外地发现，干扰反应对主反应结果的影响与所采用的测量波长组合有关并且另外也与反应时间有关。
消除在测定白蛋白时的血红蛋白干扰因而是很复杂的，这是因为在这里涉及的不是通常定义的干扰信号，这种通常定义的干扰信号通过简单的双色测量或通过简单的试样空白值的测量可被消除。确切地说，干扰物质，即自然的、交联的、聚合的或重组制得的血红蛋白本身直接与试剂进行反应。所以必须探寻可以将该干扰反应明确地与固有的主反应区分开的测量波长组。
该任务的解决方案是在进行双色测量时，改变测量波长组，即主测量波长和副测量波长。意外地发现，在改变波长组时由试样中含有的游离的血红蛋白引起的测量误差基本上受到抑制(参见
图1、3、4、5、7、8、10和11)。在采用通常不位于试验试剂吸收最大值处的波长组时，含有血红蛋白的试样的测量信号与时间相关进行变化，而不含有血红蛋白的试样的测量信号基本保持恒定不变。
但在通常测定白蛋白时采用的波长组，即主波长600纳米和副波长700纳米时是观察不到此效应的。在这种情况下对应于不含有血红蛋白的试样，含有血红蛋白的试样将有很大的测量误差(参见图2、6和9)。
故本发明的主题是一种采用至少两个波长通过光学测量对含有游离的血红蛋白的试样中的白蛋白进行测定的方法，其特征在于
(a)在采用第一测量波长时存在有其大小足以测定的白蛋白测量信号，(b)在采用第二测量波长时(ⅰ)不存在白蛋白的测量信号或(ⅱ)存在有比在采用第一测量波长时的测量信号更小的白蛋白的测量信号和(c)在采用第一和第二测量波长时存在有一个可比较的强干扰信号，该干扰信号是由于血红蛋白与为测定白蛋白所采用的试剂进行反应产生的并且随时间变化。
实施本发明方法时，采用一个测量波长组，其中在第一测量波长时存在有一个其大小足以测定的白蛋白测量信号。这里要说明的是，第一测量波长不必位于所采用的试验试剂的吸收最大值处，而是优选甚至在吸收最大值以外。在第二测量波长时存在有一个白蛋白的测量信号，该测量信号明显小于第一测量波长的信号。优选第一测量波长的测量信号比第二测量波长的测量信号至少大20mE并且特别优选至少大50mE。
另外在第一和第二测量波长时有一个可比较的强干扰信号，该干扰信号随时间而变化。所以在进行单点测量时优选选定的测量点应使在第一和第二测量波长的由血红蛋白与试验试剂反应导致的干扰信号相等或近似相等。
在进行多点测量时，例如两点测量时(进行试样空间试验值和分析值测量的双试剂试验)优选选定的测量点应使在考虑到由各个试剂的吸移体积产生的稀释因素时，在测量时间点上，例如在第一和第二测量时间点上的干扰信号大小相等或近似相等。尽管也可以进行动态测量，但优选以终点测量形式进行多点测量。
根据本发明的方法采用通过色素反应的光学测量进行白蛋白含量的测定。优选采用溴甲酚绿或溴甲酚红紫方法进行白蛋白含量的测定。
通过研究，迄今对采用溴甲酚绿方法和丁二酸盐缓冲剂进行的对白蛋白的测定求出三个优选的测量波长组。在第一个优选的实施方式中，采用第一测量波长560至600纳米，尤其是560至580纳米，特别优选570±5纳米和最优选约570纳米并且采用第二测量波长540至552纳米、特别优选546±5纳米和最优选约546纳米进行测定。
在本发明的第二优选实施方式中采用第一测量波长640至680纳米，特别优选660±5纳米和最优选约660纳米和采用第二测量波长470至490纳米，特别优选480±5纳米和最优选约480纳米。
在本发明的第三个优选实施方式中采用第一测量波长620至640纳米，特别优选630±5纳米和最优选630纳米和采用第二测量波长590至610纳米，特别优选600±5纳米和最优选约600纳米。
在采用溴甲酚绿方法和柠檬酸盐缓冲剂测定白蛋白时优选采用第一测量波长560至580纳米，特别优选570±5纳米和最优选约570纳米和采用第二测量波长490至520纳米，特别优选505±5纳米和最优选约505纳米。
在采用其它试剂或/和其它缓冲物质时专业人员可以通过简单的试验，例如对二极管阵列谱和与时间相关的吸收测量判定其它相宜的波长组。
利用该波长组以意想不到的方式通过对含有血红蛋白的试样的测量获得试样中的白蛋白浓度至少基本上不虚假的值，对该值不必接着进行计算修正。采用本发明的方法可以实现在100±10％和优选在100±5％范围内的白蛋白再显率，尤其对约3.5克/dl的下限医疗决定范围内的白蛋白值。
可以通过简单的前置试验由描述反应变化的吸收/时间曲线图推导出适用于本发明方法的最佳反应时间，该最佳反应时间一般在0.2-10分钟。在丁二酸盐缓冲剂中采用溴甲酚绿方法测定白蛋白时对一个含有由溶血产生的血红蛋白的试样确定出，在采用波长组(a)进行测量时测量信号在反应时间1-10分钟内基本保持不变，从而可以在该范围内的任意时间点或必要时也可以在此时间后进行测量。
对含有作为血代用剂的交联的血红蛋白，例如双阿司匹灵-交联的(DCL)血红蛋白的试样，在波长组(a)时优选在反应时间3-10分钟后，特别优选5-7分钟后和最优选约6分钟后用单试剂进行单点测量。采用波长组(b)时与此相反优选在反应时间1-4分钟后，特别优选在2-3分钟后在最优选在反应开始后约2.5分钟进行测量。
对含有作为血代用剂的重组制得的血红蛋白试样在采用波长组(a)时优选在反应时间1-3分钟后，特别优选在1-2分钟后和最优选在约1.5分钟后用单试剂进行单点测量。在采用波长组(b)时优选在反应时间1-4分钟后进行单点测量。
在柠檬酸盐缓冲剂中采用溴甲酚绿方法对白蛋白测定时对含有DCL-血红蛋白的试样在用单试剂时优选在20至90秒后和特别优选在30至60秒后进行分析值测量并且在采用双试剂试验时优选在加入试剂2(启动试剂)后0.2至5分钟进行分析值测量。
而且在采用溴甲酚红紫方法对白蛋白测定时可以求出两个优选的可以在很大程度上消除由试样中游离的血红蛋白造成的干扰的测量波长组。在第一优选的实施方式中，采用第一测量波长560至580纳米，特别优选570±5纳米和最优选约570纳米进行测定并且采用第二测量波长490至520纳米，特别优选505±5纳米和最优选约505纳米进行测定。
在本发明的第二个优选的实施方式中采用第一测量波长560至580纳米，特别优选570±5纳米和最优选约570纳米并且采用第二测量波长540至552纳米，特别优选546±5纳米和最优选约546纳米。
对含有作为血代用剂的交联的血红蛋白，例如DCL-血红蛋白的试样，在进行双试剂试验时优选在加入试剂2(启动试剂)后0.2至8分钟，特别优选约5分钟进行分析值测量。在采用第一波长组(570/546纳米)时优选在将试剂1加入试样后1-4分钟，特别优选约2.5分钟后进行试样空白试验值测量，在采用第二波长组时优选在将试剂1加入试样后0.2至4分钟，特别优选0.2至1分钟并且最优选约0.5分钟进行试样空白试验值测量。
本发明方法的关键是主测量波长和副测量波长的新型组合。但对不同的血红蛋白种类在不同的最佳测量时间点的测量也将进一步减小测量误差。
采用此方式可以不必对血红蛋白含量或溶血度进行附加测定并且不必接着对血红蛋白导致误差的分析结果进行计算修正，仅在一个测量步骤中，即作为单点测量首次实现了正确的白蛋白含量的测定。另一主要的优点是，也可以采用单试剂实现对精确的白蛋白值的测量。伴随此点的是明显的操作和成本优点。
另外也可以采用双试剂试验，但不必非采用此方式不可，但通过本发明对双试剂试验实现的优点是，可以不必测定溶血度以及接着对由于血红蛋白导致的虚假的白蛋白测量值进行计算修正。
通常采用血清或血浆试样作为含有血红蛋白的试样。其中要指出的是，本发明定义的名称“游离的血红蛋白”既涉及溶血的试样，又涉及那些加入有作为血代用剂的类似血红蛋白的化合物，例如人-或牛的血红蛋白的经改性的、聚合的或/和交联的衍生物，例如双阿司匹灵交联的(DCL)血红蛋白，或重组制得的血红蛋白的样品。
另外优选在一台自动分析仪上实施本发明方法。相适用的自动分析仪例如是伯林格曼海姆/日立717(Boehringer Mannheim/Hitachi 717)仪表。
下面将对照附图和实施例对本发明加以说明。
图中示出图1根据本发明在交联的血红蛋白(DCL-Hb)存在的情况下采用测量波长组546/570纳米(丁二酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测定时的测量信号与时间关系曲线；图2根据已有技术在交联的血红蛋白(DCL-Hb)存在的情况下采用测定波长组700/600纳米(丁二酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测定时的测量信号与时间关系曲线；图3根据本发明在重组制得的血红蛋白存在的情况下采用测量波长组546/570纳米(丁二酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测定时的测量信号与时间关系曲线；图4根据本发明在溶血产生的血红蛋白存在的情况下采用测量波长组546/570纳米(丁二酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；图5根据本发明在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组480/660纳米(丁二酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；图6根据已有技术在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组700/600纳米(柠檬酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；
图7根据本发明在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组505/570纳米(柠檬酸盐缓冲剂)用单试剂对白蛋白测量时测量信号与时间关系曲线；图8根据本发明在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组505/570纳米(柠檬酸盐缓冲剂)用双试剂试验对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；图9根据已有技术在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组700/600纳米用双试剂试验按照溴甲酚红紫方法对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；图10根据本发明在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组505/570纳米用双试剂试验按照溴甲酚红紫方法对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；图11根据本发明在DCL-血红蛋白存在的情况下采用测量波长组546/570纳米用双试剂试验按照溴甲酚红紫方法对白蛋白测定时测量信号与时间关系曲线；图12用于采用单试剂(丁二酸盐缓冲剂)对白蛋白进行测定的二极管阵列谱和图13用于采用单试剂(柠檬酸盐缓冲剂)对白蛋白进行测定的二极管阵列谱。
例1在丁二酸盐缓冲剂中根据溴甲酚绿方法(Doumas等，临床化学学刊(Clin.Chim.Acta)，1971年第31期，87-96页)用单试剂对白蛋白进行测定。作为试剂采用的是丁二酸盐缓冲剂75毫摩尔/升，pH4.2；0.15毫摩尔/升溴甲酚绿。
试验过程如下对3微升样品加入350微升试剂，然后确定出与时间相关的测量信号(mE)曲线。
在Boehringer Mannheim/Hitachi 717分析仪中采用测量波长组700/600纳米(已有技术)以及546/570纳米或480/660纳米(本发明)进行该测定。
在图1中示出波长组为546/570纳米时并且在图2中示出波长组为700/600纳米时的不含有血红蛋白的试样、具有1000毫克/dl交联的血红蛋白的试样和具有2000毫克/dl交联的血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。
从图中可以看出，在波长组为546/570纳米时对含有血红蛋白的试样，随着反应时间的加长测量信号递减，而对不含有血红蛋白的试样测量信号基本保持恒定不变。测量信号与不含血红蛋白的试样的信号相符时的优选反应时间约为5-7分钟。如图2所示，在采用波长组为700/600纳米时不管是不含血红蛋白试样的信号还是含有血红蛋白的试样的信号都基本保持恒定不变。
表1中列举了具有不同的血红蛋白含量的试样中白蛋白含量再显百分率。在根据已有技术测量波长组为700/600纳米(在反应时间80秒后测量)时随着血红蛋白含量的增加，测量值虚假增大。与此相反，在采用本发明的测量波长组546/570纳米(在反应时间340秒后测量)和480/660纳米(在反应时间140秒后测量)时，实现了不受试样血红蛋白含量影响的再显率100±2％。
图3示出波长组为546/570纳米时，对不含有血红蛋白以及含有1000及2000毫克/dl重组制得的血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。优选的反应时间约为1-2分钟。
图4示出对不含有血红蛋白以及含有由溶血产生的1000毫克/dl血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。
图5示出采用本发明的测量波长组480/660纳米时，对不含有血红蛋白以及含有1000毫克/dl及2000毫克/dl血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。优选的含有交联的血红蛋白的试样的测量信号与不含有血红蛋白的信号相符的反应时间约为1-3分钟。
对含有由溶血产生的血红蛋白或重组制得的血红蛋白的试样，在采用本发明的波长组480/660纳米时同样可以实现良好去干扰的结果。例2在柠檬酸盐缓冲剂(95毫摩尔/升，pH 4.1；0.11毫摩尔/升溴甲酚绿；洗涤剂)中根据溴甲酚绿方法用单试剂测定白蛋白。
试验过程如例1所述。采用测量波长组700/600纳米(已有技术)和505/570纳米(本发明)以及测量时间点反应开始后80秒(已有技术)和40-60秒，(本发明)优选反应开始后50秒(本发明)进行测定。图6和图7分别示出采用波长组700/600纳米和采用波长组505/570纳米时，对不含有血红蛋白、含有1000毫克/dl交联的血红蛋白和含有2000毫克/dl交联的血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。
从图中可以看出，在采用本发明的波长组505/570纳米时随着反应时间的加长含有血红蛋白的试样的测量信号递减，而对不含有血红蛋白的试样的测量信号基本保持恒定不变。优选的测量信号与不含有血红蛋白的试样的信号相符的反应时间约为20-90秒。
表2中列出具有不同的血红蛋白含量的试样中白蛋白含量的再显百分率。在采用本发明的测量波长组505/570纳米(在反应时间60秒后测量)实现了不受试样的血红蛋白含量影响的再显百分率100±5％，而在采用用已有技术的测量波长组700/600纳米时，随着血红蛋白含量的增多产生严重测量值虚假。
对含有由溶血产生的或重组制得的血红蛋白的试样，在采用本发明的波长组时同样能产生良好的去干扰效果。例3在柠檬酸盐缓冲剂中根据溴甲酚绿方法采用双试剂试验进行白蛋白测定。作为试剂采用试剂1柠檬酸盐缓冲剂95毫摩尔/升，pH 4.1；洗涤剂试剂2柠檬酸盐缓冲剂95毫摩尔/升，pH 4.1；0.66毫摩尔/升溴甲酚绿；洗涤剂试验过程如下对3微升试样加入250微升试剂1并在约4.5分钟后测出试样空白试验值E1。接着加入50微升试剂2并且在0.5分钟后测出分析测量值E2。另外在整个时间测定测量信号的时间关系曲线。在伯林格曼海姆/日立717分析仪上采用测量波长组505/570纳米(本发明)进行测量。在例2中提及的、采用测量波长组700/600纳米(已有技术)时的单试剂作为对照物。
图8中示出采用本发明的波长组505/570纳米时对不含有血红蛋白的、含有1000毫克/dl交联的血红蛋白的和含有2000毫克/dl交联的血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。
从图中可以看出，采用波长组505/570纳米时含有血红蛋白的试样的测量信号有递减。选定的优选测量点应使在考虑到由吸移体积的稀释因素的情况下在两个测量点上的由血红蛋白造成的干扰信号的程度相同。所以优选在对试样加入试剂1后约4.5分钟测出E1(试样空白试验值)和在对试样加入试剂2后约0.5分钟测出E2(分析值)。
在表3中列出具有不同的血红蛋白含量的试样中的白蛋白含量的再显百分率。采用本发明的测量波长组505/570纳米时实现了不受试样的血红蛋白含量影响的再显率100±2％，而在采用根据已有技术的测量波长组700/600纳米时随着血红蛋白含量的增多产生严重测量值虚假。
对含有由溶血产生的血红蛋白或重组制得的血红蛋白的试样，在采用本发明的波长组时同样可以实现良好的去干扰的效果。例4根据溴甲酚红紫方法采用双试剂试验并利用二点测量进行白蛋白测定。作为试剂采用试剂1乙酸盐缓冲剂100毫摩尔/升，pH5.3；洗涤剂试剂2乙酸盐缓冲剂100毫摩尔/升，pH5.3；洗涤剂526微摩尔/升溴甲酚红紫试验过程如下对3微升试样加入250微升试剂1并在约2.5分钟后测出试样空白试验值E1。接着加入150微升试剂2并在约5分钟后测出分析测量值E2。另外在整个时间测定出测量信号的时间关系曲线。
在Boehringer Mannheim/Hitachi 717分析仪中采用测量波长组700/600纳米(已有技术)以及505/570纳米或546/570纳米(本发明)进行该测定。
在图9、10、11中分别示出在采用波长组700/600纳米时、采用波长组505/570纳米时和采用波长组546/570纳米时对不含有血红蛋白、含有1000毫克/dl交联的血红蛋白和含有2000毫克/dl交联的血红蛋白的试样的测量信号的时间关系曲线。
从图中可以看出，在采用波长组700/600纳米时在加入试剂2后由血红蛋白造成的信号递增大于加入试剂2前由血红蛋白造成的信号递增。要指出的是，血红蛋白本身参加与溴甲酚红紫的反应并因此使白蛋白的测定受到干扰。含有血红蛋白的试样的测量信号与不含有血红蛋白的试样的测量信号在加入试剂2前以及加入试剂2后都保持几乎恒定不变。
与此相反，在采用本发明波长组505/570纳米时随着反应时间的加长，含有血红蛋白的试样测量信号将递减，而不含有血红蛋白的试样的信号基本保持恒定不变。为避免由血红蛋白造成的干扰，选定的优选反应时间点应使在考虑到稀释因素的情况下由血红蛋白造成的干扰信号在加入试剂2前与加入试剂2后都是相同的或近似相同。所以在例4中在对试样加入试剂1后约2.5分钟(505/570纳米)及0.5分钟(546/570纳米)测出E1，并且对于两个波长组都在加入试剂2后约5分钟测出E2。
在表4中列出具有不同血红蛋白含量的试样中白蛋白含量的再显百分率。在采用本发明测量波长组505/570纳米和546/570纳米时实现了不受试样的血红蛋白含量影响的再显率100+4％，而在采用已有技术波长组700/600纳米时将随着血红蛋白含量的增多产生严重测量值虚假。
对含有由溶血产生的血红蛋白或重组制得的血红蛋白的试样，在采用本发明的波长组时同样可以实现良好的去干扰效果。例5图12和13示出在丁二酸盐缓冲剂及柠檬酸盐缓冲剂中根据溴甲酚绿方法采用单试剂测定白蛋白的取决于波长的二极管阵列谱。试样1是具有0.9％NaCl的对照物。试样2是血清+NaCl并且试样2是血清+交联的血红蛋白。反应时间分别为90秒。
从图12可以看出，除了在例1中给出的优选的波长组546/570及480/660纳米还有另一波长组600/630纳米也是适宜的。表1白蛋白溴甲酚绿方法(丁二酸盐缓冲剂)血红蛋白(DCl-Hb)的影响
*分析仪伯林格曼海姆/日立717表2白蛋白溴甲酚绿方法(柠檬酸盐缓冲剂)血红蛋白(DCl-Hb)的影响
测量仪伯林格曼海姆/日立911表3白蛋白溴甲酚绿方法(柠檬酸盐缓冲剂)血红蛋白(DCl-Hb)的影响
*测量仪伯林格曼海姆/日立717表4白蛋白溴甲酚红紫方法血红蛋白(重组制得的血红蛋白)的影响<
>*测量仪伯林格曼海姆/日立71权利要求
1．在至少二个波长下通过光学测量测定在含有游离的血红蛋白的试样中白蛋白的方法，其特征在于(a)在采用第一测量波长时存在有其大小足以测定的白蛋白测量信号，(b)在采用第二测量波长时(ⅰ)不存在白蛋白的测量信号或(ⅱ)存在有比采用第一测量波长时的测量信号更小的白蛋白测量信号和(c)在采用第一和第二测量波长时存在有一个可比较的强干扰信号，该干扰信号是由于血红蛋白与为测定白蛋白而采用的试剂进行反应产生的并且随时间而变化。
2．按照权利要求1的方法，其特征在于以单点测量形式进行测定。
3．按照权利要求2的方法，其特征在于选定测量时间点，以使由血红蛋白与试剂反应产生的干扰信号在采用第一测量波长和采用第二测量波长时相同或近似相同。
4．按照权利要求1的方法，其特征在于以两点测量或多点测量形式进行测定。
5．按照权利要求4的方法，其特征在于测定测量时间点，以使在考虑到稀释因素的情况下在测量时间点上的由血红蛋白造成的干扰信号是相同的或近似相同。
6．按照权利要求1至5中任一项的方法，其特征在于采用溴甲酚绿方法在丁二酸盐缓冲剂中进行白蛋白的测定。
7．按照权利要求6的方法，其特征在于(a)采用第一测量波长560-580纳米和采用第二测量波长540-552纳米，(b)采用第一测量波长640-680纳米和采用第二测量波长470-490纳米或(c)采用第一测量波长620-640纳米和采用第二测量波长590-610纳米，进行测定。
8．按照权利要求7的方法，其特征在于(a)采用第一测量波长570±5纳米和采用第二测量波长546±5纳米，(b)采用第一测量波长660±5纳米和采用第二测量波长480±5纳米，(c)采用第一测量波长630±5纳米和采用第二测量波长600±5纳米，进行测定。
9．按照权利要求8的方法，其特征在于(a)采用第一测量波长约570纳米和采用第二测量波长约546纳米，(b)采用第一测量波长约660纳米和采用第二测量波长约480纳米或(c)采用第一测量波长约630纳米和采用第二测量波长约600纳米，进行测定。
10．按照权利要求1至5中任一项的方法，其特征在于采用溴甲酚绿方法在柠檬酸盐缓冲剂中进行白蛋白的测定。
11．按照权利要求10的方法，其特征在于采用第一测量波长560至580纳米和采用第二测量波长490至520纳米进行测定。
12．按照权利要求11的方法，其特征在于采用第一测量波长570±5纳米和采用第二测量波长505±5纳米进行测定。
13．按照权利要求12的方法，其特征在于采用第一测量波长约570纳米和采用第二测量波长约505纳米进行测定。
14．按照权利要求1至5中任一项的方法，其特征在于采用溴甲酚红紫方法进行白蛋白测定。
15．按照权利要求14的方法，其特征在于(a)采用第一测量波长560至580纳米和采用第二测量波长490至520纳米或(b)采用第一测量波长560至580纳米和采用第二测量波长540至552纳米进行测定。
16．按照权利要求15的方法，其特征在于(a)采用第一测量波长570±5纳米和采用第二测量波长505±5纳米或(b)采用第一测量波长570±5纳米和采用第二测量波长546±5纳米进行测定。
17．按照权利要求16的方法，其特征在于(a)采用第一测量波长约570纳米和采用第二测量波长约505纳米或(b)采用第一测量波长约570纳米和采用第二测量波长约546纳米进行测定。
18．按照权利要求1至17中任一项的方法，其特征在于在反应时间0.5至10分钟后进行测量。
19．按照权利要求1至18中任一项的方法，其特征在于对含有来自溶血的血红蛋白的试样进行测定。
20．按照权利要求1至18中任一项的方法，其特征在于对含有交联的血红蛋白的试样进行测定。
21．按照权利要求1至18中任一项的方法，其特征在于对含有重组制得的血红蛋白的试样进行测定。
22．按照权利要求6至9和20中任一项的方法，其特征在于采用波长组(a)在反应时间5至7分钟后或采用波长组(b)在反应时间2至3分钟后以单点测量形式进行测定。
23．按照权利要求6至9、19和21中任一项的方法，其特征在于采用波长组(a)在反应时间1-2分钟后或采用波长组(b)在反应时间1至3分钟后以单点测量形式进行测定。
24．按照权利要求10至13和19至21中任一项的方法，其特征在于在反应时间20-90秒后以单点测量形式进行测定。
25．按照权利要求10至13和19至21中任一项的方法，其特征在于采用两种试剂以两点测量形式进行测定，其中在加入第二种试剂后0.2至5分钟进行分析值的测量。
26．按照权利要求14至17和19至21中任一项的方法，其特征在于采用两种试剂以两点测量形式进行测定，其中在加入第二种试剂后0.2至8分钟进行分析值的测量。
27．按照权利要求1至26中任一项的方法，其特征在于在测定后不进行对分析结果的计算修正。
28．按照权利要求1至27中任一项的方法，其特征在于对血清-或血浆试样进行测定。
29．按照权利要求1至28中任一项的方法，其特征在于在自动分析仪上实施此方法。
全文摘要
采用至少两个波长通过光学测量测定在含有游离的血红蛋白的试样中的白蛋白的方法,其中(a)在采用第一测量波长时存在有其大小足以进行测定的白蛋白测量信号,(b)在采用第二测量波长时(i)不存在白蛋白的测量信号或(ii)存在有小于采用第一测量波长时的测量信号的白蛋白测量信号和(c)在采用第一和第二测量波长时存在有可比较的强干扰信号,该干扰信号是通过血红蛋白与为测定白蛋白而采用的试剂进行的反应产生的并随时间而变化。
文档编号G01N33/487GK1214770SQ97193424
公开日1999年4月21日 申请日期1997年6月2日 优先权日1996年5月31日
发明者R·威施特, B·马斯特斯 申请人:伯伦格曼海姆有限公司