一种阿法替尼有关物质的分离检测方法与流程

本发明涉及阿法替尼有关物质，尤其是其对映异构体的分离检测方法，属于制药技术领域。

背景技术：

阿法替尼(afatinib)是一种表皮生长因子受体(egfr)和人表皮生长因子受体2(her-2)酪氨酸激酶的不可逆抑制剂，其二马来酸盐可用于治疗晚期非小细胞肺癌(nsclc)等疾病。该化合物的化学名为(2e)-4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-{[4-(n,n-二甲基氨基)-1-氧代-2-丁烯-1-基]氨基}-7-((3s)-四氢呋喃-3-基氧基)-喹唑啉，结构式如下：

阿法替尼(api)含有双键和手性碳结构且稳定性较差，因此阿法替尼及其二马来酸盐在制备或储存过程中易产生杂质，包括(s,z)-n-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(rc1)、(r,e)-n-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(rc2)、(s,z)-n-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(羟基)丁-2-烯酰胺(rc3)、(s)-n4-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-4,6-二胺(rc4)、二甲胺(rc5)等。其中，对映异构体异构体杂质rc2和与目标产物性质相近而难以分离、检测。

cn104391058a公开了一种阿法替尼及其对映异构体杂质的hplc分离检测方法，其为等度检测，色谱柱为chiralpakoz-h(250mm×4.6mm，5μm手性色谱柱)，流动相和稀释剂为体积比550-650：350-250：100：0.1的正己烷：乙醇：甲醇：二乙胺，流速为0.5ml/min～1.0ml，柱温为15～35℃，其检测波长为256nm。该方法采用四种溶剂混合作为流动相及稀释剂，操作繁复，不具备实用性，并且其灵敏度低、峰型较宽。因此，需要一种适于分离和检测阿法替尼的对映异构体杂质及其他潜在杂质的方法，以更有效地控制药品的质量。

技术实现要素：

本发明提供了一种阿法替尼有关物质的分离检测方法，在高效液相色谱仪上进行检测，色谱柱为纤维素三(3,5-二甲基氨基苯基甲酸酯)吸附硅胶色谱柱，流动相为体积比为90:10的正己烷：乙醇混合溶液，检测波长为255nm～265nm，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.0l/min。

在本发明一些实施方案中，所述色谱柱选自luxcellulose-1或chiralcelod-h(250mm×4.6mm，5μm)。

在本发明一些实施方案中，所述检测波长为260nm。

在本发明一些实施方案中，所述柱温为30℃。

在本发明一些实施方案中，所述流速为1.0ml/min。

在本发明中，所述阿法替尼有关物质是指对映异构体异构体(r,e)-n-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(rc2)。

本发明的方法具有重复性好、准确度高、耐用性良好的特点，适用于阿法替尼或其二马来酸盐及其对映异构体杂质的分离检测。

说明书附图

图1为空白图谱。

图2为实施例1的对映异构体对照品溶液图谱。

图3为实施例1的系统适用性溶液图谱。

图4为实施例1的供试品溶液图谱。

图5为实施例2的供试品溶液图谱。

图6为实施例3的供试品溶液图谱。

具体实施方案

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。

本发明所使用的试剂均可以从市场上购得。

实施例1

(1)检测条件

仪器：ultimate3000四元低压高效液相色谱仪，紫外检测器，检测波长：260nm；

色谱柱：用纤维素三(3,5-二甲基氨基苯基甲酸酯)吸附硅胶为填充剂(luxcellulose-1或chiralcelod-h)(250mm×4.6mm，5μm)；

稀释剂：甲醇；

流动相：正己烷-乙醇(90:10)

流速：1.0ml/min；

柱温：30℃；

进样量：10μl。

(2)检测步骤

对映异构体对照品溶液：取对映异构体杂质(rc2)对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含350μg的对映异构体贮备液，精密量取对映异构体贮备液适量，加甲醇定量稀释制成每1ml中约含1.75μg的溶液，作为对照品溶液(0.35％)。

供试品溶液：取阿法替尼二马来酸盐样品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。

系统适用性溶液：取供试品溶液约100ml，加入对映异构体贮备液1ml，混匀，作为系统适用性溶液(0.7％)。

照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版附录0512)测定。分别精密量取空白溶液(甲醇)、对映异构体对照品溶液、系统适用性溶液、供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1、图2、图3和图4。

按外标法计算(仅积分出峰顺序依次为阿法替尼峰和对映异构体峰两个成分)不得过0.35％。

实施例2

按照实施例1类似的检测阿法替尼及其对映异构体杂质，其中，流速替换为0.9ml/min。其色谱图见图5。

实施例3

按照实施例1类似的检测阿法替尼及其对映异构体杂质，其中，流速替换为1.1ml/min。其色谱图见图6。

技术特征：

技术总结
本发明涉及一种阿法替尼有关物质，尤其是其对映异构体的分离检测方法，是在高效液相色谱仪上进行检测，色谱柱为纤维素三(3,5‑二甲基氨基苯基甲酸酯)吸附硅胶色谱柱，流动相为体积比为90:10的正己烷：乙醇混合溶液，检测波长为255nm～265nm，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.0L/min。

技术研发人员：郑永亮;张艳侠;郝福;康旺;余大海;许桂玲;李志刚
受保护的技术使用者：河北神威药业有限公司
技术研发日：2016.03.22
技术公布日：2017.09.29