一种四氯虫酰胺残留量的gc-ei-ms测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种四氯虫酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，该方法主要用于测定粮谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中残留的四氯虫酰胺含量的方法。用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均质提取样品中残留的四氯虫酰胺，C18/PSA固相萃取柱净化浓缩后，气相色谱-电子轰击离子源-质谱（GC-EI-MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准曲线，外标法定量。本方法平均回收率为83.3%～94.2%，平均相对标准偏差（RSD）为3.4%～6.5%，检出限低于3.27μg/kg，具有操作简便、快速、去杂效果好、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的优点。能满足0.01mg/kg残留限量的“一律标准”技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【专利说明】-种四氯虫醜胺残留量的GC-EI-MS测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种四氯虫酷胺残留量的GC-EI-MS测定方法，更具体地说是采用气 相色谱-电子轰击离子源-质谱佑C-EI-M巧定性定量测定粮谷、猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等 动物肌肉及制品等复杂基质的动植物源性食品中残留的四氯虫酷胺含量的方法，属于农药 残留量的测定【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 双酷胺类杀虫剂是近年来全球热口的杀虫剂产品，可广泛应用于水稻、蔬菜、棉花 等作物的害虫控制，具有低毒、环境安全、高活性等优点，包括氯虫苯甲酷胺、氯虫酷胺、氣 虫双酷胺等品种，四氯虫酷胺（SYP9080)是由中化集团下属沈阳化工研究院研发、中化农 化有限公司经营的新产品，我国首个具有自主知识产权的双酷胺类杀虫剂，已获得国家农 业部的临时登记。
[0003] 四氯虫酷胺（SYP9080)属于鱼巧了受体激活剂类杀虫剂，其通过与害虫体内鱼巧 了受体结合，打开巧离子通道，使储存在细胞内的巧离子持续释放到肌浆中，巧离子和肌浆 中基质蛋白结合，引起肌肉持续收缩。昆虫体症状表现为抽摇、拒食，最终死亡。四氯虫酷 胺为低毒、广谱杀虫剂，对鱗翅目害虫均具有很好的活性。防治对象包括稻纵卷叶惧、二化 惧、小菜蛾、甜菜夜蛾、玉米惧、甘庶惧、小卷蛾、食屯、虫等。
[0004] 随着四氯虫酷胺的登记、推广和使用，有关四氯虫酷胺残留消解动态及最终残留 量等环境行为的研究势必增加，同时，作为我国主要出口市场的欧盟、日本等国家规定若田 间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农 产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行0. Olmg/L的"一律标准"。
[0005] 迄今为止，未见国内外有关于食品农产品中四氯虫酷胺残留量检测方法的报道， 配备电子轰击电离源的气相色谱质谱（GC-EI-M巧分析食品农产品中农药残留具有很大优 势，由于电子轰击电离源质谱为通用性检测器，可实现几百种农药的多残留分析，可同时定 性和定量，价格适中，因此现各种检测机构和企业均配备气相色谱-电子轰击离子源-质谱 仪（GC-EI-M巧对食品农产品中的农药残留进行检测，由于粮谷、动物源性食品等食品农产 品基质比较复杂，须建立净化效果良好的样品前处理方法才能满足检测要求，因此，建立气 相色谱质谱（GC-EI-M巧定性和定量分析粮谷和动物源性食品中四氯虫酷胺残留量的检测 方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种四氯虫酷胺残留量的GC-EI-MS测定方法，主要用于测 定粮谷、动物源性食品等复杂基质食品农产品中四氯虫酷胺残留量。
[0007] 为实现W上目的，本发明所采用的技术方案是；一种四氯虫酷胺残留量的 GC-EI-MS测定方法，包括如下步骤；
[000引 （1)提取 称取混匀样品于具塞离屯、管中，加入适量水复苏后，定量加入己膳或含1 %己酸的己 膳溶液均质或振荡超声提取，然后加入氯化钢或己酸钢中的一种和无水硫酸儀，剧烈祸旋 Imin后离屯、。
[0009] 似净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至ImL左右，经Cis/PSA固相萃取柱净化，己膳洗脱，收 集洗脱液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相 色谱-电子轰击离子源-质谱（GC-EI-M巧检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含四氯虫酷胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理时，得样品提取净 化残渣，加入适量溶剂和混合标准溶液，祸旋混匀，配制成至少3个浓度的四氯虫酷胺系列 混合标准工作液。
[0011] (4)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法（GC-EI-M巧测定将步骤做中的各浓度 梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，W标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回 归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2)中净化后的样品液注入GC-EI-MS进 行测定，测得样品液中四氯虫酷胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中四氯虫酷胺 含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中四氯虫酷胺残留量。
[0012] 步骤（1)中样品若为粮谷及动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充 分浸润。
[001引步骤（1)中采用己膳提取时加入氯化钢盐析，采用含1%己酸的己膳溶液提取时 加入己酸钢盐析。
[0014] 步骤似中进行Cis/PSA固相萃取净化，己膳洗脱时，洗脱体积为6?8血。
[00巧]步骤（4)中气相色谱条件为；色谱柱；HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径 0. 25mm，膜厚0. 25 y m ;进样口温度250°C;载气；He,不分流模式进样，进样量；1 y L ;恒流模 式，流速1. 0血/min ;升温程序；初温60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后 W每分钟2°C的速度升至220。再W每分钟20°C的速度升至280。保持lOmin ;传输线温 度；28(TC。
[0016] 步骤（4)中质谱条件为：离子源温度230°C ;四极杆温度150°C ;电离模式；电子轰 击电离，即EI模式，能量70eV ;扫描方式；选择离子监测（SIM)模式，监测的离子为；297、 332.334.336o
[0017] 步骤（4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在该种农药；若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[001引本发明的有益效果在于：
[0019]本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-EI-MS应用于粮谷、动物源性食品中四氯虫 酷胺定性确证和定量检测，平均回收率为83. 3%?94. 2%，平均相对标准偏差巧SD)为 3. 4%?6. 5%，检出限低于3. 27 yg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好 的优点。能满足0. Olmg/kg残留限量的"一律标准"技术要求，为保障我国人民食品安全、 对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1为浓度为10化g/血的四氯虫酷胺标液的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[002U 图2为不含四氯虫酷胺的猪肉空白样品的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0022] 图3为添加在空白猪肉基质中的四氯虫酷胺的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0023] 图4为W不含四氯虫酷胺的猪肉空白样品为基质配制的四氯虫酷胺标准工作曲 线。
【具体实施方式】
[0024] 现下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0025] 实施例中使用的仪器与试剂
[0026] TlSBasic 均质器（IKA，Germany) ;CR21G III离屯、机（日立，Japan) ;MS3 基本型旋 祸混合器（IKA，Germany) ;TurboVap LV型样品自动浓缩仪（Caliper, USA) ;7890N气相色 谱-5975C质谱仪（Agilent, USA) ;Cis/PSA固相萃取柱化血，500mg/500mg)购于天津博纳 艾杰尔科技有限公司。
[0027] 试剂；己膳、丙酬、正己烧化PLC级，Merke，Germany);己酸化PLC级，CNW， Germany);无水硫酸儀、氯化钢和己酸钢为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。
[002引标准物质；纯度95. 5%，购自中化农化有限公司。
[0029] 实施例1 ;猪肉中四氯虫酷胺残留量的检测
[0030] (1)样品前处理
[0031] 提取 称取经充分混匀的5g猪肉样品于50mL离屯、管中，加入5mL水混匀，放置30min，准确 加入20血己膳，均质提取2min，加入3g无水硫酸儀和2g氯化钢，祸旋Imin后，700化/min 离屯、5min。离屯、后，取8血己膳提取液于40°C旋蒸或氮气吹至约ImL，待净化。
[0032] 净化 用5mL己膳预洗Cis/PSA固相萃取柱，当液面到达吸附剂的顶部时，将上述提取溶液转 入柱中，用2mL己膳洗漆试管，并将洗漆液移入SPE柱中，待溶液达到吸附剂顶部时，加入 4血己膳至柱子上进行洗脱，洗脱液全部接收到定量试管中，氮气吹干后，用体积比为1/1 的丙酬/正己烧混合溶剂定容至1血，过0. 22 y m滤膜后，待GC-EI-MS测定。
[0033] (2)标准工作溶液的配制 准确称取25 + 0. Img标准品于25mL容量瓶中，用己膳溶解，定容得1000. 0 y g/mL标准 储备液；移取1. OmL标准储备液置于lOOmL容量瓶中，用用体积比为1/1的丙酬/正己烧混 合溶剂定容得到10. 0 y g/mL标准中间液；将10 y g/mL标准溶液稀释配成5、2、1、0. 5、0. 2、 0. 1 yg/血标准溶液。将不含螺虫己醋的猪肉空白样品按上述前处理步骤处理，得样品提取 净化残渣，在此残渣中加入900 y L体积比为1/1的丙酬/正己烧混合溶剂和100 y L上述 混合标准溶液，祸旋混匀，配成10、20、50、100、200、500 y g/L基质标准工作溶液。
[0034] (3)气相色谱-电子轰击离子源-质谱法（GC-EI-M巧测定将不同浓度梯度的标准 工作液分别注入GC-EI-MS，W外标法进行四氯虫酷胺含量的定量分析，即W标准工作液的 色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；在相同条件下将样品提取液注入 GC-EI-MS进行测定，测得样品液中四氯虫酷胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中 四氯虫酷胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中四氯虫酷胺残留量。
[0035] 其中色谱条件为：
[0036] 色谱柱；HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0. 25mm，膜厚0. 25 y m。
[0037] 进样口温度；250. 0°C，进样模式；不分流进样，进样量；1 y L。
[003引载气；He,恒流模式，流速1. 0血/min。
[0039] 炉箱升温程序：初温60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后W每分 钟2°C的速度升至220°C，再W每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin。
[0040] 传输线温度；280°C。
[0041] 其中，质谱参数为：
[0042] 电离模式；电子轰击电离，即EI模式，能量70eV。
[0043] 离子源温度；23(TC ;四极杆温度150°C。
[0044] 扫描方式；选择离子监测（SIM)模式；SIM监测的离子为；297、332、334、336 ;定量 离子为334 ;
[0045] 定性鉴定：在相同的条件下，如果样液中农药色谱峰保留时间与标准溶液中相应 农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且离子 丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在该种农药；若上述两个条件 不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0046] W标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线如表 1〇 表1猪肉空白基质中四氯虫酷胺的标准曲线
【权利要求】
1. 一种四氯虫酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步 骤： (1) 提取 称取混匀样品于具塞离心管中，加适量水后，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均质或 振荡超声提取后，加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁，剧烈涡旋lmin后离心； (2) 净化 移取一定体积样品提取液，浓缩至lmL左右，经C18/PSA固相萃取柱净化，乙腈洗脱，收 集洗脱液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相 色谱-电子轰击离子源-质谱（GC-EI-MS)检测； (3) 标准工作溶液的配制 将不含四氯虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 残渣，加入适量溶剂和混合标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的四氯虫酰胺系列混 合标准工作液； (4) 测定和结果计算 将步骤（3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2)中净 化后的样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中四氯虫酰胺的色谱峰面积，代入基质 标准曲线，得到样品液中四氯虫酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样 品中四氯虫酰胺残留量。
2. 根据权利要求1所述的一种四氯虫酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于， 步骤（1)中样品若为粮谷及动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。
3. 根据权利要求1所述的一种四氯虫酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于， 步骤⑴中采用乙腈提取时需加入氯化钠盐析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取时需加入 乙酸钠盐析。
4. 根据权利要求1所述的一种四氯虫酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于， 步骤⑵中进行C18/PSA固相萃取净化，乙腈洗脱时，洗脱体积为6?8mL。
5. 根据权利要求1所述的一种四氯虫酰胺残留量的GC-EI-MS测定方法，其特征在于， 步骤（4)中GC-EI-MS分析条件为：色谱柱：HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0. 25mm， 膜厚0. 25 y m ;进样口温度250. 0°C;载气：He，不分流模式进样，进样量：1 y L ;恒流模式，流 速1. OmL/min ;升温程序：初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每 分钟2°C的速度升至220°C，再以每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin ;传输线温度： 280°C;电离模式：电子轰击电离，即EI模式，能量70eV ;离子源温度230°C;扫描方式：选择 离子监测（SM)模式，监测的离子为：297、332、334、336。
【文档编号】G01N30/88GK104502514SQ201510024245
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月19日 优先权日:2015年1月19日
【发明者】崔淑华, 房保海, 王妍婷, 刘润珠 申请人:山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心