心肌肌钙蛋白i免疫层析定量检测试纸条的利记博彩app
【专利摘要】本实用新型公开了一种心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，包括底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素和吸水垫；所述试纸条由样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素、吸水垫依次搭接粘贴在底板上构成。所述荧光标记物结合垫含有链霉亲和素标记荧光蛋白和生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体；所述硝酸纤维膜上有检测线和质控线，检测线被心肌肌钙蛋白I单克隆抗体，其与上述生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体具有不同的识别表位。本实用新型与目前常见的检测心肌肌钙蛋白I的方法相比(如：化学发光法/免疫增强比浊法/胶体金法)，不仅大大缩短了检测时间，同时还提高了检测灵敏度。
【专利说明】心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条
【技术领域】
[0001]本实用新型属于免疫检测领域，具体涉及一种高灵敏度心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条。
【背景技术】
[0002]心肌钙蛋白I (4111)是一个分子量为22.5X0的心肌蛋白，它与肌钙蛋白仪化丁)、肌钙蛋白“1^0 —起形成一个心肌钙蛋白复合物，共同完成细胞内肌动蛋白间相互作用的钙信号传递的基本功能。在诸多诊断急性心肌梗死(八11)的临床生化指标中，无论是对心肌的特异性还是诊断敏感性，0X111被认为是目前最好的确定标志物，已被广泛应用于临床。
[0003]目前检测心肌肌钙蛋白I的常用方法有:
[0004]1.放射免疫法(虹八)
[0005]1987年(^臟丨!^等最早建立了后沉淀双抗体竞争法检测4111的放射免疫分析。其原理是先将待测血清与一定量的兔抗抗体混合、孵育，然后加入1251标记的与待测血清中的4111竞争抗4111抗体，形成抗原-抗体复合物，该复合物与再次加入的猴抗兔I姊结合形成沉淀，离心除去上清液，测定沉淀物的放射强度，根据标准曲线求得#111的浓度。该法最低检出限为10 0 8/匕由于使用的是多抗，交叉反应在#111浓度为201118/1时可达25%，且操作复杂，反应时间长，同时，由于存在放射污染的危险，其临床应用受到限制，因此已经基本被其它更安全、简便的方法取代。
[0006]2.酶联免疫吸附法(此13八)
[0007]在80年代中期，0111111111118报道了酶联免疫吸附试验111111111110801-136111: ￡18887^测定血清。了111。该法将待检血清和辣根过氧化酶标记的多抗混合、孵育，然后再把孵育液加入被4111包被的微孔板中。由于包被的4111与待检血清中的#111竞争多抗，使III？？被间接地固定于微孔板上，通过测定微孔板中III？？的催化活性，与标准曲线对照计算#111的浓度。该法最低检出限为4^8/1，反应时间长达5-61！。由于测定中使用了多抗，交叉反应无法消除，存在一定的局限性。1993年1^巧6等进一步改进，从28种纯化的单克隆抗体中筛选出一种特异性很强的抗体用于免疫分析，以！！！？？取代碱性磷酸酶，使测定的灵敏度显著提高，其检测低限为0.1-0.2^^/1,30111111内完成试验。￡118^法是国内研究最多的测定#111的方法，该方法灵敏度适中，使用相对比较简便，仪器价格也不很高，但该方法也存在着许多不足，如测定周期偏长、灵敏度相对较低、需要配备特殊的仪器以及专业的操作人员等。
[0008]3.化学发光法
[0009]目前利用化学发光法测定较多是采用86(^1112111'公司的八“688分析系统。该法应用双抗体一步夹心酶免疫分析法，以八I？作为标记物，以化学发光剂(二氧乙烷衍生物)为底物，用单克隆抗#111 I姊抗体包被的磁性微粒为固相载体，经孵育、洗涤、分离后测定所加入的发光底物的发光强度，通过多点定标曲线计算#111浓度。另外一类应用较为普遍的测定#111的化学发光系统是以美国8八犯1？公司的&8-180系列全自动化学发光免疫分析系统作为代表，它是以小分子发光物质叮咤醋(八幻作为标记物直接标记抗原或抗体，免疫反应后，经充分洗涤，最后加入碱性辅助试剂，检测其发光强度，从而对0X111定量。化学发光法安全、灵敏、通用性强，是全球各大公司积极开发的一种方法，特别是如八1？？0等二氧乙烷类超灵敏的化学发光物质合成以后，其研究和应用更是广泛，但相对￡118^法而言，该方法仪器成本相对较高。
[0010]4.荧光分析法
[0011]0^(16 8^118 II是一种自动化双位点荧光酶免疫定量检测法，它是第一家通过美国八批准的检测系统，所以后来开发的#111分析系统较多是以它作为测定基准，在该系统的基础上，03(16 86111*1118公司又推出了新一代的产品31:1^1:118 ￠8 0611:21 法国生物梅里埃公司近来开发的一个测定#111的酶联荧光分析系统~10八3 (31111),在#111检测中具有操作简便、自动化程度高、测定快速、结果准确可靠等特点。冗0八3 检测试剂盒采用一步免疫荧光法，以连接八I？的抗#111单克隆抗体包被固相载体(--)，在血清样品被吸入3即管内与包被的#111抗体结合，并固定于3即内壁形成夹心，未结合的#111通过洗涤被除去。底物4-甲基伞形酮磷酸盐(4-1即)在八I？催化下生成荧光产物4-甲基伞形酮，在45011111检测荧光强度，与标准曲线比较自动计算血清#111浓度。其检测范围为0.1-50 9 ^/1,…? 5 %，舰I临界值全彡0.8 9 ^/1,仪器每2周校正1次，交叉反应在60 4/1时只有1.6%，与81111、81=1和丁冗等几乎没有交叉反应。
[0012]5.金标免疫法
[0013]目前金标免疫法主要是应用到与免疫层析技术相结合的金免疫层析法八)中，该法标本用量少，简便快速，适合于舰I的床旁检测。国外在这方面的研究相对较多，如美国普林斯顿生物医学公司、01叫11081: 1(38公司、031~1:62公司、810866(101叫11001(38公司、德国莱帮公司、芬兰安力生物科技有限公司等都推出了利用金标免疫法的原理制备的#111检测卡，其基本原理均是:用两个单克隆抗1化1抗体的单一结合来检测游离￠:1111和复合01111。当样本滴到吸收孔内，第一个抗-(:1111抗体丨胶体金与￠:1111结合形成一个抗体/抗原结合体。第二个固定化的抗抗体捕捉这个结合体，产生一个粉红色的颜色带，相对于无结合体出现，反应圈内就没有色带。
[0014]由于缺乏共同的标定标准和/或使用的抗体与不同的4111形式有交叉反应，所以用不同检测系统所测得的#111浓度(正常参考值从? 0.2 ^ 8/1至? 3.1 ^ 8/1不等)相差可达10倍以上。因为人氨基末端和羧基末端是最强的抗原表位区，但这个区域对氧化、还原和磷酸化较为敏感，还易被内源性蛋白水解酶水解，不同的状态具备不同的免疫活性。由于的保护，最稳定区域在30?110氨基酸残基之间，仅用针对4111氨基末端或/和羧基末端的抗体将会降低敏感性。因此建议#111夹心免疫分析法选择的抗体应优先识别稳定区，这样才能提高#111检测的敏感性及可重复性，有助于实现#111检测标准化。
[0015]生物素-亲和素系统8781:6111，8八3)，是一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世，8…很快被广泛应用于医学各领域。将该系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床快速诊断，并利于进行大规模流行病学调查，成为研究免疫反应的有力工具。由于8…检测系统经济快速，又无放射物质污染，不需复杂仪器，充分显示了此系统的巨大潜力和应用的可能性。
[0016]生物素-亲和素系统检测原理:8…是在常规此原理的基础上，结合生物素与亲和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68奶1由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达10151-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。利用生物素-亲和素系统研制心肌肌钙蛋白I检测试快速诊断试剂尚无报道。
实用新型内容
[0017]本实用新型的目的，在于提供一种心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其基于双抗体夹心法、荧光免疫侧向层析和生物素-链霉亲和素放大系统，提供高灵敏度心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条。使用本实用新型时，提高了检测灵敏度和检测稳定性，降低了非特异性结合，检测时间不大于10分钟，大大提高了诊断效率。
[0018]本实用新型解决其技术问题的解决方案是:心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠I亦多克隆抗体构成的质控线。
[0019]作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。
[0020]作为上述技术方案的进一步改进，所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。
[0021]作为上述技术方案的进一步改进，还包括卡壳，所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内，所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗，卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。
[0022]作为上述技术方案的进一步改进，所述观察窗为长方形孔。
[0023]作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白等中的一种。
[0024]作为上述技术方案的进一步改进，所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
[0025]作为上述技术方案的进一步改进，所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
[0026]作为上述技术方案的进一步改进，所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳，所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。
[0027]本实用新型与现有技术相比，具有如下优点:
[0028](1)本实用新型将荧光蛋白作为标记物，此标记物稳定性良好，有利于提高检测稳定性。
[0029](2)本实用新型通过利用“链霉亲和素-生物素放大系统”，提高检测灵敏度，降低非特异性结合，有利于提高试剂盒性能。
[0030](3)利用本实用新型进行降钙素原的检测时间不大于10分钟，检测线性范围为
0.1011^/1111?100.00118加1，极大地提高了检测效率。
[0031](4)本实用新型可通过荧光免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠的诊断结果。
[0032](5)本使用新型卡壳设有样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗，根据分析仪器判定结果，准确可靠。
[0033](6)本实用新型制作方便，体积小、便于携带。
[0034](7)本实用新型检测成本较低。
[0035](8)本实用新型可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断；易于保存，有利于基层单位推广。
【专利附图】
【附图说明】
[0036]为了更清楚地说明本实用新型实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单说明。显然，所描述的附图只是本实用新型的一部分实施例，而不是全部实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他设计方案和附图。
[0037]图1是本实用新型实施例一的结构示意图；
[0038]图2是本实用新型实施例二的结构示意图；
[0039]图3是本实用新型实施例三的结构示意图；
[0040]图4是本实用新型实施例四的结构示意图。
【具体实施方式】
[0041]以下将结合实施例和附图对本实用新型的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本实用新型的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本实用新型的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本实用新型的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本实用新型保护的范围。另外，文中所提到的所有联接/连接关系，并非单指构件直接相接，而是指可根据具体实施情况，通过添加或减少联接辅件，来组成更优的联接结构。
[0042]参照图1，心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其包括底板5，所述底板5上依次设有样品垫1、荧光标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4，所述吸水垫4和荧光标记物结合垫2分别交叠压在硝酸纤维素膜3的两端后在硝酸纤维素膜3的表面形成检测区，荧光标记物结合垫2为玻璃纤维膜，所述样品垫1交叠压在荧光标记物结合垫2上，所述荧光标记物结合垫2上固定有生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(浓度0.3?
1.5111^/1111)和链霉亲和素标记(或亲和素)的荧光蛋白(使用激发光波长53011111，发射光波长570=%浓度0.1?1.0呢/此)；所述检测区内的硝酸纤维素膜3上固定有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线1(浓度0.5?31118/1111)和羊抗鼠多克隆抗体构成的质控线(:(浓度0.2?2.008/1110，质控线￠:用于检测试纸条的有效性。
[0043]将生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体和链霉亲和素(或亲和素)标记的荧光蛋白固定在荧光标记物结合垫2上，将有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体和羊抗鼠I亦多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜上分别作为检测线I和质控线0。当待测样品加到样品垫1上后，通过层析作用向前移动，样品中心肌肌钙蛋白I与荧光标记物结合垫2上结合荧光标记物(荧光蛋白)的心肌肌钙蛋白I抗体反应形成复合物'[-1处4例1扑11101~0，在层析作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜上包被的抗体(检测线)时，反应复合物被包被的抗体捕获形成复合物
(检测线)，通过荧光免疫分析仪读取检测线的反应信号，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数值，计算出样本中心肌肌钙蛋白I的浓度，得到心肌肌钙蛋白I检测结果。
[0044]作为上述技术方案的进一步改进，参照图3，所述荧光标记物结合垫2包括层叠的第一荧光标记物结合垫20和第二荧光标记物结合垫21，所述第一荧光标记物结合垫20的一端垫在样品垫1的下方，所述第二荧光标记物结合垫21交叠压在硝酸纤维素膜3的一端。荧光标记物结合垫2的分层设置，便于将荧光标记物结合垫2安装在样品垫1和硝酸纤维素膜3之间。
[0045]作为上述技术方案的进一步改进，参照图3所述第一荧光标记物结合垫20中插入样品垫下方的一端设有定位条22，所述样品垫1的下端面设有能容纳定位条22的定位槽。通过定位条22便于荧光标记物结合垫2和样品垫1之间的安装固定。
[0046]作为上述技术方案的进一步改进，参照图2和图4，还包括卡壳，所述底板5、样品垫1、荧光标记物结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4均置于卡壳6内，所述卡壳6壳面上对应于硝酸纤维膜3的位置设有观察窗8，卡壳6壳面上对应于样品垫1的位置设有加样孔7。
[0047]作为上述技术方案的进一步改进，所述观察窗8为长方形孔。
[0048]作为上述技术方案的进一步改进，所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白等中的一种。
[0049]作为上述技术方案的进一步改进，所述样品垫1为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。样品垫由玻璃纤维构成，经表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后使用。所述样品垫1的裁剪宽度为0.3?0.50111
[0050]作为上述技术方案的进一步改进，所述底板5为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
[0051]作为上述技术方案的进一步改进，所述卡壳6包括塑料上壳60和塑料下壳61，所述塑料上壳61扣合塑料下壳61上后形成卡壳6。
[0052]以上是对本实用新型的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本实用新型精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
【权利要求】
1.心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别心肌肌钙蛋白I另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
2.根据权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。
3.根据权利要求2所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能容纳定位条的定位槽。
4.根据权利要求1至3任一项所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:还包括卡壳，所述底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均置于卡壳内，所述卡壳壳面上对应于硝酸纤维膜的位置设有观察窗，卡壳壳面上对应于样品垫的位置设有加样孔。
5.根据权利要求4所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述观察窗为长方形孔。
6.根据权利要求4所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白、藻胆蛋白等中的一种。
7.根据权利要求4所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述样品垫为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维构件。
8.根据权利要求4所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述底板为聚苯乙烯构件或者聚乙烯构件。
9.根据权利要求4所述的心肌肌钙蛋白I免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述卡壳包括塑料上壳和塑料下壳，所述塑料上壳扣合塑料下壳上后形成卡壳。
【文档编号】G01N33/68GK204165984SQ201420648352
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】宋建勋, 吴明, 王小明, 夏坤, 佟顺刚 申请人:广州天宝颂原生物科技开发有限公司