一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，该方法采用反向液相色谱法测定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，并对黄豆和发酵后的豆豉进行了比较，本发明的测定与分析方法原理简单，操作方便，尤其验考察了甲醇－水系统、甲醇－０.２％磷酸系统、乙腈－水系统、乙腈－０.４％磷酸系统和乙腈－０.２％磷酸系统等流动相，结果表明乙腈－０.２％磷酸（３６∶６４）分离效果最好,在供试品的制备方法中，对无水乙醇、８０％乙醇、７５％乙醇、７０％乙醇、６５％乙醇、５０％乙醇、３０％乙醇超声提取进行考察,结果表明７０％乙醇超声提取３０ｍｉｎ效果最好,溶剂空白显示对测定结果无影响，方法专属性强，方法简单易行。
【专利说明】一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，属于生物医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]我国食用黄豆已有5千年历史，研究发现，食用黄豆对许多疾病，尤其是老年性疾病具有治疗或保健作用，豆豉是我国具有民族特色的传统大豆发酵制品，一直以其营养丰富、风味独特在世界饮食文化中具有特殊的地位。豆豉不仅营养价值高，而且可入药，中医历代医书中都有豆豉治疗疾病的记载，汉代张仲景的《伤寒论》中即有“桅子豉汤”，方中用桅子、豆豉煎汤治疗外感风寒、不思饮食等症；李时珍的《本草纲目》中则有“豆豉开胃增食、消食化滞、发汗解表、除烦喘等疗效”的记载，近年来，大豆及大豆制品的生物活性物质和保健作用逐渐成为研究的热点，其中异黄酮是一类重要的生理活性物质，具有多种生理功能，如降低血糖浓度调节脂代谢、抗肿瘤作用、对血管的防护作用、雌激素双向调节作用、预防骨质疏松症、较强的抗氧化活性和抗真菌活性等。黄豆中含有异黄酮，分为游离型的苷元(a g I y c ο η)和结合型的糖苷(g lucosid e )两类，大豆发酵后苷转变为苷元，而大豆苷元和染料木素是2种含量较高的苷元成分。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是:提供一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，以提供一种新的检测手段达到快速检测大豆异黄酮类成分含量，以克服现有技术的不足。
[0004]本发明的技术方案
一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，该方法采用反向液相色谱法测定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，并对黄豆和发酵后的豆豉进行了比较。
[0005]前述的一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法中，在所述反向液相色谱法测定中采用乙腈一 0.2 %磷酸系统实现分离，同时采用表明7 O %乙醇超声提取3 Omi η。
[0006]由于采用上述技术方案，与现有技术相比，本发明的测定与分析方法原理简单，操作方便，尤其验考察了甲醇一水系统、甲醇一 0.2 %磷酸系统、乙腈一水系统、乙腈一0.4 %磷酸系统和乙腈一 0.2 %磷酸系统等流动相，结果表明乙腈一 0.2 %磷酸( 3 6:6 4 )分离效果最好，在供试品的制备方法中，对无水乙醇、8 O %乙醇、7 5 %乙醇、7 O %乙醇、6 5 %乙醇、5 O %乙醇、3 O %乙醇超声提取进行考察，结果表明7 O %乙醇超声提取3 Omi η效果最好，溶剂空白显示对测定结果无影响，方法专属性强，方法简单易行。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]附图1为对照组的黄酮含量色谱图；
附图2为豆鼓的黄酮含量色谱图；
附图3为黄豆的黄酮含量色谱图；
附图4为大豆苷元加样回收率结果统计图；
附图5为染料木素加样回收率显示图；
附图6为3批黄豆及发酵后豆豉中异黄酮含量统计图。
【具体实施方式】
[0008]下面结合附图对本发明作进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。
[0009]本发明的实施例:
I材料
AgilentllOO系列高效液相色谱仪，S G 8 2 O O H超声仪(上海冠特超声仪器有限公司)；豆豉由本实验室自行分离的菌种发酵制得，黄豆购于超市；大豆苷元对照品(中国药品生物制品检定所，批号I I I 5 O 2 — 2 O O I O I)及染料木素对照品(中国药品生物制品检定所，批号I I I 7 O 4 — 2 O O 5 O I );乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂为分析纯。
[0010]2 方法和结果
2.1 色谱条件
色谱柱 Diamons i I C18(250 mm X 4.6 mm, 5 μ m),保护柱 Phenomenex C18(4.6 mm X 3 mm, 5 μ m),流动相乙臆一0.2 % 憐酸(3 6: 6 4 )，流速为I.0 m I / m i η，柱温3 O °C，检测波长2 6 O n m，在此条件下能同时检测染料木素和大豆苷元并产生较好分离且空白无干扰。
[0011]2.2 溶液制备
精密称取染料木素对照品2 4.91m g，加无水乙醇定容至25ml为贮备液一；精密称取大豆苷元对照品2 4.31 m g用无水乙醇定容至25ml作为贮备液二，精密吸取贮备液一和贮备液二各I m I，用无水乙醇稀释至10ml作为对照品溶液，其中含染料木素为9.9 6 4 m g / L ,大豆苷元为9.7 2 4 m g / L ,分别将豆豉、黄豆粉碎，称取粉末各I g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入7 0%乙醇2 5ml，密塞，称定重量，超声处理3 O m i η,放冷,用7 O %乙醇补足减失的重量,摇勻过滤,取续滤液过
0.4 5 μ m微孔滤膜，即得供试品溶液。
[0012]2.3 取上述各种溶液各2 O μ I按2.1项下的色谱条件注入色谱仪检测，见附图1、2和3。
[0013]2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液4、8、12、16&24μ 1，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积值，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程:大豆苷元为Y =
4.7369Χ+23.3 3 2 ( r = 0.9996 )，在 0.0389 ?0.2334μ g呈良好线性关系；染料木素为Υ=6.7678Χ+4.2 I O 7 ( r = 0.9999)，在
0.0399?0.2391μ g呈良好线性关系。
[0014]2.5 精密度试验精密吸取2 O μ I对照品溶液连续进样5次，测得大豆苷元峰面积的R S D为
0.4 6%,染料木素峰面积的RSDSl.60%。
[0015]2.6 重复性试验
称取同一批号的豆豉供试品样品5份，按供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，按2.3项下方法进行测定，结果豆豉中大豆苷元的R S D = 2.2 O %，染料木素R S D=1.6 9 %。
[0016]2.7 稳定性实验
吸取豆豉供试品溶液，在O、2、4、6、I 2 h内分别进样2 O μ I，结果表明豆豉供试品溶液中大豆苷元和染料木素在I 2 h内基本稳定。
[0017]2.8 回收率试验
称取批号2 0 0 9 0 9 0 9 ?妓样品0.7 g，精S称定，加入直具塞维形瓶中，每份分为3份分别加入对照品溶液，结果见附图4和附图5，从附图4和附图5可以看出，大豆苷元平均回收率为94.9 2 %, R S D = 1.5 O % ;染料木素为99.35% ,RSD =
1.4 4 %。
[0018]2.9 样品测定
按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.3”项下条件，测定黄豆及发酵后的3批豆豉(干品)，外标法计算含量，结果见表3。附图6，3批豆豉的大豆苷元平均含量为I 2 3.2 7 μ g/g，RSD=1.8 7% ;黄豆中大豆苷元平均含量为2 9.8 0，RSD=1.03%, 3批豆豉的染料木素平均含量为64.5 5 μ g/g ,RSD =1.72% ;黄豆中染料木素平均含量为26.1 8 μ g/g，RSD=1.78%。
[0019]3 讨论
实验考察了甲醇一水系统、甲醇一0.2%磷酸系统、乙腈一水系统、乙腈一0.4%磷酸系统和乙腈一 0.2 %磷酸系统等流动相，结果表明乙腈一 0.2%磷酸(3 6:
64)分离效果最好，在供试品的制备方法中，对无水乙醇、8 O %乙醇、7 5 %乙醇、
7O %乙醇、6 5 %乙醇、5 O %乙醇、3 O %乙醇超声提取进行考察，结果表明7 O %乙醇超声提取3 Omi η效果最好。溶剂空白显示对测定结果无影响，方法专属性强，方法简单易行。
[0020]实验同时测定了黄豆和发酵后豆豉样品中大豆苷元和染料木素的含量，发现豆豉中这2种成分的含量明显的比黄豆高。查阅文献，发现未发酵的大豆制品主要以苷的形式存在，发酵后受菌种、温度、湿度、酸度等影响，异黄酮甙元与糖发生解离，使游离甙元含量提高，发酵比未发酵豆制品有更高的生物利用率。
【权利要求】
1.一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，其特征在于:该方法采用反向液相色谱法测定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，并对黄豆和发酵后的豆豉进行了比较。
2.根据权利要求1所述的一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的测定与分析方法，其特征在于:在所述反向液相色谱法测定中采用乙腈一 0.2 %磷酸系统实现分离，同时采用表明7 O %乙醇超声提取3 O m i η。
【文档编号】G01N30/02GK104458951SQ201410739981
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月8日 优先权日:2014年12月8日
【发明者】敖云霞 申请人:敖云霞