一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法
【专利摘要】本发明提供了一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法，待测样品经乙腈震荡提取，提取液经弗罗里硅土固相萃取柱净化，采用以碳十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱分离，流动相为甲醇、水的混合溶剂，其组成的体积比例为甲醇80％-90％、水20％-10％，检测波长220nm，柱温35℃。本发明经过系统的比较研究，首次建立了植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法，具有分离效果好，测定准确、灵敏度高、专属性强，分析简便快速等技术特点。
【专利说明】一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种农药残留分析方法，具体涉及一种植物源性食品中喹螨醚残留量 测定的高效液相色谱法。
【背景技术】：
[0002] 喹螨醚属喹唑啉类杀螨剂，是以邻氨基苯甲酸为原料，制得4-羟基喹唑啉，再与 三氯氧磷反应，得到的含4-氯喹唑啉盐酸盐的混合物，然后4-特丁基苯乙醇回流反应，得 到4-(2-(4-特丁基苯基）乙氧基）喹唑啉盐酸盐，中和后即得本品。喹螨醚主要用于扁桃 (杏仁）、苹果、柑橘、棉花、葡萄和观赏植物上，可有效地防治真叶螨、全爪螨和红叶螨以及 紫红短须螨。该化合物亦具有杀菌活性。中国、欧盟、日本和美国等暂未制定喹螨醚的最大 残留限量（MRL)，印度规定喹螨醚在茶叶中的最大残留限量为3mg/kg，韩国规定其在苹果、 嫩枝、茄子、葡萄、中国柑橘、梨、紫苏叶和西瓜中的最大残留限量分别为〇. l，〇. l，〇. 2,0. 5， 0? 7,0. 3,3 和 0? 05mg/kg。
[0003] ① Food and Chemical Toxicology，2004,42,423-428,公开了用二氣甲烧萃取 茶叶和茶汤中的喹螨醚，弗罗里硅土柱层析净化，高效液相色谱仪测定，采用乙腈-水= 80 : 20为流动相。
[0004] ②《（农药科学与管理，2011，32(8)，41-43》公开了用甲醇：0.05%磷酸溶液= 85 : 15为流动相分离，在220nm处检测紫外吸收进行喹螨醚定量分析。
[0005] ③ Journal of Chromatography A，2008,1208,16-24,公开了米用中空纤维-液相 微萃取技术分离含酒精饮料中的50种农药（含喹螨醚），用超高效液相色谱-串联质谱仪 测定。
[0006] ④ Journal of Chromatography A，2004,1036,161-169,公开了用氢氧化钠调节 pH值，用乙酸乙酯-环己烷提取苹果酱、浓缩柠檬汁、番茄酱中的24种新型农药残留（含喹 螨醚），用液相色谱-串联质谱仪测定。
[0007] 但经过本发明人系统的研究，结果表明上述专利或论文所确定的主要技术条件在 实际的生产应用中存在有缺陷：
[0008] (1)上述方法所选用的流动相甲醇-0? 05%磷酸溶液=85 : 15在220nm波长处 不易平衡，改用甲醇-水=85 : 15时，峰形、分离度、拖尾因子和对称性均能满足要求。
[0009] (2)上述方法采用二氯甲烷作为提取溶剂，毒性较大，且提取溶剂用量较大，环境 污染严重，采用乙腈作为提取溶剂，提取效率较高，毒性较二氯甲烷小。
[0010] (3)上述方法采用正己烷-乙酸乙酯=99 : 1(V/V)作为洗脱溶剂，喹螨醚不能被 洗脱。
[0011] 为寻求对于植物源性食品中喹螨醚更科学合理，更具有实用性的残留分析方法， 本发明人经过系统的对比研究，提供了一种不同于上述论文或标准所公布的，可用于测定 植物源性食品中喹螨醚残留的HPLC法。
【发明内容】
：
[0012] 本发明所要解决的技术问题在于，克服上述现有技术的不足，提供一种简便快速， 且成本低的植物源性食品中喹螨醚残留量的液相色谱测定方法。
[0013] 本发明为实现上述目的，所采用的技术方案是：
[0014] 本发明的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法，包括以下步 骤：
[0015] 1?样品提取：
[0016] 称取已制备好的水果、蔬菜或粮食样品5. 0-10. Og于50mL具盖离心管中。粮食类 或含水量较少的样品加入3-5mL水，然后加入15-30mL乙腈，其他样品直接加入15-30mL乙 腈，震荡提取20-60min，加入3-5g氯化钠涡旋混匀后，5000-10000rpm离心5-15min，移取一 定体积的上清液至鸡心瓶中，旋转蒸发至近干，用正己烷溶解残渣，待净化；
[0017] 2?固相萃取柱净化
[0018] 将上步溶解液转移至弗罗里硅土固相萃取柱，上样后先用10_20mL正己烷淋洗， 弃去流出液，再用10-30mL正己烷+乙酸乙酯（9+1)洗脱，收集洗脱液于鸡心瓶中，旋转蒸 发至干，残留物用甲醇溶解并定容，供高效液相色谱测定；
[0019] 3?色谱测定
[0020] 称取喹螨醚标准品，用甲醇溶解并定容后作为储备液，然后进一步用甲醇稀释为 具有浓度梯度的标准使用液；
[0021] 利用液相色谱仪对试样进行检测，外标法定量；
[0022] 作为优选，高效液相色谱分析条件为：
[0023] a)色谱柱：以碳十八烷基键合硅胶为填充剂；
[0024] b)流动相：甲醇 + 水=80+20 至 90+10 (V/V);
[0025] c)柱温：35°C ;
[0026] d)流速：lmL/min ;
[0027] e)进样量：20iiL;
[0028] f)波长：220nm ;
[0029] 由于采用上述技术方案，本发明的有益效果在于：
[0030] 1、建立了植物源性食品（蔬菜、水果、粮食）中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱 法，比利用LC-MS/MS检测方法成本低，仪器较普遍，利于推广应用。
[0031] 2、对蔬菜、水果、粮食等样品采用乙腈震荡提取，盐析、离心分层，提取效率高，提 取液中杂质溶出少。
[0032] 3、提取液采用弗罗里硅土固相萃取柱净化，通过对弗罗里硅土固相萃取柱净化条 件的优化，具有较好的净化效果，并保证喹螨醚有较高的回收率。
[0033] 4、本方法具有简单、快速、准确、高效等优点，喹螨醚的检测低限为0. 02y g/mL，平 均回收率为78. 0-102.0%，变异系数（CV%)为1.6-5. 9%。本方法满足国内外相关法规的 要求，回收率等技术指标符合相关标准的规定。
[0034] 5、本发明可应用于植物源性产品中喹螨醚残留量的检测中，对促进我国植物源性 食品的进出口贸易，确保食品安全，保障人类身体健康都具有十分重要的意义。
【具体实施方式】：
[0035] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施 例。
[0036] 实施例1黄瓜中喹螨醚残留量的测定
[0037] 1、样品提取：称取制备好的黄瓜样品10. Og于50mL具盖离心管中，加入20mL乙 腈，震荡提取30min后，加入5g氯化钠润旋混勻，8000rpm离心IOmin,用移液管移取IOmL 上清液至鸡心瓶中，40°C水浴中旋转蒸发至近干，用2mL正己烷溶解残渣，待净化；
[0038] 2、固相萃取柱净化：将上步溶解液转移至已活化好的弗罗里硅土固相萃取柱 (6mL正己烷活化），上样后先用20mL正己烷淋洗，弃去流出液（控制流速不超过2mL/min)， 再用15mL正己烷+乙酸乙酯（9+1)洗脱，收集洗脱液于鸡心瓶中，洗脱液在40°C水浴中旋 转蒸发至干，残留物用甲醇溶解并定容至I. OmL，混匀，过0. 45 y m有机系滤膜，供高效液相 色谱测定。
[0039] 3、高效液相色谱仪测定
[0040] 按照液相色谱条件测定样品和标准工作溶液，用标准曲线对样品溶液浓度进行校 正，外标法定量。
[0041] 4、线性关系：将标准溶液逐级稀释，制备五个不同浓度的系列混合标准溶液，按浓 度从低到高顺序，依照上述色谱条件测定。每一浓度测定3次，按其标准溶液浓度Y (ii g/ mL)与对应峰面积平均值X作标准曲线图，计算回归方程和相关系数，结果见表1。
[0042] 表1喹螨醚系列标准工作液浓度、峰面积及标准曲线
[0043]
【权利要求】
1. 一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法，其特征在于：所述测定 方法包括如下步骤： (1) 样品经有机溶剂振荡提取，提取液经旋转蒸发至近干，用正己烷溶解残渣，待净 化； (2) 采用固相萃取柱净化，经有机溶剂淋洗后，正己烷和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，洗脱 液旋转蒸发至近干，用甲醇溶解并定容，高效液相色谱仪测定。
2. 根据权利要求1所述的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法， 其特征在于，步骤（1)中所述有机溶剂为乙腈。
3. 根据权利要求1所述的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法， 其特征在于，步骤（2)中所述固相萃取柱为弗罗里硅土固相萃取柱，淋洗液为正己烷，采用 的正己烷和乙酸乙酯混合洗脱溶剂比例为：正己烷+乙酸乙酯=9+1 (V/V)。
4. 根据权利要求1所述的一种植物源性食品中喹螨醚残留量测定的高效液相色谱法， 其特征在于所述的植物源性食品为水果、蔬菜或粮食。
【文档编号】G01N30/02GK104374846SQ201410711798
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】宋薇 申请人:谱尼测试科技(天津)有限公司