双波长酶免疫化学发光底物及其应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明双波长酶免疫化学发光底物及其应用，一种利用酶免疫化学发光来测试或分析材料的组合物应用。其目的是为了提供一种制备方法简单、使用方便，样品检测准确性和精密度高，保存时间长的酶免疫双波长酶免疫化学发光底物及其应用。本发明的酶免疫化学发光底物制备简单、使用方便；本发明制得的发光底物不仅检测数据的准确性、精密度和重复性高，且成本低。本发明用于酶免疫化学发光分析领域。
【专利说明】双波长酶免疫化学发光底物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种利用化学发光来测试或分析材料的组合物及其应用，特别是涉及 一种双波长免疫化学发光底物及其应用。
【背景技术】
[0002] 化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay, CLIA)是将具有高灵敏度 的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合的分析方法，用于各种抗原、半抗原、抗 体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析，也是继放射免疫分析、酶联免疫分析、时 间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术，广泛应用于医学临床检验等 领域中。
[0003] 化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。免疫反 应系统是将发光物质或酶直接标记在抗原或抗体上（免疫标记物），再与相应的抗原或抗 体特异性结合，作用于底物发光。免疫标记物作用于底物发光是利用化学发光物质经催化 剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基 态时，同时发射出光子（hM)，利用发光信号测量仪器测量光量子产额，根据光量子的数量， 可对待测物质进行高灵敏度和特异性的定量。
[0004] 化学发光免疫分析已成为当今世界和我国医学临床检验中必备的分析方法之一， 其化学发光酶免疫分析底物的研制引起国内外的广泛关注。
[0005] 目前，我国医学临床上，应用的化学发光免疫分析仪器和其诊断试剂，基本来自于 国外，如德国的罗氏（Roche)、美国的贝克曼（Beckman)、德国的西门子（Siemens)、德国的 索林（Liaison)、美国的雅培（Abbott)、日本的东曹（AIA)等，虽化学发光免疫分析诊断试 剂的底物各异，但其价格均较昂贵，特别是日本东曹（AIA)的化学发光酶（碱性磷酸酶）免 疫分析诊断试剂的基质液（底物）一套（200ml)约需3000元左右，其基质液是双波长底物 (专利保密）。双波长底物即在底物中除含有能发出待测的特异性激发荧光物，还加入能发 出非特异性激发荧光参照物，以消除非特异性激发荧光等其它干扰，降低仪器读数带来的 误差，保证实验数据的准确性，双波长底物具有灵敏度高、稳定、可重复性强等特点。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供一种制备方法简单、使用方便，样品检测准确性 和精密度高，成本低、保存时间长的双波长酶免疫化学发光底物及其应用。
[0007] 本发明双波长酶免疫化学发光底物，包括两部分：A组分和B组分；其中，所述A组 分按以下步骤制备：将5g甘露醇和60mg 4-甲基伞形酮磷酸酯加入IOmL的0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸盐缓冲液中，混匀后进行真空冷冻干燥，即制得A组分，4°C保存；所述B组分按 以下步骤制备：将4. 5ml 2-氨基-2-甲基-1-丙醇、30mg 5-羟色胺、20mg MgCl2. 6H20和 IOOmg NaN3加入IOOml的0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸盐缓冲液，混匀，即制得B组分。
[0008] 本发明双波长酶免疫化学发光底物中所述的4-甲基伞形酮磷酸酯（4-MUP)作为 特异性激发荧光物，5-羟色胺作为发出非特异性激发荧光的参照物，甘露醇作为干燥赋形 剂。
[0009] 本发明双波长酶免疫化学发光底物的应用，用于化学发光酶免疫分析。
[0010] 本发明双波长酶免疫化学发光底物的应用，作为化学发光酶免疫分析仪中的基质 液。
[0011] 本发明双波长酶免疫化学发光底物的应用，所述的化学发光酶免疫分析仪为日本 东曹AIA化学发光酶免疫分析仪。
[0012] 本发明双波长酶免疫化学发光底物的应用，作为日本AIA化学发光酶免疫分析中 的AIA基质液，按以下步骤进行：将本发明的B组分直接加入A组分中，混均后，置于日本 AIA化学发光酶免疫分析仪放基质液的位置，检测步骤按日本AIA化学发光酶免疫分析仪 说明书要求进行。
[0013] 本发明双波长酶免疫化学发光底物的应用，作为日本AIA化学发光酶免疫分析中 的AIA基质液，按以下步骤进行：
[0014] 一、在室温条件下，将所述B组分直接加入盛放所述A组分的容器中，混均后即为 基质液，室温条件下静置3-5分钟；
[0015] 二、将步骤一中制得的基质液放置在日本AIA化学发光酶免疫分析仪的基质液位 置上；
[0016] 三、将待测样本和诊断试剂放在日本AIA化学发光酶免疫分析仪的指定位置上， 启动日本AIA化学发光酶免疫分析仪的自动检测程序，进行检测；
[0017] 四、检测完毕，读取结果。
[0018] 碱性磷酸酶化学发光免疫分析系统中是将碱性磷酸酶直接标记在抗原或抗体上 (免疫标记物），再与相应的抗原或抗体特异性结合，作用于底物发光，碱性磷酸酶标记物 作用的底物有3- (2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-(3-磷氧酰）-苯基1，2-二氧环乙烷（AMPro) 和4-甲基伞形酮磷酸酯（4-MUP)等。本发明是采用4-MUP作为碱性磷酸酶标记物的特异 性底物，同时还加入5-羟色胺作为发出非特异性激发荧光的参照物，在350-380nm同一个 波长的激发光作用下，可同时发射出420_485nm和525_630nm2种突光光束，即碱性磷酸酶 的双波长免疫化学发光底物，可以消除非特异性激发荧光等其它干扰，降低仪器读数带来 的误差，保证实验数据的准确性。
[0019] 本发明的双波长免疫化学放光底物与现有技术的不同之处在于：
[0020] 1、本发明的双波长免疫化学发光底物制备方法简单、使用方便。
[0021] 2、本发明的双波长免疫化学放光底物，可替代日本东曹（AIA)的化学发光酶（碱 性磷酸酶）免疫分析诊断试剂中的基质液（底物），亦可应用于化学发光酶（碱性磷酸酶） 免疫分析，不仅检测数据的准确性、精密度和重复性高，且成本也仅是日本东曹的化学发光 酶（碱性磷酸酶）免疫分析底物的1/10。
[0022] 3、本发明的双波长免疫化学放光底物保存时间长，可达到6个月以上。
【专利附图】
【附图说明】
[0023] 图1为实施例3中采用双波长免疫化学发光底物使用荧光光度仪对血清雌二醇 (E2)进行检测的流程图。
【具体实施方式】
[0024] 结合以下实施例和验证试验对本发明的双波长免疫化学放光底物作进一步的说 明。
[0025] 实施例1
[0026] 本实施例碱性磷酸酶的双波长免疫化学放光底物的制备按以下步骤进行：
[0027] -、制备A组分：将甘露醇（干燥赋形剂）5g、4_甲基伞形酮磷酸酯（4_MUP)60mg和 0. Olmol/L PH 9. 5的碳酸盐缓冲液IOml混合均匀，进行真空冷冻干燥，干燥后4°C保存；
[0028] 二、制备B组分：将2-氨基-2-甲基-1-丙醇4. 5ml、5-轻色胺（Serotonin) 30mg、 MgCl2. 6H20 20mg、NaN3100mg 和 0? 01mol/L、PH 9. 5 碳酸盐缓冲液 100ml，混合致全部溶解 后，待用。
[0029] 实施例2
[0030] 本实施例的双波长免疫化学发光底物的使用方法，按以下步骤进行：
[0031] 将本发明的B组分直接加入A组分中，混均后，替代日本东曹（AIA)的基质液（底 物），使用时将A和B混合液，放置在日本AIA化学发光酶免疫分析仪的基质液位置上，，检 测步骤按日本AIA化学发光酶免疫分析仪说明书要求进行。
[0032] 具体包括以下步骤：
[0033] -、在室温条件下，将实施例1中的B组分直接加入盛放A组分的瓶子中，混均后 即为基质液，室温条件下静置3-5分钟；
[0034] 二、将步骤一中制得的液体放置在日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪的基质液 位置上；
[0035] 三、将待测样本和诊断试剂放在日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪的指定位置 上，启动日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪的自动检测程序，进行检测；
[0036] 四、检测时间约20分钟，报告结果。
[0037] 本实施例中所述的日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪（型号360)购自合肥博 氏生物科技有限公司。
[0038] 实施例3
[0039] 本实施例采用实施例1中的双波长免疫化学发光底物使用荧光光度仪对血清雌 二醇（E2)进行检测，其操作步骤如图1所示。
[0040] 验证试验1
[0041] 标准曲线的比较：
[0042] 在日本AIA化学发光免疫分析仪（型号360)上，分别使用AIA基质液（底物液） 和本发明双波长免疫化学发光底物液，同时进行E2标准曲线的制备，并进行相关系数的数 学统计，结果见表1。
[0043] 表IAIA基质液（底物液）与实施例双波长底物液制备E2标准曲线的比较
[0044]
【权利要求】
1. 一种双波长酶免疫化学发光底物，其特征在于包括两部分：A组分和B组分；其 中，所述A组分按以下步骤制备：将5g甘露醇和60mg 4-甲基伞形酮磷酸酯加入10mL的 0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸盐缓冲液中，混匀后进行真空冷冻干燥，即制得A组分，4°C保存； 所述B组分按以下步骤制备：将4.5ml 2-氨基-2-甲基-1-丙醇、30mg 5-羟色胺、20mg MgCl2. 6H20和100mg NaN3加入100ml的0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸盐缓冲液，混匀，即制得 B组分。
2. -种权利要求1所述的双波长酶免疫化学发光底物的应用，其特征在于：用于化学 发光酶免疫分析。
3. 根据权利要求2所述的双波长酶免疫化学发光底物的应用，其特征在于：作为化学 发光酶免疫分析仪中的基质液。
4. 根据权利要求3所述的双波长酶免疫化学发光底物的应用，其特征在于：所述的化 学发光酶免疫分析仪为日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪。
5. 根据权利要求4所述的双波长酶免疫化学发光底物的应用，其特征在于：按以下步 骤进行： 一、 在室温条件下，将所述B组分直接加入盛放所述A组分的容器中，混均后即为基质 液，室温条件下静置3-5分钟； 二、 将步骤一中制得的基质液放置在日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪的基质液位 置上； 三、 将待测样本和诊断试剂放在日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪的指定位置上， 启动日本东曹AIA化学发光酶免疫分析仪的自动检测程序，进行检测； 四、 检测完毕，读取结果。
【文档编号】G01N33/531GK104391110SQ201410709518
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】刘军, 田恩江, 张静, 李小永 申请人:天津华信康达科技有限公司, 张静, 李小永