特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体及试剂盒的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了一种特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体及分泌它的杂交瘤细胞系，该杂交瘤细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.9051。本发明还公开了该单克隆抗体的制备方法。本发明还公开了一种体外化学标记处理的该单克隆抗体。本发明还公开了竞争ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗体试剂盒。本发明的竞争ELISA试剂盒检测样品可以在1h内完成，比目前的商品化间接ELISA检测试剂盒快0.5h，比检验检疫行业标准使用的阻断ELISA快1.5h，一天内可以完成多批次样品检测，符合疫病快速诊断的要求。
CGMCC NO.9051
2014.04.10
【专利说明】特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体及 试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术和动物检疫【技术领域】，具体涉及一种特异结合胸膜肺炎放线 杆菌血清7型抗原的单克隆抗体及分泌它的杂交瘤细胞系，此外，本发明还涉及一种竞争 ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗体试剂盒。
【背景技术】
[0002] 猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumoniae)是由胸膜肺炎放线 杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，简称App)引起的猪的一种呼吸道传染病，具有 高度传染性，多呈最急性或急性病程而迅速致死，其发病率和死亡率都在50%以上，最急性 型的死亡率可高达80-100%，慢性型可导致猪生长缓慢，成为僵猪，该病是集约化猪场常见 猪病之一，是我国进口种猪检疫的猪病之一。我国曾多次从美国、丹麦、英国等进口种猪中 检出猪传染性胸膜肺炎。根据胸膜肺炎放线杆菌可溶性抗原荚膜多糖和脂多糖抗原性的差 异，可将其分为15个血清型。血清学抗体检测是最重要的诊断方法之一。
[0003] 由于App各型之间没有完全的交叉保护，App每个血清型的毒力不同，每个血清 型在各个国家的分布也不同，因此，准确诊断感染血清型是预防和控制该病的基础。App血 清7型是重要的致病血清型，我国从美国、加拿大进口种猪都要求检疫此血清型。根据吉 林大学雷连成等从我国长春分离的App菌株毒力测定，血清7型对小鼠的致死率很高，达 66. 5%。
[0004] ELISA检测方法方便、快速、敏感、特异，是抗体检测最常用的方法。
[0005] 此检测方法不需要昂贵的仪器，几乎所有的检测单位都备有ELISA仪，ELISA试剂 盒很容易推广应用。就App而言，目前国内外商品化ELISA检测试剂盒还没有只检测血清 7型抗体的试剂盒。也没有采用竞争ELISA检测App抗体的试剂盒。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题之一是提供能与App血清7型抗原特异结合的单克隆抗 体。
[0007] 本发明要解决的技术问题之二是提供分泌产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞系。
[0008] 本发明要解决的技术问题之三是提供本发明的单克隆抗体的制备方法。
[0009] 本发明要解决的技术问题之四是提供一种体外化学标记过的单克隆抗体。
[0010] 本发明要解决的技术问题之五是提供基于上述单克隆抗体研制的竞争ELISA检 测胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗体试剂盒。
[0011] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0012] 在本发明的一方面，提供一种分泌特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单 克隆抗体的杂交瘤单克隆细胞，代号为SHCIQ-S7-8D12杂交瘤细胞株，经间接ELISA和竞争 ELISA检测，证实其所分泌的单克隆抗体能够特异识别并结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型 抗原。该杂交瘤细胞株已于2014年4月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心（简称为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No. 9051，保藏地点：中国，北京。
[0013] 在本发明的另一方面，提供一种特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克 隆抗体，由上述保藏编号为CGMCC No. 9051的杂交瘤细胞系分泌产生。
[0014] 本文所采用的术语"单克隆抗体（单抗）"指从一纯系细胞得到的免疫球蛋白，具 有相同的结构和化学特性，对单一抗原决定簇有特异性。单克隆抗体与常规多克隆抗体制 剂（通常是具有针对不同决定簇的不同抗体）不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决 定簇。除了它们的特异性外，单克隆抗体的好处还在于它们是通过杂交瘤或重组工程细胞 培养获得，不会混杂有其它免疫球蛋白。修饰语"单克隆"表示了抗体的特性，是从均一的 抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。
[0015] 本文所采用的术语"杂交瘤细胞系"（英文名称：hybridoma cell line)，指从杂交 瘤细胞中筛选培养出的细胞系。
[0016] 在本发明的另一方面，提供一种上述单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：
[0017] 步骤1、制备免疫原：配制巧克力培养基，将胸膜肺炎放线杆菌血清7型标准菌株 复苏，大量培养，用生理盐水洗菌，离心，弃上清，细菌沉淀用生理盐水洗悬浮，离心，生理盐 水悬浮的S7细菌全抗原作为免疫原；
[0018] 步骤2、小鼠免疫：通过反复多次小剂量的小鼠皮下免疫，挑选可分泌高效价的抗 App血清7型多克隆抗体的小鼠；
[0019] 步骤3、细胞融合：取免疫小鼠脾脏细胞,通过体外与小鼠骨髓瘤细胞融合；
[0020] 步骤4、阳性杂交瘤细胞筛选：用间接ELISA试验筛选抗胸膜肺炎放线杆菌血清7 型抗原的阳性杂交瘤细胞；
[0021] 步骤5、阳性杂交瘤细胞的获得：选择强阳性反应的杂交瘤细胞，用有限稀释法连 续克隆3次，最后一次克隆后检测为阳性的孔所得细胞株即为稳定分泌的、特异的抗胸膜 肺炎放线杆菌血清7型抗体的杂交瘤细胞株；
[0022] 步骤6、杂交瘤细胞的培养与保存：将阳性杂交瘤细胞扩增培养，收集细胞；一部 分用于生产小鼠腹水抗体，另一部分液氮保存。
[0023] 作为本发明优选的技术方案，步骤1具体为：配制巧克力培养基，将胸膜肺炎放线 杆菌血清7型标准菌株复苏，大量培养，用生理盐水将菌洗下，8000r/min离心lOmin，弃上 清，细菌沉淀用生理盐水洗悬浮，离心，如此洗菌3次。细菌沉淀用含0. 5%甲醛生理盐水悬 浮，放置4°C过夜灭活，8000r/min离心lOmin去除甲醛，用生理盐水洗3次。生理盐水悬浮 的S7细菌全抗原作为免疫原；
[0024] 作为本发明优选的技术方案，步骤2具体为：将上述免疫原与等体积的福氏完全 佐剂混合乳化，对8周龄的BALB/C雌鼠做腹腔注射，3-4周后用同样免疫原乳化在福氏不完 全佐剂中，作第二次腹腔注射，2-3周后用加倍剂量的免疫原作最后一次腹腔注射，三天后 取小鼠脾脏用于细胞融合。
[0025] 作为本发明优选的技术方案，步骤3具体为：取免疫小鼠脾脏细胞，通过体外与 小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5-10:1的比例在50% PEG下融合，用HAT培养基筛选；融合细 胞培养5d后，用HAT培养基再换液一次，第10d用HT培养基换液，等到融合细胞覆盖孔低 5% -30%时，取上清用间接ELISA方法筛选。
[0026] 作为本发明优选的技术方案，步骤4中，筛选时包被抗原为App S7型经反复冻融 3次处理的抗原，所述抗原以1:5000稀释，并以其它血清型的App为阴性对照。
[0027] 此外，在本发明的另一方面，还提供一种体外化学标记处理的上述抗胸膜肺炎放 线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体。
[0028] 所述体外化学标记处理的步骤如下：
[0029] 1)将腹水单克隆抗体用硫酸铵纯化；
[0030] 2)用改良过碘酸钠法将抗体与HRP偶联，盐析法去除样品中未结合的HRP，最终产 物对PBS透析过夜，即得到体外化学标记过的辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体。
[0031] "改良过碘酸钠法"可参考韩文瑜等主编的病原细菌检验技术（吉林科学技术出版 社1992年7月第1版P204)，主要步骤如下：
[0032] (1)将5mgHRP溶于0. 5ml蒸馏水中，加入新配制的0. 06mol/L NaI04水溶液 0. 5ml，混匀置冰箱中30min。
[0033] (2)加入0· 16mol/L乙醇水溶液0· 5ml，置室温放置30min。
[0034] (3)加入含5mg纯化抗体的水溶液1ml，混勻后装入透析袋，以0· 05mol/L, pH值 9. 5碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6小时或过夜。
[0035] (4)吸出后，加 NaBH4溶液（5mg/ml) 0· 2ml,置冰箱2小时。
[0036] (5)将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液，置冰箱30分钟，离心，将所 得沉淀物溶于少许〇. 〇2mol/L，pH值7. 4PBS中，并对之透析过夜。
[0037] (6)离心除去不溶物，即得到体外化学标记过的辣根过氧化物酶（HRP)标记的单 克隆抗体。
[0038] 此外，在本发明的另一方面，还提供一种竞争ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清7 型抗体试剂盒,主要包括：胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原；如权利要求3所述的体外化学 标记处理的可特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体；胸膜肺炎放线杆菌 血清7型阳性对照血清；阴性对照血清。
[0039] 该试剂盒的使用方法，包括如下步骤：1)包被抗原；2)洗板；3)封闭；4)洗板；5) 加入被检血清，同时加入辣根过氧化物酶标记的抗App血清7型抗原的单克隆抗体；6)洗 板；7)加入底物；8)终止反应；9)检测吸光值（0D值）；10)计算并判定结果。步骤10)中， 所述判定结果具体如下：（1)阴性对照血清0D值大于0. 8 ; (2) 0D阳性/0D阴性< 20% ;对 照成立才能进行样品判断；（3)血清样品1:16稀释，其S/N值（0D样品/阴性0D)彡20% 为阳性，S/N > 40%为阴性，40%彡S/N > 20%为可疑。
[0040] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：为准确检测App血清7型，在研制App 血清7型单抗的基础上，研制了竞争ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗体试剂盒。 与使用多克隆抗体相比，使用单克隆抗体，检测试剂盒容易批量生产，试剂盒的质量容易控 制。与间接ELISA相比，竞争ELISA检测无种属特异型，除检测猪抗体外，还能检测鼠等实 验动物抗体，可以用于建立猪传染性胸膜肺炎实验动物模型效果评估。且本发明建立的竞 争ELISA方法检测样品可以在lh内完成，比目前的商品化间接ELISA检测试剂盒快0. 5h， 比检验检疫行业标准使用的阻断ELISA快1. 5h，一天内可以完成多批次样品检测，符合疫 病快速诊断的要求。
【专利附图】
【附图说明】
[0041] 图1是本发明实施例2中12% SDS-PAGE IgM电泳图；其中，Μ代表蛋白分子量标 准（170kD, 130kD, 95kD, 72kD(red), 55kD, 43kD, 34kD, 26kD, 17kD, llkD) ;1 代表 2ug BSA ;2 代表 4ug BSA ;3 代表 8ug BSA ;4 代表 16ug BSA ;5 代表 lul IgM(稀释 10 倍）；6 代表 2ul IgM(稀释10倍）；7代表4ul IgM(稀释10倍）。
[0042] 图2是本发明实施例3中1:1万稀释的酶浓度检测不同稀释度抗原的结果示意 图；
[0043] 图3是本发明实施例3中1:2万稀释的酶浓度检测不同稀释度抗原的结果示意 图；
[0044] 图4是本发明实施例3中阳性血清比值的散点图；
[0045] 图5是本发明实施例3中阴性血清比值的散点图；
[0046] 图6是本发明实施例3中不同时间阴性和阳性血清吸光值的变化示意图；
[0047] 代号为SHCIQ-S7-8D12的小鼠杂交瘤细胞株（来源于小鼠 Mus musculus)，经间 接ELISA和竞争ELISA检测，证实其所分泌的单克隆抗体能够特异识别并结合胸膜肺炎放 线杆菌血清7型抗原。该小鼠杂交瘤细胞株已于2014年4月10日保藏在中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心（简称为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No. 9051，保藏地点： 中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
【具体实施方式】
[0048] 下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制 本发明。
[0049] 实施例1杂交瘤细胞株制备及单克隆抗体的制备
[0050] 步骤1、免疫原的制备：配制巧克力培养基，在巧克力培养基上划线将胸膜肺炎放 线杆菌血清7型标准菌株（App S7)复苏、大量培养，用生理盐水将菌洗下，8000r/min离 心lOmin，弃上清，细菌沉淀用生理盐水悬浮，离心，如此洗菌3次。细菌沉淀用含0.5%甲 醛生理盐水悬浮，放置4°C过夜灭活，8000r/min离心lOmin去除甲醛，用生理盐水洗3次。 生理盐水悬浮的App S7细菌全抗原作为免疫原；步骤2、BALB/C小鼠免疫：将上述免疫原 (含1〇4胸膜肺炎放线杆菌）与等体积的福氏完全佐剂混合乳化，对8周龄的BALB/C雌鼠 做腹腔注射免疫，3-4周后用同样免疫原乳化在福氏不完全佐剂中，作第二次腹腔注射免 疫，2-3周后用加倍剂量的免疫原进行腹腔注射加强免疫，三天后取小鼠脾脏用于细胞融 合。步骤3、细胞融合：取上述免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0)按5-10:1的比 例，在无血清的RPMI-1640(Gibco)培养基中混匀，1500rpm离心5min，去除培养基，用50% PEG(Sigma，分子量1500)作为融合剂，在37°C下水浴下加入lml，使其融合2min，用无血清 的RPMI-1640培养基终止融合后1500rpm离心5min，沉淀用HAT培养基悬浮，分装到96孔 含有饲养细胞的细胞板中，37°C，5% C02的细胞培养箱中培养。步骤4、阳性杂交瘤细胞筛 选：细胞培养箱中培养5天后，用HAT培养基换液一次，第10天用HT培养基换液，等到融合 细胞覆盖孔底5 % -30 %时用间接ELISA试验筛选分泌抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原 抗体的阳性杂交瘤细胞，筛选时包被抗原为App S7型经反复冻融3次处理的抗原（1:5000 稀释，重量/体积，g/ml)，并以其它血清型的App为阴性对照。步骤5、阳性杂交瘤细胞的 获得：选择间接ELISA强阳性反应的杂交瘤细胞孔，用有限稀释法连续克隆细胞3次，最后 一次克隆后检测为阳性的孔所得细胞株即为分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。阳性杂交瘤 细胞为稳定分泌的、特异的抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型的杂交瘤单克隆细胞；
[0051] 步骤6、杂交瘤细胞的培养与保存：将阳性杂交瘤细胞扩增培养，收集细胞；一部 分用于生产小鼠腹水抗体，用冻存液悬浮另一部分细胞后分装于冻存管后于液氮中保存。
[0052] 步骤7、腹水制备：取8周龄健康BALB/C小鼠，腹腔注入0. 5ml/只灭菌的液体石 蜡，10天后注入杂交瘤细胞0. 5ml/只（浓度为106个/ml)，待小鼠腹部膨胀，行动困难时， 用大号针头刺入小鼠腹部收集腹水，4000g离心3min，上清液即为腹水单克隆抗体。
[0053] 实施例2体外化学标记单克隆抗体
[0054] 主要步骤是：
[0055] 1、单抗的亚型鉴定：使用荷兰HyCult Biotechnology生产的小鼠单克隆抗体检 测试剂盒（Mouse Mab Isotying test kit),步骤如下：
[0056] a)将细胞上清或腹水用pH7. 4PBS适当稀释，至抗体浓度1-50 μ g/mL备用；
[0057] b)加500 μ L稀释液至含一条试纸条的检测管中；
[0058] c)再加500 μ L a)中稀释好的样品至检测管中；
[0059] d)将试纸条完全浸入并轻轻搅动；
[0060] e)轻摇瓶子混匀兔抗鼠 K链胶粒，取lmL加入至检测管中；
[0061] f)在18-25°C环境中振荡30min左右判读结果，试纸条在振荡过程中始终保持浸 在溶液中。
[0062] 经检测，本发明建立的稳定分泌抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗体的杂交瘤单克 隆细胞系（保存代号为SHCIQ-S7-8D12)分泌的单抗为IgM亚型。
[0063] 2、单抗的纯化
[0064] 将腹水单克隆抗体用硫酸铵纯化
[0065] a) 2ml腹水加入2ml PBS溶液稀释，共得到4ml溶液，加入饱和硫酸铵溶液4ml (缓 慢加入，一边加一边混匀），4°C放置过夜；
[0066] b)4°C离心（lOOOOrpm，10分钟）弃去上清，沉淀加入4ml PBS溶液，重悬，加入饱 和硫酸铵溶液2ml (缓慢加入，一边加一边混匀），4°C放置过夜；
[0067] c)4°C离心（lOOOOrpm，10分钟）弃去上清，沉淀加入4ml PBS溶液，重悬，加入饱 和硫酸铵溶液2ml (缓慢加入，一边加一边混匀），4°C放置过夜；
[0068] d) 4°C离心（lOOOOrpm，10分钟）弃去上清，沉淀加入2ml PBS溶液，对1LPBS透析 24小时（换2次透析液）。
[0069] 3、单抗含量的电泳检测
[0070] 配制12% SDS-PAGE胶，将纯化的IgM单抗10倍稀释后，分别取lul、2ul、4ul电 泳，用BSA作为定量参考，见图1。根据电泳检测结果，纯化后（即标记前）的IgM的浓度约 为 10mg/ml〇
[0071] 4、单抗的标记
[0072] 参考韩文瑜等主编的病原细菌检验技术（吉林科学技术出版社1992年7月第1 版P204)，由上海友科生物科技有限公司用改良过碘酸钠法将抗体与HRP偶联，主要步骤如 下：
[0073] (1)将5mgHRP溶于0. 5ml蒸馏水中，加入新配制的0. 06mol/L NaI04水溶液 0. 5ml，混匀置冰箱中30min。
[0074] (2)加入0· 16mol/L乙醇水溶液0· 5ml，置室温放置30min。
[0075] (3)加入含5mg纯化抗体的水溶液1ml，混勻后装入透析袋，以0· 05mol/L, pH值 9. 5碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6小时或过夜。
[0076] (4)吸出后，加 NaBH4溶液（5mg/ml) 0· 2ml,置冰箱2小时。
[0077] (5)将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液，置冰箱30分钟，离心，将所 得沉淀物溶于少许〇. 〇2mol/L，pH值7. 4PBS中，并对之透析过夜。
[0078] (6)离心除去不溶物，即得到体外化学标记过的辣根过氧化物酶（HRP)标记的单 克隆抗体。
[0079] 5、酶标效价的初步测定
[0080] 使用直接ELISA，包被抗原为App S7和App S6,均1:50倍稀释，后者作为阴性对 照。将酶标单抗按照1:625-1:40000稀释，滴定酶标抗体效价，见表1，初步选择酶浓度1:1 万-1:2万。
[0081] 表1酶标抗体效价滴定
[0082]
【权利要求】
1. 一种分泌特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞系， 其保藏编号为CGMCC No. 9051。
2. -种特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体，由权利要求1所述的 杂交瘤细胞系分泌产生。
3. -种如权利要求2所述单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤： 步骤1、制备免疫原：配制巧克力培养基，将胸膜肺炎放线杆菌血清7型标准菌株复苏， 大量培养，用生理盐水洗菌，离心，弃上清，细菌沉淀用生理盐水洗悬浮，离心，生理盐水悬 浮的S7细菌全抗原作为免疫原； 步骤2、小鼠免疫：通过反复多次小剂量的小鼠皮下免疫，挑选可分泌高效价的抗App 血清7型多克隆抗体的小鼠； 步骤3、细胞融合：取免疫小鼠脾脏细胞,通过体外与小鼠骨髓瘤细胞融合； 步骤4、阳性杂交瘤细胞筛选：用间接ELISA试验筛选抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗 原的阳性杂交瘤细胞； 步骤5、阳性杂交瘤细胞的获得：选择强阳性反应的杂交瘤细胞，用有限稀释法连续克 隆3次，最后一次克隆后检测为阳性的孔所得细胞株即为稳定分泌的、特异的抗胸膜肺炎 放线杆菌血清7型抗体的杂交瘤细胞株； 步骤6、杂交瘤细胞的培养与保存：将阳性杂交瘤细胞扩增培养，收集细胞；一部分用 于生产小鼠腹水抗体，另一部分液氮保存。
4. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1具体为：配制巧克力培养基，将 胸膜肺炎放线杆菌血清7型标准菌株复苏，大量培养，用生理盐水将菌洗下，8000r/min离 心lOmin，弃上清，细菌沉淀用生理盐水洗悬浮，离心，如此洗菌3次。细菌沉淀用含0. 5%甲 醛生理盐水悬浮，放置4°C过夜灭活，8000r/min离心lOmin去除甲醛，用生理盐水洗3次。 生理盐水悬浮的S7细菌全抗原作为免疫原。
5. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2具体为：将上述免疫原与等体积 的福氏完全佐剂混合乳化，对8周龄的BALB/C雌鼠做腹腔注射，3-4周后用同样免疫原乳化 在福氏不完全佐剂中，作第二次腹腔注射，2-3周后用免疫原作最后一次腹腔注射，三天后 取小鼠脾脏用于细胞融合。
6. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤3具体为：取免疫小鼠脾脏细胞， 通过体外与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5-10:1的比例在50 % PEG下融合，用HAT培养基筛 选；融合细胞培养5d后，用HAT培养基再换液一次，第10d用HT培养基换液，等到融合细胞 覆盖孔低5% -30%时，取上清用间接ELISA方法筛选。
7. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤4中，筛选时包被抗原为App S7型 经反复冻融3次处理的抗原，所述抗原以1:5000稀释，并以其它血清型的App为阴性对照。
8. -种体外化学标记处理的如权利要求2所述的特异结合胸膜肺炎放线杆菌血清7型 抗原的单克隆抗体。
9. 一种如权利要求8所述的单克隆抗体，其特征在于，所述体外化学标记处理的步骤 如下： 1) 将腹水单克隆抗体用硫酸铵纯化； 2) 用改良过碘酸钠法将抗体与HRP偶联，盐析法去除样品中未结合的HRP，最终产物对 PBS透析过夜，即得到体外化学标记过的辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体。
10. -种竞争ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗体试剂盒，其特征在于，主要包 括：胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原；如权利要求3所述的体外化学标记处理的可特异结 合胸膜肺炎放线杆菌血清7型抗原的单克隆抗体；胸膜肺炎放线杆菌血清7型阳性对照血 清；阴性对照血清。
【文档编号】G01N33/577GK104297485SQ201410571437
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】李树清, 陈志飞, 张强, 王巧全, 林颖峥, 刘雨潇, 吴建详, 陆承平, 宋青, 唐智芳 申请人:中华人民共和国上海出入境检验检疫局, 南京农业大学