一种总胆汁酸的测定试剂的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种总胆汁酸的测定试剂，该试剂包含两个组份：试剂1：磷酸盐缓冲液、Thio-NAD、EMULGENB-66?CTAB、NaCl?、2-羟基吡啶-N-氧化物；试剂2：甘氨酸盐缓冲液、硫酸葡聚糖、EGTA、3α-HSD、EMULGENB-66、NADH、2-羟基吡啶-N-氧化物。本发明通过加入阳离子和非离子表面活性剂EMULGENB-66?的组合，有效消除了胆红素的干扰；本品加入选定的稳定剂，使试剂在2-8度保存1年而不影响其性能；通过调整底物浓度和离子强度，使试剂的回收率到达98%以上。本发明试剂具有测定结果准确，抗干扰能力强，稳定性好等优点。
【专利说明】一种总胆汁酸的测定试剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种体外诊断试剂，特别是一种总胆汁酸的测定试剂。
【背景技术】
[0002] 血清总胆汁酸可同时反映肝脏细胞分泌、合成、损伤三个方面状态，实验表明总 胆汁酸对肝硬化、肝癌的检测阳性率高达95%，总胆汁酸检测的普及使得各类急慢性肝炎、 肝硬化，乃至肝癌病人的早期诊断有了较为有效的依据，临床诊断意义非常大。
[0003] 早在上世纪70年代，挪威科明公司采用3 α -羟基类固醇脱氢酶（3 a -HSD)成功 的生产出第一代酶法胆汁酸试剂，使胆汁酸的测定真正的进入了临床领域。随后总胆汁酸 测定的方法发展较快，目前临床上应用的是第五代酶法测定试剂。其反应原理如下：胆汁 酸会被3 α -羟甾醇脱氢酶(亦为类固醇脱氢酶，3 a-HSD)以及β -硫代烟酰胺腺嘌呤二核 苷酸氧化型(简称硫代辅酶：Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β -硫代烟 酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH)。此外生成的3-酮类固醇在3 α -羟留醇脱氢酶 (3 a -HSD)及β -烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH)存在下，生成胆汁酸及β -烟酰胺 腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD)。如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时 间内生成的β -硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH)在405nm处的吸光度变 化，以求得胆汁酸的浓度。
[0004] 目前使用的绝大部分总胆汁酸试剂的稳定性都较差，产品在冷藏条件下的有效期 绝大多数都在10个月以下，37度热稳定性在5天以下，试剂开瓶稳定在两周之内（测定值不 断下降）；并且多数品牌总胆汁酸试剂胆红素负干扰明显，且试剂的回收率低，多数试剂回 收率在80%左右，有的甚至低达60%，以致临床样本经常出现负值。因此，目前多数厂家试剂 在应用上存在很多的局限性。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是提供一种稳定性好，抗干扰能力强，回收率高的总胆汁酸测定 试剂。
[0006] -种总胆汁酸的测定试剂，该试剂由试剂1和试剂2组成，其特征在于，试剂1由 磷酸盐缓冲液、Thio-NAD、EMULGEN B-66、CTAB、NaCl 2-羟基吡啶-N-氧化物组成； 试剂2由甘氨酸盐缓冲液、硫酸葡聚糖、EGTA、3a-HSD、EMULGEN B-66、NADH2-羟基吡 啶-N-氧化物组成。
[0007] 其中该试剂的组份浓度为： 试剂1 : 磷酸盐缓冲液 2-6g/L Thio-NAD 1· 3-1. 7 g /L EMULGEN B-66 0· 3_2ml/L CTAB 0. 1-1. 5g/L NaCl 3-25g/L 2-羟基吡啶-N-氧化物 0. 1-1. 2g/L 试剂2 : 甘氨酸盐缓冲液 10-20g/L 硫酸葡聚糖 1. 2-7g/L EGTA l-5g/L 3 a -HSD 10KU/L EMULGEN B-66 l_3ml/L NADH 3g/L 2-羟基吡啶-N-氧化物 0. 1-1. 2g/L。
[0008] 为了解决总胆汁酸的试剂稳定性不好的问题，本发明在试剂2组份中添加了稳定 剂硫酸葡聚糖、EGTA以及聚氧乙烯基衍生物类表面活性剂来增强3 a -HSD及NADH的稳定 性；为了消除胆红素的干扰，本发明通过在试剂1中添加非离子表面活性剂EMULGEN Β-66 和阳离子表面活性剂CTAB的组合来提高试剂的抗干扰能力；本发明研究表明，提高试剂 1中Thio-NAD的含量及加入电解质，能显著的提高试剂的回收率，因此我们把试剂1中 Thio-NAD的含量由以前文献报道的lg/L左右提高到1.5g/L，并加入了较多的NaCl，有效的 解决了总胆汁酸的测定试剂回收率低的问题。
[0009] 上述添加剂的浓度范围为： 硫酸葡聚糖：1.2-7g/L EGTA ：l-5g/L EMULGEN B-66 :0· 3-3ml/L CTAB ：0. 1-1. 5g/L NaCl ：3-25g/L Thio-NAD 1. 3-1. 7 g /L 。 上述试剂的使用方法： (1)样品准备：样本为及时分离的空腹血清(或肝素抗凝血浆)。样本收集后应尽快测 定，必须避光保存，避免溶血和污染；血清中总胆汁酸在4°C可稳定一周，冷冻可保存3个 月。
[0010] (2)采用全自动生化仪对步骤（1)的样品进行检测，步骤如下： 试验条件：
【权利要求】
1. 一种总胆汁酸的测定试剂，该试剂由试剂1和试剂2组成，其特征在于，试剂1由 磷酸盐缓冲液、Thio-NAD、EMULGEN B-66、CTAB、NaCl 2-羟基吡啶-N-氧化物组成； 试剂2由甘氨酸盐缓冲液、硫酸葡聚糖、EGTA、3a-HSD、EMULGEN B-66、NADH2-羟基吡 啶-N-氧化物组成。
2. 如权利要求1所述的总胆汁酸的测定试剂，其特征在于，所述的试剂组成的各组份 浓度为： 试剂1 : 磷酸盐缓冲液 2-6g/L Thio-NAD 1· 3-1. 5g/L EMULGEN B-66 0· 3_2ml/L CTAB 0. 1-1. 5g/L NaCl 3-25g/L 2-羟基吡啶-N-氧化物 0. 1-1. 2g/L ; 试剂2 : 甘氨酸盐缓冲液 10-20g/L 硫酸葡聚糖 1. 2-7g/L EGTA l-5g/L 3 a -HSD 10KU/L EMULGEN B-66 l_3ml/L NADH 3g/L 2-羟基吡啶-N-氧化物 0. 1-1. 2g/L。
3. 如权利要求1或2所述的总胆汁酸的测定试剂，其特征在于，所述的试剂组成的各组 份浓度为： 试剂1 : 磷酸盐缓冲液 3g/L Thio-NAD 1.6g/L EMULGEN B-66 1ml/L CTAB lg/L NaCl 15g/L 2-羟基吡啶-N-氧化物 0. 3g/L ; 试剂2 : 甘氨酸盐缓冲液 15g/L 硫酸葡聚糖 5g/L EGTA 2g/L 3 a -HSD 10KU/L EMULGEN B-66 2ml/L NADH 3g/L 2-羟基吡啶-N-氧化物 0. 3g/L。
【文档编号】G01N33/52GK104155438SQ201410454839
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年9月9日 优先权日:2014年9月9日
【发明者】黄俊潮, 李希文 申请人:湖北科技学院