一种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒及其制备方法
【专利摘要】一种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选剂盒的制备，具体步骤如下：任一裂解液进行裂解制备样本，取上清后，加入同等体积的制备试剂QLA;充分混合；取溶液点在靶板上，通风处下静置后进样检测；QLA物质组成及体积比为：30%离子水，30-50%甲醇，20-40%正丙醇，1-5%甲酸；此试剂盒制备方法简单、成本较低。
【专利说明】一种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选试 剂盒及其制备
【技术领域】
[0001] 本技术属于分析化学应用领域，具体涉及表面激光解析质谱领域。
【背景技术】
[0002] 表面激光解析质谱是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱，其中以基质 辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-T0F-MS)为最重要的实例，此项发明获得过诺贝 尔化学奖。主要由两部分组成：基质辅助激光解吸电离离子源（MALDI)和飞行时间质量分 析器（TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收 能量传递给生物分子，在电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使 生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。T0F 的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测 即测定离子的质荷比（M/Z)与离子的飞行时间成正比，检测离子。MALDI-T0F-MS具有灵敏 度高、准确度高及分辨率高等特点，为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。
[0003] 然而，以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱为首的所有基于表面激光解析的质 谱都需要将样品制备在特制靶板上面，其操作是将样品分散在基质分子中并形成晶体。当 用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使 得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时 间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比（M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离 子，并测得样品分子的分子量。焦点问题就在于通用的基质分子的分子量在l〇〇〇_3〇〇〇da， 造成了过量的背景质谱峰。这就决定了所有此类基于表面激光解析的质谱分析只能适用于 大分子检测，比如蛋白质，长链多肽，核酸，高分子材料等等，而不能应用于小分子检测（分 子量小于l〇〇〇da)，或者说基于表面激光解析的质谱分析的高灵敏度/高通量等独特的优 势无法施展在小分子分析检测上面.而分子量小于l〇〇〇da的小分子却是对人类最重要的 最具应用价值的一类化学产品，例如95%以上的药物小分子，所有的氨基酸，维生素等等和 人类生活健康相关的化学物质。
[0004] 目前现有技术针对小分子检测和筛选还停留在光谱法检测，例如荧光发光检测或 者衍生出可以荧光检测的底物，但此类检测要求目标小分子分子结构具有光活性集团，另 一弊端就是往往光度法灵敏度较低，检测不到微量的小分子浓度。液相质谱（LC-MS)及气 相质谱（GC-MS)的已经开始应用在小分子的检测和高通量筛选。但需要消耗大量的人力和 溶剂耗材，而且一个样品从制备到质谱分析再到出结果需要相当长一个过程，根据要求不 同，分析一个样品从样品制备到拿到结果需要30-60分钟，远远不能满足现代生物医药发 展的高通量筛选要求。
【发明内容】
[0005] 发明目的：找到一种制备方法简单、成本较低的增强电离缓冲液制备方法，节省开 支与时间。
[0006] 技术方案：一种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒，由 将已裂解样本和同等体积的制备试剂QLA组成，QLA物质组成及体积比为：30%离子水， 30-50%甲醇，20-40%正丙醇1-5%甲酸。
[0007] -种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，具体步 骤如下：任一裂解液进行裂解制备样本，取上清后，加入同等体积的制备试剂QLA ;充分混 合；取溶液点在靶板上，通风处下静置后进样检测；QLA物质组成及体积比为：30%离子水， 30-50%甲醇，20-40%正丙醇，1-5%甲酸。
[0008] 优选方案为：QLA物质组成及体积比为：30%离子水，30%甲醇，20%正丙醇1%甲 酸。
[0009] 有益效果：1、制备方法简单；2、成本较低。
【专利附图】
【附图说明】
[0010] 图1利用本发明检测到的氨基酸分子质谱图
【具体实施方式】
[0011] 本技术方法适合氨基酸分子，因为氨基酸分子结构上带有多个氨基，天然结合靶 板，加上本发明的多肽分子曾强电离缓冲液，使得多数氨基酸分子接近100%电离和气化飞 向质谱检测器。
[0012] 首先通过某种裂解方式制备样本，取上清后，加入同等体积的制备试剂 QLP (70-90%离子水，10-30%甲醇，1-5%甲酸）。充分混合后，取0. 5微升溶液点在靶板上， 通风处下静置10分钟后进样即可。
[0013] 检测的结果如如图1所示。
【权利要求】
1. 一种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒，其特征在于，由 将已裂解样本和同等体积的制备试剂QLA组成，QLA物质组成及体积比为：30%离子水， 30-50%甲醇，20-40%正丙醇1-5%甲酸。
2. -种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量筛选试剂盒的制备，其特征在 于，具体步骤如下：任一裂解液进行裂解制备样本，取上清后，加入同等体积的制备试剂 QLA ;充分混合；取溶液点在靶板上，通风处下静置后进样检测；QLA物质组成及体积比为： 30%离子水，30-50%甲醇，20-40%正丙醇，1-5%甲酸。
3. 根据权利要求1所述的应用于一种应用于氨基酸分子定性定量分析检测和高通量 筛选试剂盒的制备，其特征在于，QLA物质组成及体积比为：30%离子水，30%甲醇，20%正 丙醇1 %甲酸。
【文档编号】G01N27/64GK104215682SQ201410452868
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月9日 优先权日:2014年9月9日
【发明者】成晓亮, 郑可嘉 申请人:武汉品生科技有限公司