一种不含苯的组织脱蜡透明剂的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种不含苯的组织脱蜡透明剂，用于生物组织学、组织病理学或者法医学，它既可以使组织透明、又可以使组织脱蜡的制剂。属体外诊断试剂【技术领域】。本发明脱蜡透明剂主要含有95%－100%脂环烃，余量为辅料，所述的脂环烃为单环脂环烃或二环脂环烃。本发明不含苯的脱蜡透明剂具有无毒，作用柔和，不易引起组织材料收缩变形、硬化脆化，可提高切片的完好率；对潮湿环境不敏感，不易因吸收空气中的水分而变浑浊的优点；不仅可用于液基细胞学、免疫组织化学、生物组织学、常规病理诊断、免疫组织化学的诊断技术，也适用于特殊染色法和组织化学技术中。采用的脂环烃透明剂（环己烷）的折射指数为1.42，(甲基环己烷)折射率1.42,与组织的折射指数（1.418）基本一致，透明效果更好。
【专利说明】一种不含苯的组织脱蜡透明剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于生物组织学，组织病理学，法医学的不含苯的组织脱蜡透明 齐IJ，是一种体外诊断试剂，具体涉及既可以使组织透明、又可以使组织脱蜡的制剂。属体外 诊断试剂【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 临床实验室在临床医学中发挥着越来越重要的作用，临床实验室提供的诊断信息 涉及诊断、治疗、健康状况评估、公共卫生突发事件、科学研究各方面。占患者全部诊断、疗 效等医疗信息的60%以上。
[0003] 组织病理学的诞生已有150多年的历史。组织石蜡切片是在观察组织形态和免 疫组化等定性分析中最常用的一种切片技术，广泛应用于临床病理诊断和实验研究。组织 经固定、脱水后，必须经过一种既能与乙醇相混合，又能溶解石蜡的溶剂，通过其媒介作用， 使石蜡浸入组织块。在此过程中组织中的水分被溶剂取代，其折射指数接近组织蛋白的折 射指数，组织块变得透明。组织经石蜡包埋后制成蜡块，用切片机制成切片后，需要将切片 中的蜡脱去，才能进行染色。在透明和脱蜡这两个程序中，使用最多的脱蜡透明剂仍在沿用 1〇〇多年前使用的二甲苯、苯、甲苯。
[0004] 苯、甲苯、二甲苯属于有毒有害化学品，会损伤肝、肾、骨髓和中枢神经系统。具有 潜在的致癌性。长期接触二甲苯对人体机能会产生严重的影响，且二甲苯的排放也会对环 境造成严重污染。实验和临床研究都表明吸入二甲苯蒸汽会导致头痛、头晕、恶心和呕吐。 医院病理科大量使用二甲苯，会对医生和实验室人员的身体造成伤害。
[0005] 二甲苯的的替代品用于人体组织标本石蜡切片脱蜡和透明多年来一直是研究的 对象。
[0006] 使用松节油作为透明剂是P.Mayerl910年提出的，由于其挥发慢，使透明后封 片的时间延长。松节油还会导致银染色的褪色。含松节油的透明剂在国外已上市多年， 如 Baxter 公司的 AmeriClear。中国发明专利（ZL91108571. 8 ;CN200910050030. 2 和 CN201110023746. 0)配方中皆使用松节油作为组织染色后透明。这些透明剂只有透明作用， 无脱蜡作用。
[0007] 柠檬烯用于脱蜡始于1981年，但柠檬烯是油性的；对某些个体可能会引起极为严 重的过敏反应。美国专利（USP7, 070, 951)，就是采用醇类与柠檬烯的混合物，辅以表面活 性剂脱蜡。醇类本身脱蜡效果很差，会造成组织过度脱水，使标本发收缩、硬化、脆裂。
[0008] 亦有用短链烷烃或支链烷烃做脱蜡剂，如中国专利ZL00122030. 6,用的是航空煤 油和石油醚(航空煤油和石油醚都是短链烷烃的混合物)。短链烷烃的缺点是气味强烈，沸 点低，在环境中迅速弥散，使用者难于接受。航空煤油含有不会挥发的多种添加剂，如四乙 基铅，碱性酚，二壬基萘磺酸等，这些添加剂对组织的影响尚待认识。
[0009] 目前Merck公司在国际市场上销售一种用于组织透明的二甲苯替代品，商品名 为 NEO-CLEAR(R) XYLENE SUBSTITUTE。其成分是一种工业用油漆稀释剂（bromohexanol acetate)，气味强烈，有致癌性。对人体和环境均可能造成危害。因此不是理想的二甲苯替 代品。
[0010] 为使组织达到最佳的透明效果，透明剂的折射指数应尽可能与组织蛋白的折射指 数接近。动物组织的折射指数为1.418,而二甲苯的折射指数为1.49,苯、甲苯的折射指数 为1.50,并不能达到最佳的透明效果。目前未見既可以使组织透明、又可以脱蜡，完全取代 苯类制剂达到最佳效果的产品。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的在于提供一种不含苯，甲苯，二甲苯的生物组织(包括人体组织、动 物、植物、昆虫、微生物及其它标本)的脱蜡、透明剂。可以用于石蜡切片脱蜡，也可用于组织 固定后透明，和染色后封片前透明。
[0012] 实现本发明不含苯的组织脱蜡透明剂采用的具体技术方案：脱蜡透明剂主要含有 95% - 100%脂环烃，余量为辅料，所述的脂环烃为单环脂环烃或二环脂环烃。
[0013] 所述辅料为表面活性剂、植物精油及抗氧化剂中的一种或多种；其中表面活性剂 浓度为〇. 〇% - ο. 1%、植物精油浓度为〇. 〇% - 5. 0%，抗氧化剂浓度为0. 01% - 0. 05%。
[0014] 脱蜡透明剂中可以加入抗氧化剂，让染色的组织透明后长期保持颜色。
[0015] 所述脂环烃中的单环脂环烃或二环脂环烃为环戊烷、环已烷、环庚烷、环辛烷、甲 基环己烷，二甲基环己烷，二环己烷中的一种或者多种。
[0016] 所述的单环脂环烃为环己烷，甲基环己烷；所述的二环脂环烃为二环己烷。
[0017] 所述表面活性剂为阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂或 者双性离子表面活性剂中的一种或者多种。
[0018] 抗氧化剂为丁基羟基茴香醚（BHA)、二丁基羟基甲苯（BHT)、没食子酸丙酯（PG)、 特丁基对苯二酚（TBHQ)或者樟脑醌（CQ)中的一种或者多种。
[0019] 一种不含苯的组织脱蜡透明剂的纯化利记博彩app，其特征在于采用市售含有一定量 的苯和/或其他烃类的脂环烃，需按以下方法纯化： (1) 加入少量的发烟硫酸进行振摇，分出酸，再加发烟硫酸振摇； (2) 步骤（1)反复多次，直至酸的颜色呈淡黄色，依次再用浓硫酸、水、2%氢氧化钠溶液 洗涤，再用水洗涤，用氢氧化钾干燥后蒸馏，即可。
[0020] 使用权利要求1所述的不含苯的组织脱蜡透明剂作为用于组织切片脱蜡的应用。
[0021] 使用权利要求1所述的不含苯的组织脱蜡透明剂作为用于组织固定后透明或者 染色后封片前透明的应用。
[0022] 本发明采用脂环烃作为组织透明的脱蜡剂，采用的脂环烃可以是单环脂环烃或二 环脂环烃。在相同时间、温度的条件下，经本发明处理的石蜡切片组织观察效果与用二甲苯 处理的组织切片观察效果一致，从而代替二甲苯。
[0023] 本发明采用的脂环烃透明剂(环己烷）的折射指数为1. 42,（甲基环己烷）折射率 1. 42,与组织的折射指数（1. 418)基本一致，透明效果更好。
[0024] 本发明不含苯的脱蜡透明剂具有无毒，作用柔和，不易引起组织材料收缩变形、硬 化脆化，可提高切片的完好率；对潮湿环境不敏感，不易因吸收空气中的水分而变浑浊的优 点；不仅可用于液基细胞学、免疫组织化学、生物组织学、常规病理诊断、免疫组织化学的诊 断技术，也适用于特殊染色法和组织化学技术中。
【专利附图】
【附图说明】
[0025] 图1为采用本发明配方1脱蜡透明剂，制作的空腔组织(狗肺部）组织染色样本。
[0026] 图2为采用本发明配方2脱蜡透明剂制作的空腔组织(狗肺部）组织染色样本。
[0027] 图3是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的空腔组织(狗肺部）组织染色样本。
[0028] 图4为采用本发明配方3脱蜡透明剂制作的致密组织(兔子肝脏）组织染色样本。
[0029] 图5为使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的致密组织(兔子肝脏）组织染色样本。
[0030] 图6为采用本发明配方5脱蜡透明剂制作的黏膜组织(兔子胃底）组织染色样本。
[0031] 图7是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的黏膜组织(兔子胃底）组织染色样本。
[0032] 图8为采用本发明配方6脱蜡透明剂制作的腺体组织(兔子唾液腺）组织染色样 本。
[0033] 图9是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的腺体组织(兔子唾液腺）组织染色样 本。
[0034] 图10为采用本发明配方7脱蜡透明剂制作的表皮组织(兔子皮肤)组织染色样本。
[0035] 图11是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的表皮组织(兔子皮肤)组织染色样本。
[0036] 图12为采用本发明配方4脱蜡透明剂制作的皮质骨组织(兔子股骨）组织染色样 本。
[0037] 图13是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的皮质骨组织(兔子股骨）组织染色样 本。
[0038] 图14为采用本发明配方5脱蜡透明剂制作的软骨组织(兔子股骨头的软骨）组织 染色样本。
[0039] 图15是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂制作的软骨组织(兔子股骨头的软骨）组织 染色样本。
[0040] 图16为采用本发明配方1脱蜡透明剂进行免疫组化染色，所制作的空腔组织(狗 肺部）组织染色样本。
[0041] 图17为采用本发明配方2脱蜡透明剂进行免疫组化染色，所制作的空腔组织(狗 肺部）组织染色样本。
[0042] 图18是使用传统二甲苯为脱蜡透明剂进行免疫组化染色，制作的空腔组织(狗肺 部）组织染色样本。
[0043]
【具体实施方式】 下面结合实例对本发明作进一步解释，但本发明不局限于这些实施例。以下实施例仅 为本发明的举例，对本发明而言无任何限定意义。专业人员尽管可对其进行许多改变、组合 或增减，如加入各种辅助成分，但都是归于本发明权利要求所保护的范围内。
[0044] 本发明采用市售脂环烃含有一定量的苯和其他烃类，需按以下方法纯化：加入少 量的发烟硫酸进行振摇，分出酸，再加发烟硫酸振摇。上一步如此反复多次，直至酸的颜色 呈淡黄色。依次再用浓硫酸、水、2%氢氧化钠溶液洗涤，再用水洗涤，用氢氧化钾干燥后蒸 馏，即可。
[0045] 本发明的不含苯的脱蜡透明剂在应用时，与传统使用酒精脱水，二甲苯脱蜡、透明 的程序不相冲突。
[0046] 本发明不含苯的脱蜡透明剂的主要成分是脂环烃。本发明所述的脱蜡透明剂中的 脂环烃，可选用：环戊烷、环已烷、环庚烷、环辛烷、甲基环己烷，二甲基环己烷，二环己烷。
[0047] 本发明所述的脱蜡透明剂中可以加入其它辅助成分，如表面活性剂（阳离子表面 活性剂，阴离子表面活性剂，非离子表面活性剂，双性离子表面活性剂)，植物精油等。
[0048] 为使染色的组织透明后长期保持颜色，在透明剂中可加入适量的抗氧化剂，如丁 基羟基茴香醚（BHA)、二丁基羟基甲苯（BHT)、没食子酸丙酯（PG)、特丁基对苯二酚（TBHQ)、 樟脑醌（CQ)等。
[0049] 实施例1，将配方各成分混合均匀溶解即得（液体按体积比，二丁基羟基甲苯按质 量体积百分比计)。
[0050] 配方举例
【权利要求】
1. 一种不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于脱蜡透明剂主要含有95% - 100%脂环 烃，余量为辅料，所述的脂环烃为单环脂环烃或二环脂环烃。
2. 根据权利要求1所述的不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于所述辅料为表面活性 齐U、植物精油及抗氧化剂中的一种或多种；其中表面活性剂浓度为〇. 〇% - 〇. 1%、植物精油 浓度为〇. 〇% - 5. 0%，抗氧化剂浓度为0. 01% - 0. 05%。
3. 根据权利要求1所述的不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于脱蜡透明剂中可以加 入抗氧化剂，让染色的组织透明后长期保持颜色。
4. 根据权利要求1或2所述的不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于所述脂环烃中的 单环脂环烃或二环脂环烃为环戊烷、环已烷、环庚烷、环辛烷、甲基环己烷，二甲基环己烷， 二环己烷中的一种或者多种。
5. 根据权利要求4所述的不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于所述的单环脂环烃为 环己烷，甲基环己烷；所述的二环脂环烃为二环己烷。
6. 根据权利要求1或2所述的不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于所述表面活性剂 为阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂或者双性离子表面活性剂中 的一种或者多种。
7. 根据权利要求2所述的不含苯的组织脱蜡透明剂，其特征在于所述抗氧化剂为丁基 羟基茴香醚（BHA)、二丁基羟基甲苯（BHT)、没食子酸丙酯（PG)、特丁基对苯二酚（TBHQ)或 者樟脑醌（CQ)中的一种或者多种。
8. -种不含苯的组织脱蜡透明剂的纯化利记博彩app，其特征在于采用市售含有一定量的 苯和/或其他烃类的脂环烃，需按以下方法纯化： (1) 加入少量的发烟硫酸进行振摇，分出酸，再加发烟硫酸振摇； (2) 步骤（1)反复多次，直至酸的颜色呈淡黄色，依次再用浓硫酸、水、2%氢氧化钠溶液 洗涤，再用水洗涤，用氢氧化钾干燥后蒸馏，即可。
9. 使用权利要求1所述的不含苯的组织脱蜡透明剂作为用于组织切片脱蜡的应用。
10. 使用权利要求1所述的不含苯的组织脱蜡透明剂作为用于组织固定后透明或者染 色后封片前透明的应用。
【文档编号】G01N1/28GK104155160SQ201410394768
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月12日 优先权日:2014年8月12日
【发明者】陆可望, 张磊 申请人:陆可望, 张磊