基于蛋白标志物pak4辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了一种基于蛋白标志物PAK4辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒。本发明要求保护用于检测蛋白标志物PAK4的产品在制备用于辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒中的应用。在本发明中，发明人通首次在NSCLC患者外周血中发现了蛋白标志物PAK4的存在，并发现NSCLC患者外周血中蛋白标志物PAK4的浓度高于健康者，即蛋白标志物PAK4具有辅助诊断NSCLC患者的价值。在本发明中，发明人通过免疫组化发现，NSCLC患者的肿瘤组织中，蛋白标志物PAK4的表达量显著高于肿瘤组织旁边的正常组织，且表达强度与预后生存时间有关，可以作为候选的预后因子。本发明对于非小细胞肺癌的辅助诊断和预后具有重大价值。
【专利说明】基于蛋白标志物PAK4辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂 合 品
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基于蛋白标志物PAK4辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 全球肿瘤的发病率仍然在不断的升高，尤其是肺癌，已经成为癌症死亡原因中排 名第一位的肿瘤。在2013年，估计美国将有228190例新发肺癌病例，虽然只占到肿瘤新发 病例的14%，但由其导致死亡的人数却占全部死亡肿瘤患者的27%。从病理上，肺癌可分 为非小细胞肺癌（NSCLC，约占85% )和小细胞肺癌（SCLC，约占15% )。
[0003] 肺癌的主要治疗方式包括手术、放疗和化疗，近年来，虽然肿瘤治疗技术有了很大 的进步，靶向治疗也取得了一定的效果，但肺癌的5年生存率仍在15 %左右徘徊。研究认为 如此差的预后主要还是由于肿瘤发现过晚所致。据报道，新发现的肺癌病例中高达56%伴 有远处转移，仅15%的病变局限于原发灶；而其相应的5年生存率分别为3. 7%、52. 2%，发 现时分期相对较早的病变其预后明显较好。尤其对于I期的非小细胞肺癌，根治性手术切 除后的5年生存率可达58-73%。因此，改善肺癌预后最有效的方式之一就在于进一步提高 肺癌的早期诊断率。
[0004] 目前，肺癌的发现主要依靠胸片或CT检查。美国进行的一项纳入53454例受试者 的大型随机对照肺癌筛查研究显示，低剂量螺旋CT筛查能发现更多的早期肺癌，且与X线 胸片筛查相比，肺癌的死亡率降低了 20%。但这种筛查方式同样存在较多的问题：首先，影 像学的阳性发现中假阳性率高达95%，如何对这些阳性发现做下一步的鉴别仍然是个很大 的难题；此外，低剂量螺旋CT检查存在过度诊断的问题，导致一些不必要的检查甚至有创 治疗；而且反复进行影像学检查存在放射线诱发肿瘤的风险。另一项研究则认为，虽然低剂 量螺旋CT筛查肺癌可减少其死亡率，但费用相对昂贵，不利于推广应用。因此，仍亟需一种 无创手段以辅助肿瘤的筛查和早期诊断。
[0005] 人类血液中包含丰富的各种细胞成分和分子物质，能很好地反映机体不同组织和 器官的生理、病理状态，且其标本容易获得，因此，是一种理想的肿瘤无创诊断手段。因此， 仍有待开发敏感性和特异性良好的标志物。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种基于蛋白标志物PAK4辅助诊断非小细胞肺癌患者的试 剂盒。
[0007] 本发明要求保护用于检测蛋白标志物PAK4的产品在制备用于辅助诊断非小细胞 肺癌患者的试剂盒中的应用。如果待检者血浆中蛋白标志物PAK4的含量为1. 976ng/ml 以上，待检者为候选的非小细胞肺癌患者；如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的含量小于 1. 976ng/ml，待检者为候选的非非小细胞肺癌患者。
[0008] 所述非小细胞肺癌患者可为肺磷癌患者。如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的 含量为1. 885ng/ml以上，待检者为候选的肺磷癌患者；如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4 的含量小于1. 885ng/ml，待检者为候选的非肺磷癌患者。
[0009] 所述非小细胞肺癌患者可为肺腺癌患者。如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的 含量为1.976ng/ml以上，待检者为候选的肺腺癌患者；如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4 的含量小于1. 976ng/ml,待检者为候选的非肺腺癌患者。
[0010] 所述非小细胞肺癌患者可为I期非小细胞肺癌患者。如果待检者血楽中蛋白标志 物PAK4的含量为1. 662ng/ml以上，待检者为候选的I期非小细胞肺癌患者；如果待检者血 楽中蛋白标志物PAK4的含量小于1. 662ng/ml,待检者为候选的非I期非小细胞肺癌患者。 [0011] 本发明还保护一种用于辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒，包括用于检测蛋白 标志物PAK4的产品。所述试剂盒还可具有记载有如下判断标准的载体：如果待检者血浆中 蛋白标志物PAK4的含量为1. 976ng/ml以上，待检者为候选的非小细胞肺癌患者；如果待检 者血楽中蛋白标志物PAK4的含量小于1. 976ng/ml，待检者为候选的非非小细胞肺癌患者。
[0012] 所述非小细胞肺癌患者可为肺磷癌患者。所述试剂盒还可具有记载有如下判断标 准的载体：如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的含量为1. 885ng/ml以上，待检者为候选的 肺磷癌患者；如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的含量小于1. 885ng/ml，待检者为候选的 非肺磷癌患者。
[0013] 所述非小细胞肺癌患者为可肺腺癌患者。所述试剂盒还可具有记载有如下判断标 准的载体：如果待检者血浆中蛋白标志物PAK4的含量为1. 976ng/ml以上，待检者为候选的 肺腺癌患者；如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的含量小于1. 976ng/ml，待检者为候选的 非肺腺癌患者。
[0014] 所述非小细胞肺癌患者可为I期非小细胞肺癌患者。所述试剂盒还可具有记载 有如下判断标准的载体：如果待检者血浆中蛋白标志物PAK4的含量为1. 662ng/ml以上， 待检者为候选的I期非小细胞肺癌患者；如果待检者血楽中蛋白标志物PAK4的含量小于 1. 662ng/ml，待检者为候选的非I期非小细胞肺癌患者。
[0015] 以上任一所述用于检测蛋白标志物PAK4的产品可为用于检测蛋白标志物PAK4的 试剂盒，具体可为"P21蛋白激活激酶4(PAK4)检测试剂盒（酶联免疫吸附试验法）"，购自 "USCN Life Science, Wuhan，China"，货号为 "SEH464HU，，。
[0016] 本发明还保护用于检测蛋白标志物PAK4的产品在制备用于对非小细胞肺癌患者 进行预后判断的试剂盒中的应用。蛋白标志物PAK4在肿瘤组织中表达表达越强该患者的 预后越差。所述用于检测蛋白标志物PAK4的产品可为蛋白标志物PAK4的抗体，具体可为 兔来源的多克隆PAK4抗体，购自abnova公司。
[0017] 蛋白标志物 PAK4 的全称为 p21 活化激酶 4(p21_activated kinase4，serine/ threonine-protein kinase PAK4)，是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶中的一种，1998年首先由 Abo等发现，可以诱导丝状伪足形成及肌动蛋白的聚合，导致细胞骨架重构。蛋白标志物 PAK4的编码基因定位于染色体19ql3. 2-13. 3。在本发明中，发明人通首次在NSCLC患者外 周血中发现了蛋白标志物PAK4的存在，并发现NSCLC患者外周血中蛋白标志物PAK4的浓 度高于健康者，即蛋白标志物PAK4具有辅助诊断NSCLC患者的价值。在本发明中，发明人 通过免疫组化发现，NSCLC患者的肿瘤组织中，蛋白标志物PAK4的表达量显著高于肿瘤组 织旁边的正常组织，且表达强度与预后生存时间有关，可以作为候选的预后因子。本发明对 于非小细胞肺癌的辅助诊断和预后具有重大价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1为实施例1中的R0C曲线。
[0019] 图2为实施例2中的R0C曲线。
[0020] 图3为实施例3中的R0C曲线。
[0021] 图4为实施例4中的R0C曲线。
[0022] 图5为实施例5中到的部分免疫组化照片。
[0023] 图6为154例非小细胞肺癌患者中蛋白标志物PAK4的表达强度与预后的关系。
【具体实施方式】
[0024] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平 均值。
[0025] 标本的收集和保存均按照人类蛋白质组织血楽蛋白质项目（Human Proteome Organization，HUP0)和早期筛查研究网（early detection research network，EDRN)提 供的建议进行。所有参与者均提供了书面的知情同意书。
[0026] 统计学分析由 Graphpad Prism5 软件（San Diego, CA, USA)和 SPSS15. 0 软 件（IBM, Chicago, USA)完成。血浆中蛋白标志物的组间差异采用Mann-Whitney U检 验。肿瘤组织与正常组织的免疫组化染色差异采用Wilcoxon秩和检验。生存分析采用 Kaplan-Meier法，组间生存差异采用Log-rank检验，多因素分析采用Cox比例风险模型，以 P值< 0. 05为差异有统计学意义。
[0027] 实施例1、应用蛋白标志物PAK4辅助诊断非小细胞肺癌患者
[0028] 用于本实施例的患者为153例临床确诊的非小细胞肺癌患者（外周静脉血均在手 术前获得，患者此前并未接受化疗、放疗、介入等治疗）和108例健康人（健康志愿者，取血 前已排除肺癌或其他疾病），均为知情同意的志愿者。
[0029] 血液标本采用EDTA抗凝管采集，采血1小时内3000转/分离心20分钟，得到血 浆，冻存于_80°C。室温溶解后分别蒋策检测血浆中蛋白标志物PAK4的浓度、蛋白标志物 Cyfra21-1的浓度、蛋白标志物SCC的浓度及蛋白标志物CEA的浓度。
[0030] 用于检测蛋白标志物PAK4的试剂盒全称为"p21蛋白激活激酶4(PAK4)检测 试剂盒（酶联免疫吸附试验法）"，购自"USCN Life Science, Wuhan，China"，货号为 "SEH464Hu"。用于检测蛋白标志物Cyfra21-1的试剂盒全称为" Elecsys?> CYFRA21-1) "， 购自"罗氏应用化学公司"，货号为"11820966"。用于检测蛋白标志物SCC的试剂盒全称为 "i2000SR SCC检测试剂"，购自"雅培公司"，货号为"8D18"。用于检测蛋白标志物CEA的试 剂盒全称为" Η1 ocsys? Carcinoembryonic antigen (CEA) "，购自"罗氏应用化学公司"，货 号为 "11731629"。
[0031] 153例非小细胞肺癌患者的血浆中各个蛋白标志物的浓度结果见表1。108例健康 人的血浆中各个蛋白标志物的浓度结果见表2。
[0032] 表1非小细胞肺癌患者血浆中各个蛋白标志物的浓度（+代表诊断阳性，-代表诊 断阴性）
[0033]
【权利要求】
1. 用于检测蛋白标志物PAK4的产品在制备用于辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒 中的应用。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述非小细胞肺癌患者为肺磷癌患者。
3. 如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述非小细胞肺癌患者为肺腺癌患者。
4. 如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述非小细胞肺癌患者为I期非小细胞肺 癌患者。
5. -种用于辅助诊断非小细胞肺癌患者的试剂盒，包括用于检测蛋白标志物PAK4的 产品。
6. 如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述非小细胞肺癌患者为肺磷癌患者。
7. 如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述非小细胞肺癌患者为肺腺癌患者。
8. 如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述非小细胞肺癌患者为I期非小细胞 肺癌患者。
9. 用于检测蛋白标志物PAK4的产品在制备用于对非小细胞肺癌患者进行预后判断的 试剂盒中的应用。
【文档编号】G01N33/574GK104111332SQ201410341619
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2014年7月17日 优先权日:2014年7月17日
【发明者】赫捷, 张百华, 陈照丽, 周成诚 申请人:中国医学科学院肿瘤医院