阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法。特别地，本发明涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂中的杂质检查方法，所述阿奇霉素药用盐例如盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素，所述的杂质例如杂质a以及任选的与其有色谱关联的杂质。本发明还涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂。本发明方法使用GC法进行，包括步骤：(1)测试液的制备；(2)气相色谱条件；(3)气相色谱测定；(4)计算四个步骤。本发明方法可以有益地评价阿奇霉素药用盐或其制剂的品质。
【专利说明】阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物领域，具体涉及阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法。特别地，本发明涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂中的杂质检查方法，所述阿奇霉素药用盐例如盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素，所述的杂质例如3-甲基呋喃以及任选的与其有色谱关联的杂质。本发明还涉及阿奇霉素药用盐或其制剂例如注射用阿奇霉素制剂。
【背景技术】
[0002]阿奇霉素(azithromycin)是15元环大环内酯类抗生素，阿奇霉素比红霉素具有更广泛的抗菌谱，对肺炎链球菌等革兰阳性病原菌及流感嗜血杆菌、β -内酰胺酶产生菌及粘膜炎莫拉菌有很强的抑制作用。阿奇霉素在偏酸性环境中有较高的稳定性，具有吸收好、生物利用度高、半衰期长等优点。
[0003]另外，由于阿奇霉素的溶解度低，为制成可用于注射的阿奇霉素制剂，通常将其形成酸加成盐，例如制成盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素等，再将其制成可注射的制剂例如冷冻干燥粉针剂。
[0004]但是，众所周知的，制剂中存在的杂质通常会影响制剂的品质。因此，提供一种有效监控阿奇霉素制剂例如注射用的阿奇霉素制剂质量的方法，同样是本领域技术人员迫切期待的。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于，提供一种阿奇霉素或其制剂中的杂质检查方法，期待该方法能够有效监控阿奇霉素或其制剂例如注射用的阿奇霉素制剂质量的方法。特别地，本发明目的在于提供可作为原料药的阿奇霉素药用盐或其制剂，以及它们中的杂质的检测方法。
[0006]为此，本发明第一方面提供了一种检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质的方法，该方法使用气相色谱法(即GC)进行检测，并且包括以下步骤:
[0007](I)测试液的制备:
[0008]供试品溶液的制备:取作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂，精密称定，置20mL的顶空瓶中，加水5ml溶解，作为供试品溶液；
[0009]3-甲基呋喃对照品溶液的制备:取3-甲基呋喃对照品30mg，精密称定，置IOOmL的量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取2mL置IOOmL的量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；再精密吸取5mL置20mL的顶空瓶中，作为3-甲基呋喃对照品溶液(相当于该溶液中的3-甲基呋喃浓度为0.03mg/5ml)；
[0010](2)气相色谱条件:[0011]色谱柱:DB-624毛细管柱(其规格可以为30mX0.53mmX3.0 μ m，其例如可以是J&WScientific公司的产品)；
[0012] 程序升温:柱初温40 V，保持5min ;以5 °C /min升温至60 V，保持5min ;以7~9°C /min的速度升温至150°C,保持IOmin ；
[0013]进样口温度为180°C;
[0014]载气为氮气,流量2.0mL/min,不分流模式进样；
[0015]顶空进样:顶空样品平衡温度为40 °C~70°C，顶空样品平衡时间为5min~20min ；
[0016]检测器为FID，温度 250°C，氢气 40mL/min，空气 350mL/min，氮气 25mL/min ；
[0017]进样量:Imin;
[0018](色谱仪器可以是任意型号的气相色谱仪，例如在本发明中可以使用Agilent7890A气相色谱仪，还可以使用Agilent7697A顶空进样系统);
[0019](3)气相色谱测定:
[0020]照2010年版《中华人民共和国药典》二部附录V E所载的气相色谱法，用上述气相色谱条件进行测定；
[0021]取3-甲基呋喃对照品溶液测定，得到色谱图1 ;另外取供试品溶液测定，得到色谱图2 ；
[0022](4)计算:
[0023]读取色谱图1中主峰3-甲基呋喃的保留时间(其在本发明中可标记为tl)和峰面积(其在本发明中可标记为Al)；
[0024]读取色谱图2中各色谱峰的保留时间及峰面积；
[0025]该色谱图2中，与色谱图1中主峰3-甲基呋喃保留时间一致的色谱峰为3-甲基呋喃峰，该色谱峰在图1中记为峰a，其保留时间记为ta(与tl相当)，其峰面积记为Aa ；
[0026]该色谱图2中，在保留时间tb处若存在色谱峰，其记为峰b，该峰b的峰面积记为Ab，其中tb是ta的1.8~2.2倍；
[0027]按外标法以峰面积计算供试品中3-甲基呋喃相对于阿奇霉素药用盐的含量(% );
[0028]计算峰b峰面积与峰a峰面积的比值,即Ab/Aa值。
[0029]在本发明中，上述气相色谱法的一些典型实施方案，特别是其中的个别典型测定条件和测定方法，是特别优选的。例如在本发明【具体实施方式】部分的方法例I中提供的典型测定条件和测定方法，其在本发明中可称为【气相色谱法A】，并且优选作为本发明测定的具体方法。
[0030]根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。
[0031]根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。
[0032]根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂。
[0033]根据本发明第一方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制齐?，其选自:冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。
[0034]根据本发明第一方面的方法，其中所述3-甲基呋喃对照品是使用所述【气相色谱法A】测定，其色谱纯度大于98 %的样品。
[0035]根据本发明第一方面的方法，其中tb是ta的1.85~2.15倍。
[0036]根据本发明第一方面的方法，其中tb是ta的1.9~2.1倍。
[0037]根据本发明第一方面的方法，其中tb是ta的1.95~2.05倍。
[0038]根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为70°C，样品平衡时间为5min，同时以200rpm的转速震荡。
[0039]根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为60°C，样品平衡时间为lOmin，同时以200rpm的转速震荡。
[0040]根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为50°C，样品平衡时间为15min，同时以200rpm的转速震荡。
[0041]根据本发明第一方面的方法，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为40°C，样品平 衡时间为20min，同时以200rpm的转速震荡。
[0042]根据本发明第一方面的方法，其中供试品中的3-甲基呋喃是作为杂质存在的，该3-甲基呋喃在本发明中亦可称为杂质a，而供试品气相色谱图中的峰b亦是供试品中存在的一种杂质，其在本发明中亦可称为杂质b。
[0043]根据本发明第一方面的方法，其中供试品中的3-甲基呋喃是作为杂质存在的，其在供试品中的含量)可以通过本领域技术人员公知的外标法计算得到，即通过色谱图1峰面积Al和3-甲基呋喃对照品溶液中溶质浓度以及色谱图2峰面积Aa三者的关系计算得到。例如供试品取样中包含200mg的阿奇霉素药用盐，如果该取样的供试品中测定得到含有0.03mg杂质3-甲基呋喃，则杂质在供试品中的含量为0.015%。在本发明中作为对照品的3-甲基呋喃可以从市场上容易购得,例如本发明使用的3-甲基呋喃购自Sigma-Aldrich公司，其纯度在99.5%以上。
[0044]根据本发明第一方面的方法，其中供试品中峰b作为一种杂质，即杂质b，其在供试品中的含量，可以通过参考同一供试品中所含的杂质3-甲基呋喃的量计算，即以上文所述Ab/Aa值计算。即，对于一批供试品物料，不论其是作为原料药的阿奇霉素药用盐，还是作为药物制剂的阿奇霉素药用盐制剂，其中杂质3-甲基呋喃(相对于该批物料中阿奇霉素药用盐)的含量)可通过本发明所述【气相色谱法A】测定得到，而在此基础上，可以测定得到Ab/Aa值，并且杂质b的相对含量可以通过Ab/Aa值来表征。
[0045]总体上讲，根据本发明第一方面的方法，可以有效地评价阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质特别是杂质a和杂质b的存在状况。当然，对于品质非常理想的阿奇霉素药用盐或其制剂，其中的杂质a可能不存在或者低于方法的检测限而检测不到，此时可以向该阿奇霉素药用盐或其制剂中定量添加一定量的杂质a，从而仍然可以使用Ab/Aa值来有效地评价杂质b的存在状况。
[0046]因此，根据本发明第一方面的方法，当阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质a低于方法的检测限而检测不到，向该阿奇霉素药用盐或其制剂中定量添加一定量的杂质a对照品，以计算并使用Ab/Aa值来评价杂质b的存在情况。这样，在一个实施方案中，将杂质a对照品添加到阿奇霉素药用盐或其制剂中的方法是，或者制备供试品溶液的方法是:将作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂精密称定，置20mL的顶空瓶中，加5mL的3-甲基呋喃对照品溶液溶解，作为供试品溶液。
[0047]另外，已经发现，适当调节程序升温曲线，将会改变峰a和峰b的保留时间，但是二者的相对保留时间(即，在本发明中为tb/ta，或者称为tb是ta的倍数)基本保持不变。尽管这种现象是药物分析领域技术人员可以预期的，但是已经出人意料地发现:当将供试品溶液重复进样测定(至少10次)时，使用本发明上述程序升温曲线时，其中的峰b峰面积即Ab的相对标准偏差RSD非常小，小于1.3% ;但是，当从60°C升温至150°C的过程中升温速度在7.8?8.2°C /min时RSD仍然可以维持在小于1.5%的范围；但是，当升温速度低于7.50C /min时RSD大于5.5%，并且升温速度越低RSD越大，例如升温速度为6.5°C /min时RSD达9.52%;而升温速度大于8.50C /min时RSD大于6.2%，并且升温速度越高RSD越大，例如升温速度为9.50C /min时RSD达8.23%。另外，如果改变升温程序的其它阶段将更加明显地影响上述Ab的RSD值，例如将60°C平衡时间延长到8分钟或者缩短到3分钟，RSD分别达到7.34%和8.16%。上述Ab的相对标准偏差RSD越小则表明测定方法越稳定、越准确、越可靠，否则方法不准确。这种升温程序的变化会影响色谱峰面积是现有技术未曾有过教导的， 申请人:尝未找到任何理论能够解释此现象。
[0048]因此，在本发明中的一个实施方案中，在气相色谱法的程序升温中，以7.5?
8.50C /min的速度从60°C升温至150°C。在本发明中的一个实施方案中，在气相色谱法的程序升温中，以7.8?8.2V /min的速度从60°C升温至150°C。在本发明中的一个实施方案中，在气相色谱法的程序升温中，以8°C /min的速度从60°C升温至150°C。
[0049]根据本发明第一方面的方法，所述DB-624毛细管柱为中等极性色谱柱。
[0050]进一步地，本发明第三方面提供了阿奇霉素药用盐的原料药，其中含有96.0%以上的阿奇霉素药用盐。
[0051]根据本发明第三方面的原料药，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。
[0052]根据本发明第三方面的原料药，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。
[0053]进一步地，本发明第四方面提供了阿奇霉素药用盐的药物组合物，其中包含本发明第三方面任一实施方案所述的阿奇霉素药用盐的原料药，以及任选的药用辅料。
[0054]根据本发明第四方面的药物组合物，其中阿奇霉素药用盐占组合物总重量的I?100%，余量的是药用辅料。
[0055]根据本发明第四方面的药物组合物，其是供注射用的制剂。
[0056]根据本发明第四方面的药物组合物，其是供注射用的制剂，选自:冷冻干燥粉针齐U、溶液型的注射液。
[0057]根据本发明第四方面的药物组合物，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。
[0058]根据本发明第四方面的药物组合物，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。[0059]进一步地，本发明第五方面提供了制备包含阿奇霉素药用盐的药物组合物的方法，该方法包括将本发明第三方面任一实施方案所述的阿奇霉素药用盐的原料药，以及任选的药用辅料，按常规药物制剂的制备工艺，制成呈药物制剂形式的药物组合物。
[0060]根据本发明第五方面的方法，其中所述的药物组合物是如本发明第四方面任一实施方案所述的药物组合物。
[0061]根据本发明第五方面的方法，其中阿奇霉素药用盐占组合物总重量的I~100%，余量的是药用辅料。
[0062]根据本发明第五方面的方法，其中所述药物组合物是供注射用的制剂。
[0063]根据本发明第五方面的方法，其中所述药物组合物是供注射用的制剂，选自:冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。
[0064]根据本发明第五方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐。 [0065]根据本发明第五方面的方法，其中所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。
[0066]本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
[0067]本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
[0068]下面对本发明的各个方面作进一步描述。
[0069]阿奇霉素(azithiOmycin)是15元环大环内酯类抗生素，其化学结构式如下:
[0070]
【权利要求】
1.检测阿奇霉素药用盐或其制剂中的杂质的方法，该方法使用气相色谱法进行检测，并且包括以下步骤: (1)测试液的制备: 供试品溶液的制备:取作为供试品的阿奇霉素药用盐0.2g或者作为供试品的相当于含阿奇霉素药用盐0.2g的制剂，精密称定，置20mL的顶空瓶中，加水5ml溶解，作为供试品溶液； 3-甲基呋喃对照品溶液的制备:取3-甲基呋喃对照品30mg，精密称定，置IOOmL的量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取2mL置IOOmL的量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；再精密吸取5mL置20mL的顶空瓶中，作为3-甲基呋喃对照品溶液(相当于该溶液中的3-甲基呋喃浓度为0.03mg/5ml)； (2)气相色谱条件: 色谱柱:DB-624毛细管柱(其规格可以为30mX0.53mmX3.0ym,其例如可以是J&WScientific公司的产品)； 程序升温:柱初温40°C，保持5min ;以5°C /min升温至60°C，保持5min ;以7~9°C /min的速度升温至150°C,保持IOmin ； 进样口温度为180°C ； 载气为氮气，流量2.0mL/min,不分流模式进样； 顶空进样:顶空样品平衡温度为40°C~70°C，顶空样品平衡时间为5min~20min ； 检测器为 FID，温度 250°C，氢气 40mL/min，空气 350mL/min，氮气 25mL/min ； 进样量:lmin ； (色谱仪器可以是任意型号的气相色谱仪，例如在本发明中可以使用Agilent7890A气相色谱仪，还可以使用Agilent7697A顶空进样系统)； (3)气相色谱测定: 照2010年版《中华人民共和国药典》二部附录V E所载的气相色谱法，用上述气相色谱条件进行测定； 取3-甲基呋喃对照品溶液测定，得到色谱图1 ;另外取供试品溶液测定，得到色谱图2 ； (4)计算: 读取色谱图1中主峰3-甲基呋喃的保留时间(其在本发明中可标记为tl)和峰面积(其在本发明中可标记为Al)； 读取色谱图2中各色谱峰的保留时间及峰面积； 该色谱图2中，与色谱图1中主峰3-甲基呋喃保留时间一致的色谱峰为3-甲基呋喃峰，该色谱峰在图1中记为峰a，其保留时间记为ta (与tl相当)，其峰面积记为Aa ； 该色谱图2中，在保留时间tb处若存在色谱峰，其记为峰b，该峰b的峰面积记为Ab，其中tb是ta的1.8~2.2倍； 按外标法以峰面积计算供试品中3-甲基呋喃相对于阿奇霉素药用盐的含量)； 计算峰b峰面积与峰a峰面积的比值,即Ab/Aa值。
2.权利要求1的方法，其中所述阿奇霉素药用盐是阿奇霉素的酸加成盐；进一步地，所述阿奇霉素药用盐选自盐酸阿奇霉素、乳糖酸阿奇霉素、马来酸阿奇霉素、硫酸阿奇霉素、富马酸阿奇霉素、门冬氨酸阿奇霉素、苹果酸阿奇霉素。
3.权利要求1至2的方法，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂；进一步地，其中所述阿奇霉素药用盐的制剂是供注射用的制剂，其选自:冷冻干燥粉针剂、溶液型的注射液。
4.权利要求1至3的方法，其中tb是ta的1.85~2.15倍。
5.权利要求1至3的方法，其中tb是ta的1.9~2.1倍。
6.权利要求1至3的方法，其中tb是ta的1.95~2.05倍。
7.权利要求1至6的方法，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为70°C，样品平衡时间为5min，同时以200rpm的转速震荡；或者，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为 60°C，样品平衡时间为lOmin，同时以200rpm的转速震荡；或者，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为50°C，样品平衡时间为15min，同时以200rpm的转速震荡；或者，其中顶空进样的处理方式为:样品平衡温度为40°C，样品平衡时间为20min，同时以200rpm的转速震荡。
8.权利要求1至7的方法，在气相色谱法的程序升温中，以7.5~8.50C /min的速度从60°C升温至150°C。
9.权利要求1至5的方法，在气相色谱法的程序升温中，以7.8~8.20C /min的速度从60°C升温至150°C。
10.权利要求1至5的方法，在气相色谱法的程序升温中，以8°C/min的速度从60°C升温至150°C ;进一步地，所述DB-624毛细管柱为中等极性色谱柱。
【文档编号】G01N30/88GK103983730SQ201410258520
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年6月11日 优先权日:2014年6月11日
【发明者】刘照振, 王俊秋, 李文东, 王成刚, 王志斌 申请人:北京市药品检验所