一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，包括如下步骤：（1）样品的预处理：将样品置于体积比为70:30的乙腈和甲醇的混合溶液中，混匀后超声提取，离心，取上清液氮吹至近干，采用体积比为85:15的15mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的混合溶液溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜，滤液备用；（2）对所述滤液进行高效液相色谱分离，流动相采用梯度洗脱程序进行洗脱，外标法定量；（3）检出的阳性样品采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证，本发明所述方法同时完成呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃西林四种硝基呋喃类抗生素的检测。本发明所述方法准确、可靠且灵敏度高。
【专利说明】一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种抗生素的测定方法，特别是涉及一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法。
【背景技术】
[0002]硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素，因其杀菌能力强、抗菌谱广、不易产生耐药性、价格低廉及疗效好，在临床得到广泛应用。该类抗生素主要用于治疗泌尿系统感染、肠道细菌感染、皮肤创伤感染以及作为食品添加剂预防家禽肠道传染病。常见的硝基呋喃类抗生素主要包括四种:呋喃妥因(Furadantin, NFT)、呋喃唑酮(Furazolidone, FZD)、呋喃它酮(Furaltadone，FTD)及呋喃西林(Furacilin，NFZ)，它们都是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的抗菌药物。据了解，硝基呋喃类药物尽管不会产生急性、亚急性危害，但人体长期大量接触或摄入硝基呋喃类化合物，存在致癌、致畸胎的可能性，而且长期接触该类药物会使使用者产生耐药性，降低此类药物的临床治疗效果，对人体的潜在危害不容忽视。
[0003]硝基呋喃类药物进入人体后迅速被吸收，其主要毒副作用主要表现为:(I)对人体有较强的毒性作用，长时间或大剂量接触硝基呋喃类药物均能对人体产生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大，呋喃唑酮的毒性相对较小；(2)致癌致畸致突变副作用:呋喃它酮为强致癌性药物，呋喃唑酮为中等强度致癌药物；(3)周围神经炎，表现为手足麻木，久之可致肌萎缩，往往迁延难愈；(4)过敏反应(包括气喘、胸闷、皮疹、药物热、嗜酸性粒细胞增多)；(5)胃肠道反应和中毒性精神症状如幻听、幻觉、烦躁等；(6)溶血性贫血、黄疸、肺部并发症等。
[0004]鉴于硝基呋喃类药物有可能作为祛痘化妆品添加剂使用，为了避免含有此类药物的化妆品给消费者带来健康危害，欧盟化妆品法规(EC1223/2009)、我国《化妆品卫生规范》等法律法规中均明确规定硝基呋喃类抗生素在化妆品中为禁用物质。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提供一种准确、可靠且灵敏度高的化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法。
[0006]一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，包括如下步骤:
[0007](I)样品的预处理:将样品置于体积比为70:30的乙腈和甲醇的混合溶液中，混匀后超声提取，离心，取上清液氮吹至近干，采用体积比为85:15的15mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的混合溶液溶解残渣，过0.22 μ m微孔滤膜，滤液备用；
[0008](2)对所述滤液进行高效液相色谱分离，流动相采用梯度洗脱程序进行洗脱，外标法定量，色谱分离条件:色谱柱:Waters XTerra MS C18, 5 μ m, 4.6mmX 250mm ;流动相:乙酸铵和乙腈的混合溶液；柱温:30°C ;进样量:10μ L ;检测器:二极管阵列检测器，检测波长:365nm ；
[0009](3)经过步骤(2)得到的检出阳性样品采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证，所述高效液相色谱-质谱/质谱法确证条件为:
[0010]色谱柱:WatersSunfire C18, 3.5 μ m, 2.1mmX 150mm ;流动相:乙臆和 0.1% 甲酸-水的混合溶液，梯度洗脱；柱温:30°C ;流速:0.2mL/min ;进样量:5μ L ;毛细管电压:
3.2kV ;脱溶剂气温度:400°C ;脱溶剂气流速:800L/h ;锥孔气体流速:50L/h ;离子源温度:1500C ;萃取电压:3.0OV ;射频透镜电压:0.1OV ;碰撞气体:氩气；数据采集模式:多反应监测；
[0011]所述方法同时完成呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃西林四种硝基呋喃类抗生素的检测。
[0012]本发明所述的化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，其中，步骤(2)中所述乙酸铵溶液的浓度为15mmol/L，由1.1g乙酸铵溶于1000mL水中制备而成，所述梯度洗脱程序见表1，其中，A为乙酸铵溶液，B为乙腈；
[0013]表1.高效液相色谱梯度洗脱程序
[0014]
【权利要求】
1. 一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)样品的预处理:将样品置于体积比为70:30的乙腈和甲醇的混合溶液中，混匀后超声提取，离心，取上清液氮吹至近干，采用体积比为85:15的15mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的混合溶液溶解残渣，过0.22 μ m微孔滤膜，滤液备用； (2)对所述滤液进行高效液相色谱分离，流动相采用梯度洗脱程序进行洗脱，外标法定量，色谱分离条件:色谱柱:Waters XTerra MS C18, 5 μ m, 4.6mmX 250mm ;流动相:乙酸铵和乙腈的混合溶液；柱温:30°C ;进样量:10μ L ;检测器:二极管阵列检测器，检测波长:365nm ； (3)经过步骤(2)得到的检出阳性样品采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证，所述高效液相色谱-质谱/质谱法确证条件为: 色谱柱:Waters Sunfire C18, 3.5 μ m, 2.1mmX 150mm ;流动相:乙腈和 0.1% 甲酸-水的混合溶液，梯度洗脱；柱温:30°C ;流速:0.2mL/min ;进样量:5μ L ;毛细管电压:3.2kV ;脱溶剂气温度:400°C ;脱溶剂气流速:800L/h ;锥孔气体流速:50L/h ;离子源温度:150°C ;萃取电压:3.0OV ;射频透镜电压:0.1OV ;碰撞气体:氩气；数据采集模式:多反应监测； 所述方法同时完成呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃西林四种硝基呋喃类抗生素的测定。
2.根据权利要求1所述的化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，其特征在于:步骤(2)中所述乙酸铵溶液的浓度为15mmol/L，由1.1g乙酸铵溶于1000mL水中制备而成，所述梯度洗脱程序见表1，其中，A为乙酸铵溶液，B为乙腈； 表1.高效液相色谱梯度洗脱程序:
3.根据权利要求2所述的化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，其特征在于:步骤(3)中所述梯度洗脱程序见表2，其中，A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液，四种硝基呋喃类抗生素的质谱分析参数见表3; 表2.高效液相色谱-质谱/质谱确证条件中高效液相色谱梯度洗脱程序
4.根据权利要求1所述的化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，其特征在于:步骤(I)具体包括如下步骤:称取0.5g化妆品于25mL比色管中，加入体积比为70:30的乙腈和甲醇的混合溶液，定容至IOmL刻度，涡旋振荡混匀，于超声波水浴中超声提取30min后，5000rpm高速离心10min,取2mL上清液氮吹至近干，加入ImL体积比为85:15的15mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的混合溶液溶解残渣，过0.22 μ m微孔滤膜，滤液供高效液相色谱分析测定及高效液相色谱-质谱/质谱确证。
5.根据权利要求1所述的化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法，其特征在于:取样.0.5g时,呋喃妥因、呋喃唑酮及呋喃西林的检出限为2mg/kg,定量限为5mg/kg,呋喃它酮的检出限为2.5mg/kg,定量限为7.5mg/kg。
【文档编号】G01N30/02GK103926340SQ201410136445
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月4日 优先权日:2014年4月4日
【发明者】马强, 孟宪双, 白桦, 陈云霞, 李晶瑞, 马会娟, 王元成 申请人:中国检验检疫科学研究院