C反应蛋白检测试剂盒的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种C反应蛋白检测试剂盒，其含有包被有本发明C反应蛋白单克隆抗体的多孔板、酶工作液、样本稀释液、酶反应底物、C反应蛋白校准品、和C反应蛋白质控品。通过本发明的试剂盒定量检测存在于血清或血浆中的CRP含量，实现对炎症的早期诊断，检测速度快、灵敏度高、特异性好。
【专利说明】C反应蛋白检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明属于分子免疫学领域，具体涉及一种C反应蛋白检测试剂盒、以及C反应蛋白单克隆抗体及其用途。
【背景技术】
[0002]C反应蛋白(CRP)是1930年由Tillett和Francis发现的肺炎患者血清中一种与肺炎球菌(现称肺炎链球菌)非特异型的菌体多糖成分C多糖(C-polysacch aride,CPS)发生沉淀反应的物质。1941年Macleod和Avery先后证实这是一种急性感染时出现的蛋白质，与C多糖体的絮状沉淀反应依赖于Ca2+的存在。
[0003]CRP是由5个完全相同的非糖基化的亚单位非共价联结，每个亚单位相对分子质量23017，由206个氨基酸残基组成。CRP这种盘状五聚体特征结构使其归于五聚素(pentraxins)家方矣。
[0004]CRP是在组织受损、发炎或感染时，经细胞因子如白细胞介素6 (IL-6)等诱导，主要在肝脏中合成，为急性期时相反应蛋白。CRP在健康人血清中浓度很低，但对炎症反应非常敏感，炎症开始4h?7h其浓度就显著升高，是非特异性的炎症指示剂。CRP水平可以反映机体潜在的炎症活跃程度，广泛应用于临床。
[0005]健康人的CRP值非常低，一般小于0.8mg/L，90%的健康人CRP〈0.3mg/L。而在炎性反应或急性损伤后，CRP的合成则在4?6h内迅速增加，36?50h达高峰，峰值可为正常值的100?1000倍。其半衰期较短(4?6h)，经积极合理治疗后，3?7天迅速降至正常。
【发明内容】
[0006]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞所产生。该杂交瘤细胞于2013年12月31日以CGMCCN0.8702的编号保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
[0007]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了另一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC N0.8703的杂交瘤细胞所产生。该杂交瘤细胞于2013年12月31日以CGMCCN0.8703的编号保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
[0008]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCN0.8702。根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了另一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCCN0.8703。
[0009]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了本发明的C反应蛋白单克隆抗体在制备诊断试剂中的用途。根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了本发明的杂交瘤细胞在制备诊断试剂中的用途。本发明的两种C反应蛋白单克隆抗体可以单独用于制备诊断试剂，然而优选组合用于制备诊断试剂。在一些【具体实施方式】中，所述诊断试剂是C反应蛋白检测试剂。C反应蛋白检测试剂是指用于定量或定性检测人类样本中C反应蛋白的试剂。C反应蛋白检测试剂可检测人类样本中C反应蛋白的存在和/或含量。所述诊断试剂可以是现有技术中任何适当的形式，包括但不限于ELISA检测试剂、免疫比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光检测试剂、放射免疫检测试剂、免疫荧光检测试剂。实际上，本发明的C反应蛋白单克隆抗体或杂交瘤细胞可以用于制备任何基于抗原-抗体相互作用的检测试剂。在一些【具体实施方式】中，所述诊断试剂可以体现为液体形式、干粉、冻干粉形式、颗粒形式、多孔板形式或其它本领域公知的形式。
[0010]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了一种C反应蛋白检测试剂，其包含一种本发明的C反应蛋白单克隆抗体或两种C反应蛋白单克隆抗体的组合。
[0011]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含本发明两种C反应蛋白单克隆抗体的组合。
[0012]根据本发明的一些【具体实施方式】，提供了一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含:包被有本发明一种C反应蛋白单克隆抗体的多孔板、和酶工作液。其中所述酶工作液包含带标记的另一种C反应蛋白单克隆抗体以及酶缓冲液。所述标记选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、放射性标记、免疫荧光标记；酶缓冲液包含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清和Proclin-300。当多孔板上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体由本发明的另一株杂交瘤细胞产生；反之亦然，当多孔板上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8703的杂交瘤细胞所产生时，则酶工作液中的单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞产生。
[0013]在一些【具体实施方式】，本发明的C反应蛋白检测试剂盒还可以根据需要包含样本稀释液、酶反应底物、CRP校准品和质控品。样本稀释液包含盐、表面活性剂、缓冲成分，pH在5-8之间，优选6-7。在一些【具体实施方式】，样本稀释液包含NaCl、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、山羊血清、吐温20、Proclin-300，pH值6.2-6.6。在一些【具体实施方式】，样本稀释液可以配制成浓缩型。所述酶反应底物根据所标记的酶而改变，例如当使用辣根过氧化物酶时，适合的底物包括但不限于邻苯二胺(0PD)、ABTS、四甲基联苯胺(TMB)或4氨基安替比林等。当使用碱性磷酸酶时，适合的底物包括但不限于BCIP/NBT。
[0014]在一些【具体实施方式】，本发明的C反应蛋白检测试剂盒包含:包被有本发明的一种C反应蛋白单克隆抗体的多孔板、酶工作液、样本稀释液、酶反应底物、C反应蛋白校准品和C反应蛋白质控品。其中酶工作液包含辣根过氧化物酶标记的另一种C反应蛋白单克隆抗体。
[0015]在一个【具体实施方式】，本发明的C反应蛋白检测试剂盒包含:
[0016]包被有第一 C反应蛋白单克隆抗体的多孔板，
[0017]酶工作液，
[0018]样本稀释液，
[0019]酶反应底物，
[0020]C反应蛋白校准品、和
[0021]C反应蛋白质控品；
[0022]其中所述酶工作液包含标记有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的第二 C反应蛋白单克隆抗体和酶缓冲液，所述酶缓冲液包含5.8g/L磷酸氢二钠、0.59g/L磷酸二氢钠、
8.0g/L氯化钠、200ml/L小牛血清和适量Proclin-300，Proclin-300为常用生物防腐剂，根据供应商推荐确定其用量，例如0.5%。-2%。范围内；[0023]所述样本稀释液包含180g/L氯化钠、58g/L十二水合磷酸氢二钠、5.94g/L 二水合磷酸二氢钠、250ml/L山羊血清、10ml/L吐温20，适量ProcI in-300，pH值6.2-6.6，Proclin-300为常用生物防腐剂，根据供应商推荐确定其用量，例如0.5%。_2%。范围内；
[0024]所述酶反应底物为辣根过氧化物酶的底物，
[0025]所述C反应蛋白校准品为已知C反应蛋白浓度的血清，浓度分别为2、4、8、16、64ng/ml,
[0026]所述C反应蛋白质控品为浓度在10_60ng/ml之间的血清，
[0027]所述第一 C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞所产生时，第二 C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCCN0.8703的杂交瘤细胞所产生。
【专利附图】
【附图说明】
[0028]图1.本发明所制备的CRP试剂盒中校准品的线性标准曲线。
【具体实施方式】
[0029]为了使本发明易于理解，下面结合具体实施例进一步阐述本发明。以下提供了本发明实施方式中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。
[0030]实施例1:单克隆抗体的获得
[0031]1.动物免疫
[0032]为了产生CRP单克隆抗体，选取6周龄、体重约20g的雌性Balb/c小鼠。初次免疫，取CRP重组抗原(购自Prospec )20-50 μ g加完全福氏佐剂皮下多点注射，第14和28天分别进行第二次和第三次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂腹腔内注射，融合前3天加强免疫，剂量20-50 μ g为宜,3天后,取脾融合。通常,制备鼠科来源的单克隆抗体，可参考《抗体》手册中描述的方法(Harlow 和 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold SpringHarbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY, pp.726, 1988)或 Kohler 和 Milstein 描述的制备杂交瘤的技术(Nature, 256:495-497，1975)。
[0033]2.细胞融合
[0034]制备饲养细胞层:取一只未免疫的Balb/c小鼠，6周，拉颈处死，浸泡在75%酒精内，5min，用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜，用无菌注射器注入6ml预冷的培养液(严禁刺破肠管)，反复冲洗，吸出冲洗液，冲洗液放入IOml离心管，1200rpm/分离6min，用20%胎牛血清(FCS)的培养液混悬，调整细胞数至I X105/ml，加入96孔板，100 μ I/孔，放入37°C C02孵箱培养。
[0035]制备免疫脾细胞:取免疫好的Balb/c小鼠，拉颈处死，无菌取脾脏，用IOml不完全培养液洗一次，脾脏研碎，过200目细胞筛，将脾细胞转移至IOml离心管中，800rpm离心lOmin，细胞用IOml培养液洗2次，细胞计数，取I X IO8脾淋巴细胞悬液备用。
[0036]制备骨髓瘤细胞SP2/0:取对数生长骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗2次，计数，取得5 X IO7细胞备用。
[0037]细胞融合:将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:10的比例混合在一起，在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗I次，离心，1200rpm,8min ;弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇(PEG)浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。
[0038]加入37°C预温的lml45%PEG(分子量4000)溶液，边加边轻微摇动。37°C水浴作用90s。加37°C预温的不完全培养液以终止PEG作用，每隔2min分别加入1ml、2ml、3ml、4ml、5ml和6ml。离心，800rpm，6min。充上清，用含20%小牛血清HAT选择培养液重悬。将上述细胞，加到已有饲养细胞层的96孔板内，每孔加100 μ I。将培养板置37°C、5%C02培养箱中培养。
[0039]3.杂交瘤细胞的筛选
[0040]脾细胞和骨髓瘤细胞融合后5天，形成多种细胞的混合体，补加HAT培养基IOOul，第10天换HT培养基培养。杂交瘤细胞布满孔底1/5面积时，即可采用间接ELISA法检测培养上清，筛选阳性克隆。以CRP重组抗原包被酶标板(5μ g/ml) 100 μ I/孔，4°C过夜，将酶标板孔中的液体倒尽，加入PBST，重复洗涤三次；加入封闭液200 μ I/孔进行封闭，置于37°C，I小时。洗涤封闭液，加入100 μ I细胞培养上清，阳性对照选小鼠的免疫血清，阴性对照选SP2/0培养上清，空白为洗涤液，于37°C静置2h。加入HRP标记羊抗鼠二抗(1:5000)100 μ I/孔，于37°C静置60min。加入PBST，重复洗涤三次；加入底物反应液100 μ I/孔，37°C置暗处反应10分钟。加入H2S04(2mol/L)50y I/孔，终止反应。酶标仪检测450nm吸光度值。结果以CRP重组抗原免疫小鼠，成功得到分泌CRP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0041]4.杂交瘤的克隆化
[0042]筛选得到的阳性克隆，采用有限稀释法对杂交瘤克隆化，克隆前I天制备饲养细胞层，将要克隆的杂交瘤细胞用不完全培养基从培养孔内轻轻吹干，计数。调整细胞为5个细胞/ml。取准备的饲养细胞层的细胞培养板，每孔加入稀释细胞100 μ I。孵育于37°C、5%C02孵箱中。在第7天换液，以后每3天换液I次。9天可见细胞克隆形成，ELISA法检测检测抗体效价。并将最强的两株阳性克隆再次克隆化，直至细胞阳性率达100%，即可定株；定株的细胞扩大培养。
[0043]5.杂交瘤细胞的保藏
[0044]将能够分泌这两种单克隆抗体的CRP杂交瘤细胞株于2013年12月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，保藏编号分别为 CGMCC N0.8702 和 CGMCC N0.8703。
[0045]实施例2.单克隆抗体的制备:
[0046]将已保藏的二株杂交瘤细胞分别I X IO7的细胞浓度注射于BALB/c小鼠腹腔，10天后分别收集腹水。通过以下步骤分别纯化两株单克隆抗体:
[0047]1.收集所得的腹水以2500rpm离心，取上清。加等体积的PBS (pH7.4)与1/2体积的饱和硫酸铵，4°C、静置30min ；
[0048]2.以 3000rpm, 4°C,离心 20min ;
[0049]3.去沉淀，上清加等体积的饱和硫酸铵，静置30min ；
[0050]4.以 3000rpm, 4°C,离心 20min ;
[0051]5.取沉淀,加5ml生理盐水与5ml饱和硫酸铵静置30min ；
[0052]6.以 3000rpm, 4°C,离心 20min ;
[0053]7.沉淀加 5ml 生理盐水与 5ml0.02M 的 PBS (PH7.4)；[0054] 8.加8倍柱体积的PB缓冲液平衡Protein G凝胶柱(购自GE);
[0055]9.将第7步中的混合液加到凝胶柱中；
[0056]10.使用10倍柱体积的PB缓冲液洗脱杂蛋白；
[0057]11.用0.2M pH2.8甘氨酸缓冲液洗脱抗体并收集；
[0058]12.使用再生液清洗柱子；
[0059]13.加平衡液(按GE推荐的)平衡柱子。
[0060]实施例3.检测试剂的制备
[0061]1.制备包被有CRP单抗的多孔板:
[0062]a)包被:采用0.05M、pH值为9.6-9.8的碳酸盐缓冲液与适当浓度的实施例2收集的一株CRP抗体(CGMCC N0.8702)混合制成包被混合液，并将其加载于微孔板上，4°C包被 12h ；
[0063]碳酸盐缓冲液标准配方:
[0064]无水碳酸钠1.600g
[0065]碳酸氢钠2.940g
[0066]纯化水定容至1000ml。
[0067]b)洗板:稀释20倍浓缩洗液(pH值6.2-6.6)至I倍浓度后，洗板2次；
[0068]20倍浓缩洗液标准配方:
[0069]
氣化钠180.000g
-1-+:水合磷酸氢+:钠58.000g
+ —.水合磷酸—:氢钠 5.940g
吐温 2010.000m!
纯化水定样至1000ml 0
[0070]c)封闭:将封闭液(磷酸氢二钠5.Sg、磷酸二氢钠0.59g、氯化钠8.0g、山羊血清IOOmU0.5ml Proclin-300，纯化水定容至1000ml)加载于微孔板上，室温封闭2小时，甩干，干燥过夜。
[0071]2.酶工作液的制备:
[0072]2.1标记步骤:
[0073](1)称取Img辣根过氧化物酶(HRP，购自Sigma)溶解于300 μ I蒸馏水中。
[0074](2)于上液中加入0.6 μ I新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
[0075](3)将上述溶液装入透析袋中，使用ImM ρΗ4.4的醋酸钠缓冲液透析，4°C过夜。
[0076](4)加20 μ IlM ρΗ9.5碳酸盐缓冲液，使HRP的pH升高到9.0~9.5，然后立即加入5mg本发明的另一株抗体(CGMCC N0.8703)(在Iml0.01M碳酸盐缓冲液中)，室温避光轻轻搅拌2小时。
[0077](5)加0.05ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4°C 2小时。
[0078](6)将上述液装入透析袋中，使用0.15M pH7.4PBS透析，4°C过夜。
[0079](7)加入等体积的甘油，_20°C保存，最终辣根过氧化物酶标抗体浓度为lmg/ml。
[0080]2.2酶标记抗体浓度确定:
[0081]采用方针法选择酶标抗体的工作浓度，取2ul酶标抗体(lmg/ml)加入到5ml酶稀释液中，即1:2500的比例。
[0082]2.3酶工作液的配制:
[0083]将2.1步骤中制备的辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，以1:2500的比例将酶标抗体溶于酶缓冲液中。酶缓冲液配方为:5.8g/L磷酸氢二钠、0.59g/L磷酸二氢钠、8.0g/L氯化钠、200ml/L 小牛血清、0.5% _2%。Proclin-300?
[0084]实施例4.本发明CRP的ELISA试剂盒的制备
[0085]I)制备包被有CRP单抗的多孔板:如实施例3所述；
[0086]2)制备酶工作液:如实施例3所述；
[0087]3)样本稀释液(IOX ):1000ml中包括氯化钠180.0OOg,十二水合磷酸氢二钠58.0OOg, 二水合磷酸二氢钠5.940g、250ml山羊血清、吐温-2010.000ml、
0.5%o _2%。Proclin-300, pH 值 6.20-6.60 ；
[0088]4)辣根过氧化物酶底物:底物液A为含有0.6%。过氧化脲的10mmol/L柠檬酸缓冲液，避光储存；底物液B为含有0.4%o TMB的5mmol/L柠檬酸缓冲液，避光储存；
[0089]5) CRP校准品的配制:用阴性对照血清稀释已知CRP浓度的阳性血清，制备成浓度为2、4、8、16、64ng/ml的C反应蛋白校准品； [0090]6)CRP质控品的配制:用阴性对照血清稀释已知CRP浓度的阳性血清，制备成浓度范围50ng/ml的高值CRP质控品和10ng/ml的低值CRP质控品。
[0091]7)在合适的容器中分装上述各组分，并组装为成品试剂盒，还可以并入产品使用说明书、包装、辅助配件(如封板膜、滴管)等，2-8 °C保存备用。
[0092]测试例1.本发明CRP ELISA试剂盒的使用方法
[0093]1.样本准备:
[0094]样本无需特殊处理，采用常规医用技术收集全血样本，离心分离后吸取血清或血浆用于检测。待测血清或血浆如在24小时之内使用，可于2°C~8°C保存，若需长期存放应保存在-20°C以下，并避免反复冻融。请不要使用严重溶血、脂血或黄疸样本。
[0095]2.检测步骤:
[0096]2.1 准备:
[0097]a)试剂盒平衡至室温后方可使用。
[0098]b) CRP包被的多孔板:可直接使用。在多孔板平衡至室温后打开外包装铝箔袋，以防止多孔板的板条吸收空气中水蒸气。请将剩余板条立即放回含干燥剂的铝箔袋或自封袋中密封。
[0099]c)样本稀释液(IOX ):取需要量，用纯化水1:10稀释成为样本稀释液(IX)待用。如果IOX样本稀释液出现结晶，稀释前应至37° C加热、充分溶解混匀。
[0100]d)样本稀释:待测血清或血浆样本用样本稀释液(IX )按1:500的比例稀释，建议取2 μ I待测血清或血浆加入1ml样本稀释液(IX)。
[0101]2.2检测程序
[0102]上样:取足够数量的多孔板板条固定于框架上，分别设置CRP校准品孔、CRP质控品孔和待测样本孔，记录各孔位置；向多孔板的孔中加50 μ I CRP校准品(或质控品、或稀释后的待测样本)和50 μ I CRP酶工作液，37°C温育15min。CRP校准品和CRP质控品无需
稀释，可直接使用。[0103]洗板:每孔加入350 μ I洗液(1XPBST，用户自行配制，其它公知洗液也可用)，静置5-10秒后弃尽，重复冲洗5次后、拍干。
[0104]显色:每孔加入50 μ I底物液A和50 μ I底物液B，充分混匀，37°C温育15min。
[0105]终止:显色完毕后，每孔加入50μ I终止液(用户根据本领域常规终止液配方自行配制，例如硫酸溶液)，充分混匀。
[0106]测定:终止反应后，立即置酶标仪(Bio-Rad iMark) 450nm波长(以空白孔调零)或双波长450nm/630nm下测定OD值。
[0107]计算:根据CRP校准品的浓度及对应的OD值，使用1g(X)-1og(Y)线性拟合方式计算结果，并绘制标准曲线，线性系数0.996 (见图1)。
[0108]样本测量:将样本的OD值代入拟合方程式，结果乘以稀释倍数，即为样本最终浓度。
[0109]测试例2.本发明CRP的ELISA试剂盒的方法学指标
[0110]1.准确性:采用回收法评价准确性，回收率在90%~110%之间；
[0111]2.最低检测限:不高于1.0ng/ml ；
[0112]3.线性:在1.0ng/ml~64ng/ml范围内线性相关系数r≥0.9900。
[0113]4.重复性:批内变异系数不超于5% ；
[0114]5.批间差:批间变异系数不超于10%。
[0115]表1.准确性、最低检出限、系统线性、重复性检测结果
[0116]
【权利要求】
1.一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含: 包被有第一 C反应蛋白单克隆抗体的多孔板， 酶工作液， 样本稀释液， 酶反应底物， C反应蛋白校准品、和 C反应蛋白质控品； 其中 所述酶工作液包含标记有辣根过氧化物酶的第二 C反应蛋白单克隆抗体和酶缓冲液，其中酶缓冲液包含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、小牛血清和Proc I in-300， 所述样本稀释液包含氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、山羊血清、吐温20、Proclin-300,且 pH 值为 6-7， 所述酶反应底物为辣根过氧化物酶的底物， 所述C反应蛋白校准品为已知C反应蛋白浓度的血清，C反应蛋白浓度分别为2、4、8、16、64ng/ml, 所述C反应蛋白质控品为C反应蛋白浓度在10-60ng/ml之间的血清， 当所述第一 C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞所产生时，第二 C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8703的杂交瘤细胞所产生，或者当所述第一 C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8703的杂交瘤细胞所产生时，第二 C反应蛋白单克隆抗体由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞所产生。
2.一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC N0.8702的杂交瘤细胞所产生。
3.一种C反应蛋白单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC N0.8703的杂交瘤细胞所产生。
4.一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC N0.8702。
5.一种杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC N0.8703。
6.根据权利要求2或3所述的C反应蛋白单克隆抗体、或根据权利要求4或5所述的杂交瘤细胞在制备诊断试剂中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，所述诊断试剂是C反应蛋白检测试剂。
8.根据权利要求6所述的用途，所述诊断试剂选自=ELISA检测试剂、免疫比浊检测试剂、磁颗粒检测试剂、化学发光检测试剂、免疫荧光检测试剂和放射免疫检测试剂。
9.一种C反应蛋白检测试剂，其包含: 根据权利要求2所述的C反应蛋白单克隆抗体、以及 根据权利要求3所述的C反应蛋白单克隆抗体。
10.一种C反应蛋白检测试剂盒，其包含: 根据权利要求2所述的C反应蛋白单克隆抗体、以及 根据权利要求3所述的C反应蛋白单克隆抗体。
【文档编号】G01N33/68GK103941017SQ201410100258
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年3月18日 优先权日:2014年3月18日
【发明者】于晖, 李雨心, 王旭, 陈勤慧, 李鑫, 刘海斌 申请人:北京普恩光德生物科技开发有限公司