一种柱后衍生高效液相色谱方法
【专利摘要】本发明涉及一种高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，属于色谱分析【技术领域】；具体是把旧的或废弃的液相色谱泵作为柱后衍生的外接蠕动泵，废弃的气相色谱或恒温箱用作柱后衍生反应箱与液相色谱仪相联接，使衍生剂顺利进入反应体系并确保在适宜的反应温度中反应；使用粉状钢粉或粉状砂心填充的柱子代替柱后衍生管道，缩短柱后衍生管道的长度并增大柱后衍生反应的表面积，使反应更充分；该衍生色谱方法可使实验室在没有柱后衍生系统的情况下顺利开展柱后衍生实验，同时也可提高实验室旧仪器的使用率；而且利用此方法进行柱后衍生实验，其衍生效果更佳，方法简单，高效价廉。
【专利说明】一种柱后衍生高效液相色谱方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种柱后衍生色谱方法，特别涉及一种高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，属于色谱分析【技术领域】。
【背景技术】
[0002]近年来，人们对识别和检测物质成分含量的方法不断改进，液相色谱(LC)常被用来分离和鉴定各类物质，是检测的一种重要手段。但是有些自然界存在的物质如糖类、氨基酸用常规的光学检测手段进行检测时，往往灵敏度较低、选择性不好。为了克服这些方法的缺点并实现高灵敏度检测和痕量分析，需要使用间接的检测方法。在使用高效液相色谱进行分离分析之前，让被检测物质与可以产生荧光的物质进行衍生化反应，进行荧光标记，这种方法比一般的光学检测方法更灵敏、更方便。
[0003]随着色谱技术的不断发展，荧光衍生法已成为一种重要的研究方法。高效液相色谱中的荧光衍生化分为两种衍生模式，一种是在色谱柱分离前处理样品的叫做柱前衍生，而在色谱分离柱后对所测样品进行衍生化处理后再进入检测器的方法叫做柱后衍生法。
[0004]柱后衍生高效液相色谱法是在液相色谱的基础上添加在线的柱后衍生系统，通过柱后衍生使检测的灵敏度得以提高，如中国专利文件CN103421060A公开了一种氨基苷类化合物柱后衍生制备方法及应用，利用氨基苷类化合物与邻苯二甲醛发生反应，形成荧光试剂，具有独特激发波长和发射波长的特性，使灵敏度得到较大提高。然而，柱后衍生高效液相色谱法使用并不普遍，其中一个重要因素是配置较低的液相色谱仪或原先购置的液相色谱仪较少会配备柱后衍生配件，中国专利文件CN102323361A公布了一种液相色谱柱后电化学衍生装置，具有较大的电极面积而具有较高的衍生效果，分析速度快，重现性好。但是现在的柱后衍生配件，费用价格不菲，不少实验室难以承受，从而导致柱后衍生高效液相色谱法推广应用的范围较窄。
[0005]所以寻找一种操作简单、柱后衍生效果高效的柱后衍生高效液相色谱方法，但价格又较低廉、实验室易于承受的方法有着重要的意义。本发明针对现有技术的不足，提供一种高效高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，分析速度快，重现性好，方法简单，成本低廉
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【发明内容】
[0006]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种闻效、价廉的柱后衍生闻效液相色谱方法，该方法容易操作、有效，对正常的柱后衍生反应没有任何影响，还提高反应液的混合度，使其衍生效果更显著。
[0007]为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是:
利用旧的或废弃的液相色谱泵作为柱后衍生的外接蠕动泵，废弃的气相色谱或恒温箱用作柱后衍生反应箱与液相色谱仪相联接，使衍生剂顺利进入反应体系并确保在适宜的反应温度中反应；使用粉状钢粉或粉状砂心填充的柱子代替柱后衍生管道，缩短柱后衍生管道的长度并增大柱后衍生反应的表面积，使反应更充分。
[0008]所述的科研实验室配备有一台正常使用的液相色谱仪和一台废弃的液相色谱仪，一台废弃的气相色谱或恒温箱可供实验使用。
[0009]所述的废弃的液相色谱仪是任意品牌的一种，其蠕动泵正常可用，可将衍生剂泵入反应体系中；废弃的气相色谱或恒温箱温控系统正常，确保实验所需的衍生温度准确；填充粉状钢粉短的不锈钢柱中的钢粉粉粒大小均匀一致。
[0010]所使用的柱后衍生柱填充物为粉状钢粉或粉状砂心，其长度根据各反应物反应特性而定，粉状颗粒粒径大小根据反应物分子量大小而定。
[0011 ] 本发明的有效效果是:
(1)与废弃的液相色谱泵及气相色谱或恒温箱相连接可使衍生剂顺利进入反应体系，并确保在适宜的反应温度中反应；连接的废弃的液相色谱仪的蠕动泵和气相色谱或恒温箱作为衍生系统中的蠕动泵和反应箱可将衍生剂泵入反应体系中并产生温控功能，无需配备额外的外接蠕动泵和温控反应箱，其动力比一般的蠕动泵更强，温控效果与配备的反应箱无差别。
(2)使用粉状钢粉或粉状砂心填充的不锈钢柱代替柱后衍生管道，一方面缩短了柱后衍生管道的长度，使反应局限于较小的面积中进行，减少了由于衍生管道较长而导致受热不均、混合不一等影响，另一方面增大了柱后衍生反应的表面积，较多的小孔使经过的反应液产生涡流，使反应液混合更充分，同时钢粉可耐受更高的温度，加速衍生反应，使其衍生效果更佳。
[0012](3)用已废弃的液相色谱泵、气相色谱仪或恒温箱用作柱后衍生的外接蠕动泵和反应箱与液相色谱仪相联接，制备的柱后衍生高效液相色谱法检测效果好，分析速度快，结果重现性好，而且方法简单，可使实验室在没有柱后衍生系统的情况下顺利开展柱后衍生实验，提闻实验室旧仪器的使用率，成本低廉。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1是本发明示意图；1为高效液相色谱仪、2为分离柱、3为填充粉状钢粉或粉状砂心的不锈钢柱用作柱后衍生柱、4为气相色谱仪或恒温箱、5为废弃的液相色谱仪蠕动泵、6为废弃的液相色谱仪。
【具体实施方式】
[0014]下面结合附图及实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
[0015]实施例1
将高效液相色谱仪与废弃的液相色谱的蠕动泵相连接，并与气相色谱仪相连接，使柱后衍生的硬件条件配备。
[0016]将已填充了 10?50Mffl粉状钢粉(具体颗粒内径根据水同物质进行优化筛选)的不锈钢柱作为柱后衍生柱与高效液相色谱仪的分离柱相连接，并与废弃的液相色谱的蠕动泵相连接，使样品经分离柱初步分离后进入柱后衍生柱，同时衍生剂经废弃的液相色谱的蠕动泵泵入柱后衍生柱，并将不锈钢柱固定于气相色谱仪，确保衍生受热均衡，达到柱后衍生的目的。
[0017]实施例2
将高效液相色谱仪与废弃的液相色谱的蠕动泵相连接，并与恒温箱相连接，使柱后衍生的硬件条件配备。
[0018]将已填充了 10?50Mffl粉状砂心(具体颗粒内径根据水同物质进行优化筛选)的不锈钢柱作为柱后衍生柱与高效液相色谱仪的分离柱相连接，并与废弃的液相色谱的蠕动泵相连接，使样品经分离柱初步分离后进入柱后衍生柱，同时衍生剂经废弃的液相色谱的蠕动泵泵入柱后衍生柱，并将不锈钢柱固定于恒温箱中，确保衍生受热均衡，达到柱后衍生的目的。
【权利要求】
1.一种高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，其特征在于:利用旧的或废弃的液相色谱泵作为柱后衍生的外接蠕动泵，废弃的气相色谱或恒温箱用作柱后衍生反应箱与液相色谱仪相联接，使衍生剂顺利进入反应体系并确保在适宜的反应温度中反应；使用粉状钢粉或粉状砂心填充的柱子代替柱后衍生管道，缩短柱后衍生管道的长度并增大柱后衍生反应的表面积,使反应更充分。
2.根据权利要求1所述的一种高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，其特征在于:所述的科研实验室配备有一台正常使用的液相色谱仪和一台废弃的液相色谱仪，一台废弃的气相色谱或恒温箱可供实验使用。
3.根据权利要求1所述的一种高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，其特征在于:所述的废弃的液相色谱仪是任意品牌的一种，其蠕动泵正常可用，可将衍生剂泵入反应体系中；废弃的气相色谱或恒温箱温控系统正常，确保实验所需的衍生温度准确；填充粉状钢粉短的不锈钢柱中的钢粉粉粒大小均匀一致。
4.根据权利要求1所述的一种高效、价廉的柱后衍生高效液相色谱方法，其特征在于:所使用的柱后衍生柱填充物为粉状钢粉或粉状砂心，其长度根据各反应物反应特性而定，粉状颗粒粒径大小根据反应物分子量大小而定。
【文档编号】G01N30/02GK103808830SQ201410084481
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年3月10日 优先权日:2014年3月10日
【发明者】朱国萍, 廖建萌, 叶宁 申请人:广东海洋大学