一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡的利记博彩app
【专利摘要】本实用新型公开了一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡。本实用新型的技术方案要点为：一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，包括塑料盒体和封装于塑料盒体内的试纸条，所述的试纸条的底层为支撑层，该支撑层上由左到右依次附着有紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述的塑料盒体上开有加样孔和观察窗，该加样孔的位置与试纸条上的样品垫位置相对应，观察窗与试纸条上的硝酸纤维素膜位置相对应。本实用新型操作简单、快速准确、灵敏度高、成本低、稳定性好，可进行批量检测。
【专利说明】一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡
【技术领域】
[0001]本实用新型属于食品安全一兽药残留免疫化学检测【技术领域】，具体涉及一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡。
【背景技术】
[0002]磺胺类药物(Sulfonamides, SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，多为两性化合物，是一类传统的人工合成抗菌药物。磺胺类药物的抑菌机理是由于磺胺类药物能分解出对氨基苯磺酰胺，其分子的形状和大小与组成叶酸中的对氨基苯甲酸类似，化学性质也相似。由于细菌对二者缺乏选择性，大量的对氨基苯磺酰胺替代了对氨基苯甲酸而被细菌吸收，干扰了细菌叶酸的合成而影响其生长繁殖。磺胺类药物抗菌谱较广，对大多数革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌均有抑制效果，具有一定疗效的SAs就有几十种。因具有广谱、稳定、经济、易用以及联合抗菌增效剂效果可提高数十倍的特点，磺胺类药物常用于治疗家畜子宫炎、呼吸道和消化道感染、猪萎缩性鼻炎、禽霍乱、伤寒、副伤寒和球虫感染。当磺胺类药物以亚治疗浓度作为饲料添加剂使用时，可预防疾病的发生，提高饲料转化效率和促进动物生长。
[0003]磺胺类药物在动物体内代谢时间较长，往往造成动物可食性组织中磺胺类药物残留超标。而长期食用含有磺胺类药物残留的食品，会引起磺胺类药物的逐渐蓄积，危害人体健康，主要表现为变态反应、过敏反应、泌尿系统障碍、致畸作用、致突变作用、致癌作用以及激素样作用。而且磺胺类药物在食品、饲料中的残留极易引发细菌耐药性和环境污染。动物排泄物中的抗菌药物和耐药菌株被释入环境后，将污染水源和土壤，在污泥中细菌可长期保持耐药性。同时，磺胺类药物残留也是目前动物性食品贸易的主要技术问题，严重影响了畜牧业的正常发展。为了保障动物用药的安全性和有效性，许多国家规定了磺胺类药物的最高残留限量(maximum residue limits, MRL),加拿大、欧盟、美国规定动物组织中磺胺类药物总量的最大残留量是100 yg/kg，日本为20 μ g/kg，并且有逐步严格控制的发展趋势。2002年12月我国农业部公告第235号文件规定，食用动物产品中磺胺类药物最高残留限量为100 μ g/kg，并将其列为兽药残留监控的重点。
[0004]磺胺类药物残留检测方法主要有微生物学法、理化分析法和免疫法等。微生物学法简便、费用低，但操作费时且敏感性、特异性都较差，在定性定量上均存在困难，不能满足现代残留检测的需要；理化法常作为确证方法用于测定动物组织中的药物残留，如气相色谱(GC)、高效液性色谱(HPLC)、气质联用(GC-MS)和液质联用(HPLC-MS)等，这些方法灵敏准确、特异性强，分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器设备、样品前处理复杂、繁琐费时、检测成本高，不能现场操作，而且需要专业技术人员。与之相比，免疫学分析技术具有灵敏、快速、特异、简便等优点，是近年来逐渐发展起来的一种重要的痕量检测技术，在兽药残留分析领域应用越来越多，具有广阔的推广应用前景。
[0005]胶体金标记免疫分析法是近年来迅速发展的一种新型分析技术，其特点是简便快速、成本低、无污染、无需培训，非常适合于现场检测。与ELISA相比，具有样品前处理简单，显色时间短(3-5 min)，且所有试剂包含在一根试纸条上，无需使用仪器等优点，具有广阔的市场前景和应用价值。因此，研制快速、灵敏、高效的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡对于保障动物性食品安全具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0006]本实用新型解决的技术问题是提供了一种操作简单、快速准确、灵敏度高、成本低、稳定性好，可进行批量生产的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡。
[0007]本实用新型的技术方案是:一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡包括塑料盒体和封装于塑料盒体内的试纸条，所述的试纸条的底层为支撑层，该支撑层上由左到右依次附着有紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述的塑料盒体上开有加样孔和观察窗，该加样孔的位置与试纸条上的样品垫位置相对应，观察窗与试纸条上的硝酸纤维素膜位置相对应，所述的硝酸纤维素膜上有对氨基苯磺酰胺一载体蛋白偶联物溶液印制的检测线(T线)和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线(C线)，两者间距5 mm，其中对氨基苯磺酰胺一载体蛋白偶联物溶液印制的检测线(T线)位于靠近样品垫的一侧，所述的结合垫上灌注有胶体金标记的抗磺胺类药物单克隆抗体。
[0008]本实用新型所述的支撑层是由聚氯乙烯树脂与稳定剂及辅料配合制成的PVC板。本实用新型所述的吸收垫是由吸水能力极强的植物长纤维为原材料制成的纯白滤纸。本实用新型所述的样品垫和金标抗体结合垫是由玻璃纤维棉制作而成的。本实用新型所述的样品垫和金标抗体结合垫的叠压宽度为2 mm,吸收垫与硝酸纤维素膜的叠压宽度为2 _。本实用新型所述的样品垫、金标抗体结合垫和吸收垫上方覆盖有胶膜保护层。本实用新型所述的硝酸纤维素膜两端分界处有标记线。
[0009]本实用新型具有以下优点:(1)灵敏度高、特异性强。检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子通过异性电荷间范德华力相结合，胶体金对单克隆抗体的特异性和亲和力影响很小。因此，快速检测试纸卡具有较高的灵敏度和特异性，其检测灵敏度可达8 μ g/kg ；
[0010](2)操作简单、方便快捷。使用快速检测试纸卡时无需其它任何试剂，只要将处理后的样品溶液用滴管滴入试纸卡加样孔内3?4滴，3飞min即可观察结果；
[0011](3)检测结果形象、直观。试纸卡以红色印迹线“ I ”或“ Il ”作为检测线的阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上质控线(C线)显示一条红色“ I ”印迹时，表示被检测样品溶液中磺胺类药物残留含量> 8 μ g/kg ;若硝酸纤维素膜上质控线(C线)和检测线(T线)同时出现两条红色“ Il ”印迹时，表示样品溶液中磺胺类药物残留含量<8 μ g/kg。结果形象直观，简单准确，不容易出现误判；
[0012](4)胶膜的使用可以延长检测结果观察时间，试纸卡稳定性好。本试纸卡样品吸收垫将检测溶液完全吸收，使之与偶联垫上金标抗体充分反应，可以有效减少误差率；还可以防止外界杂质干扰，影响金标抗体与检测抗原的结合；
[0013](5)成本低、投资少。使用本实用新型试纸卡，不需要另配复杂的仪器设备和昂贵的试剂，现场检测一步到位，成本低廉，见效快；
[0014](6)易于大范围推广应用。本试纸卡操作简单，适合不同类别的人员使用，如实验室检测、海关检疫、卫生监督、规模养殖及个体生产等，具有广阔的市场前景和较大的经济效益和社会效益。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1是本实用新型的结构示意图；图2是本实用新型中试纸条的侧视图；图3是本实用新型中试纸条的俯视图。
【具体实施方式】
[0016]结合附图详细描述实施例。一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，包括塑料盒体I和封装于塑料盒体I内的试纸条2，所述的试纸条2的底层为支撑层3，该支撑层3上由左到右依次附着有紧密相连的样品垫4、金标抗体结合垫5、硝酸纤维素膜6和吸收垫7，所述的塑料盒体I上开有加样孔8和观察窗9，该加样孔8的位置与试纸条2上的样品垫4位置相对应，观察窗9与试纸条2上的硝酸纤维素膜6位置相对应，所述的硝酸纤维素膜6上有对氨基苯磺酰胺一载体蛋白偶联物溶液印制的检测线(T线)11和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线(C线)10，两者间距5 mm，其中对氨基苯磺酰胺一载体蛋白偶联物溶液印制的检测线(T线)11位于靠近样品垫4的一侧，所述的结合垫5上灌注有胶体金标记的抗磺胺类药物单克隆抗体。
[0017]本实用新型所述的支撑层3是由聚氯乙烯树脂与稳定剂及辅料配合制成的PVC板。本实用新型所述的吸收垫7是由吸水能力极强的植物长纤维为原材料制成的纯白滤纸。本实用新型所述的样品垫4和金标抗体结合垫5是由玻璃纤维棉制作而成的。本实用新型所述的样品垫4和金标抗体结合垫5的叠压宽度为2 mm,吸收垫7与硝酸纤维素膜6的叠压宽度为2 _。本实用新型所述的样品垫4、金标抗体结合垫5和吸收垫7上方覆盖有胶膜保护层12。本实用新型所述的硝酸纤维素膜6两端分界处有标记线13。
[0018]本实用新型所述的试纸卡的检测原理:
[0019]试纸卡根据抗原抗体竞争性免疫层析原理设计。滴加样品液后，在吸收垫和硝酸纤维素膜的毛细作用下，样品溶液向上迁移，到达结合垫时，金标抗体将被溶解。当样品中含有磺胺类药物时，它们将和金标抗体结合，并一起向上迁移，到达固定有对氨基苯磺酰胺-OVA的检测线位置时，检测抗原将和SAs竞争结合金标抗体上有限的抗原结合位点。样品中SAs含量越高，检测抗原和金标抗体结合数量就越少，T线显色就越弱；当样品中SAs高于一定数值(8 μ g/kg)时，检测抗原就无法和金标抗体结合，T线不显色。无论样品中是否有SAs存在，过量的金标抗体或检测抗原与金标抗体的结合物都将和二抗GaMIgG结合，在C线形成红色。
[0020]本实用新型所述的试纸卡的使用方法:
[0021]I)样品前处理:
[0022]将动物组织或其它样品切碎、研磨后称取3±0.05 g样本于50 ml离心管中，再加Λ 9 ml乙酸乙酯；剧烈震荡5 min后,室温下4000 r/min离心5 min ;移取6 ml上清液,于60 °C下氮气吹干；加入I ml正已烧,震荡I min,再加入0.5 ml复溶液,振荡10 s ;吸取至少100 ml下层溶液待检。
[0023]2)样品滴加:[0024]将试纸卡平放后，用滴管将样品溶液滴入试纸卡加样孔内3?4滴，3飞min后即可观察结果。
[0025]3)检测结果分析:
[0026]阴性:若硝酸纤维素膜上质控线(C线)和检测线(T线)同时出现两条红色“ Il ”印迹时，表示样品溶液中磺胺类药物残留含量< 8 μ g/kg，判为阴性。
[0027]阳性:若硝酸纤维素膜上质控线(C线)显示一条红色“ I ”印迹，而检测线(T线)不显色，表示被检测样品溶液中磺胺类药物残留含量> 8 μ g/kg，判为阳性。
[0028]无效:若硝酸纤维素膜上质控线(C线)不显示红色条带，则无论检测线(T线)是否出现红色印迹，该试纸卡均判为无效。
【权利要求】
1.一种检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡包括塑料盒体和封装于塑料盒体内的试纸条，所述的试纸条的底层为支撑层，该支撑层上由左到右依次附着有紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述的塑料盒体上开有加样孔和观察窗，该加样孔的位置与试纸条上的样品垫位置相对应，观察窗与试纸条上的硝酸纤维素膜位置相对应，所述的硝酸纤维素膜上有对氨基苯磺酰胺一载体蛋白偶联物溶液印制的检测线和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线，两者间距5 _，其中对氨基苯磺酰胺一载体蛋白偶联物溶液印制的检测线位于靠近样品垫的一侧，所述的结合垫上灌注有胶体金标记的抗磺胺类药物单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的支撑层是PVC板。
3.根据权利要求1所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的吸收垫是由植物长纤维为原材料制成的纯白滤纸。
4.根据权利要求1所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的样品垫和金标抗体结合垫是由玻璃纤维棉制作而成的。
5.根据权利要求1所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的样品垫和金标抗体结合垫的叠压宽度为2 mm,吸收垫与硝酸纤维素膜的叠压宽度为2mmD
6.根据权利要求1所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的样品垫、金标抗体结合垫和吸收垫上方覆盖有胶膜保护层。
7.根据权利要求1所述的检测磺胺类药物残留的免疫层析试纸卡，其特征在于:所述的硝酸纤维素膜两端分界处有标记线。
【文档编号】G01N33/577GK203385731SQ201320434944
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年7月19日 优先权日:2013年7月19日
【发明者】常新耀, 李桂平, 王方明, 王洪润, 杨志, 张绍铃, 原小燕, 葛会会 申请人:河南知微生物工程有限公司, 河南科技学院