一种利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用液相法测定多糖铁溶出度的方法：取待检测样品，用水稀释，溶解时间t，过滤，向滤液中加入稀硫酸，加热至颜色变浅，取出，降温至室温，然后加入等反应量或过量的乙二胺四乙酸二钠溶液，反应完成后，用液相法测定，记录色谱图，根据峰面积计算待检测样品中多糖铁的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t的溶出度。本发明的利用液相法测定多糖铁溶出度的方法，通过实际应用，该方法分离效果好，测定准确，灵敏高，专属性强、分析简便快速，可用于多糖铁溶出溶液的定量，判定实际溶出情况，从而对单批次药物、不同批次药物的吸收及药效的发挥做出评价。
【专利说明】—种利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法。
【背景技术】
[0002]多糖铁复合物是一种低分子多糖和铁的有机复合物，是用于治疗单纯性缺铁性贫血的药物。目前，对判断化学药物疗效一致的方法除了生物等效性实验外，溶出一致性是最科学合理有效的评价手段。目前，尚未有关于测定多糖铁复合物溶出度的方法，原研药物国内注册标准无溶出质量标准。因此，研发一种测定多糖铁复合物溶出度的方法，并制定相关质量标准，是非常必要的。铁的定量以滴定、原子吸收等最为常见，但滴定方法要求待测溶液浓度非常高，不可能用于溶出度的测定；而原子吸收仪器昂贵，目前使用率较低。
【发明内容】
[0003]本发明目的在于弥补技术空白，提供了一种利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，该方法分离效果好，测定准确，灵敏度高，专属性强、分析简便快速，可用于多糖铁复合物溶出溶液的定量，判定实际溶出情况，从而对单批次药物、不同批次药物的吸收及药效的发挥做出评价。
[0004]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0005]一种利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，如下:取待检测样品，用水稀释，溶解时间t，过滤，向滤液中加入稀硫酸，置70?100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，然后加入等反应量或过量的乙二胺四乙酸二钠溶液，反应完成后，用液相法测定，记录色谱图，根据峰面积计算待检测样品中多糖铁复合物的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t的溶出度。
[0006]所述“用液相法测定，记录色谱图，根据峰面积计算待检测样品中多糖铁复合物的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t的溶出度”的具体方式为以下两种方式之
[0007]( I)以乙二胺四乙酸铁钠作为对照品，进行梯度稀释，然后做同待检测样品同样的处理，用液相法测定，记录色谱图，制作乙二胺四乙酸铁钠浓度-峰面积的标准曲线，并计算得到线性回归方程，然后将待检测样品的峰面积查标准曲线，从而得到待检测样品中铁的浓度或/和含量，或将待检测样品的峰面积套入线性回归方程，通过常规方法计算得到待检测样品中铁的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t时的溶出度。
[0008](2)以乙二胺四乙酸铁钠作为对照品，对对照品做同待检测样品同样的处理，用液相法测定，记录色谱图，测定峰面积，通过常规方法计算得到待检测样品中铁的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t时的溶出度。
[0009]进一步地，本发明是通过以下技术方案实现的:
[0010]取待检测样品，以水500?IOOOml为溶剂，转速为每分钟50?100转，30?60分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸(质量百分数)0.1ml,置70?100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液(质量百分数)0.3?1ml，摇匀，放置3?15min，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10 μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
[0011]本发明的优选技术方案的为:
[0012]取待检测样品，以水900ml为溶剂，转速为每分钟100转，45分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置90°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液0.5ml，摇匀，放置lOmin，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10 μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
[0013]本发明的优选技术方案还可以为:
[0014]取待检测样品，以水IOOOml为溶剂，转速为每分钟100转，30分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液1ml，摇匀，放置5min，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10 μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
[0015]本发明的优选技术方案还可以为:
[0016]取待检测样品，以水500ml为溶剂，转速为每分钟75转，60分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液0.5ml，摇匀，放置5min，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置IOOml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10 μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
[0017]以上技术方案中，所述液相法测定的色谱条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.15%四丁基氢氧化铵溶液(质量百分数)_甲醇为流动相，二者体积比为70?90:30?10 ;检测波长为256nm。
[0018]优选的，所述液相法测定的色谱条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以
0.15%四丁基氢氧化铵溶液-甲醇为流动相，二者体积比为87:13 ;检测波长为256nm。
[0019]其中，所述0.15%四丁基氢氧化铵溶液的pH值为3?4 (用甲酸调)。
[0020]优选为:所述的0.15%四丁基氢氧化铵溶液的pH值为3.6 (用甲酸调)。
[0021]本发明所检测的目标样品——多糖铁复合物是一种低分子多糖和铁的有机复合物，目前，国内有生产企业生产制剂和原料药，也有从国外进口的制剂。本发明的检测方法适用于所有的多糖铁复合物原料药和制剂。
[0022]本发明的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，通过实际应用，该方法分离效果好，测定准确，灵敏高，专属性强、分析简便快速，可用于多糖铁复合物溶出溶液的定量，判定实际溶出情况，从而对单批次药物、不同批次药物的吸收及药效的发挥做出评价，具有以下特点:
[0023]1.本发明创立了多糖铁复合物的溶出度方法，填补了技术空白。
[0024]2.该方法能客观反映多糖铁复合物的溶出行为，可以简便、快速、准确地测定多糖铁复合物的溶出度及溶出曲线，从而更加科学合理的控制产品质量，保障科学用药。
[0025]3.本发明的检测方法专属性强，线性关系好，准确度，精密度，范围等均符合要求。
[0026]4.本发明采用液相方法，简便、快速、准确。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1:对照品溶液峰面积与浓度线性关系图。
[0028]图2:多糖铁复合物胶囊溶出曲线图。
【具体实施方式】
[0029]下面结合实验例及 实施例对本发明作进一步的说明。
[0030]实验例I测定波长的选择
[0031]1.仪器与试剂
[0032](I)仪器:PHARMTEST610半自动溶出仪，ANGILENT1260液相色谱仪，SHIMADZUUV-2550紫外-可见分光光度计，METTLERT0LED0XS205电子天平。
[0033](2)试剂:甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。
[0034]按质量标准制备供试品溶液、对照品溶液和空白对照溶液(空白对照溶液为精密量取水Iml按供试品溶液制备方法制备)。取上述三种溶液照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录IV A)，分别在200~400nm波长处进行吸收曲线测定，结果见表1。供试品溶液、对照品溶液在256nm波长处有最大吸收，而空白对照溶液在256nm处没有吸收。故选择256nm作为测定波长。
[0035]表1紫外吸收测定数据
【权利要求】
1.一种利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:取待检测样品，用水稀释，溶解时间t，过滤，向滤液中加入稀硫酸，加热至颜色变浅，取出，降温至室温，然后加入等反应量或过量的乙二胺四乙酸二钠溶液，反应完成后，用液相法测定，记录色谱图，根据峰面积计算待检测样品中多糖铁复合物的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t的溶出度。
2.根据权利要求1所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:所述“用液相法测定，记录色谱图，根据峰面积计算待检测样品中多糖铁复合物的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t的溶出度”的具体方式为以下两种方式之一: (1)以乙二胺四乙酸铁钠作为对照品，进行梯度稀释，然后做同待检测样品同样的处理，用液相法测定，记录色谱图，制作乙二胺四乙酸铁钠浓度-峰面积的标准曲线，并计算得到线性回归方程，然后将待检测样品的峰面积查标准曲线，从而得到待检测样品中铁的浓度或/和含量，或将待检测样品的峰面积套入线性回归方程，通过常规方法计算得到待检测样品中铁的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t时的溶出度； (2)以乙二胺四乙酸铁钠作为对照品，对对照品做同待检测样品同样的处理，用液相法测定，记录色谱图，测定峰面积，通过常规方法计算得到待检测样品中铁的浓度或/和含量，进而得到待检测样品在时间t时的溶出度。
3.根据权利要求1或2所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:取待检测样品，以水500~1000ml为溶剂，转速为每分钟50~100转，30~60分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置70~100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液0.3~1ml，摇匀，放置3~15min，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置100ml量瓶中，`用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10 μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
4.根据权利要求3所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:取待检测样品，以水900ml为溶剂，转速为每分钟100转，45分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置90°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液0.5ml，摇匀，放置lOmin，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置100ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液IOy 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
5.根据权利要求3所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:取待检测样品，以水1000ml为溶剂，转速为每分钟100转，30分钟后，取溶液，滤过，取续滤液1ml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液1ml，摇匀，放置5min，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置100ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液IOy 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
6.根据权利要求3所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:取待检测样品，以水500ml为溶剂，转速为每分钟75转，60分钟后，取溶液，滤过，取续滤液lml，置IOml量瓶中，加入10%稀硫酸0.1ml，置100°C水浴中加热至颜色变浅，取出，降温至室温，加入0.4%乙二胺四乙酸二钠溶液0.5ml，摇匀，放置5min，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取相当于铁的质量为15mg的乙二胺四乙酸铁钠，置100ml量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液IOy 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品溶液10μ 1，同法测定，按外标法以峰面积计算出每粒的溶出量。
7.根据权利要求1~2，4~6任一所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:所述液相法测定的色谱条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.15%四丁基氢氧化铵溶液-甲醇为流动相，二者体积比为70~90:30~10 ;检测波长为256nm。
8.根据权利要求7所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:所述液相法测定的色谱条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.15%四丁基氢氧化铵溶液-甲醇为流动相，二者体积比为87:13 ;检测波长为256nm。
9.如权利要求7所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:所述0.15%四丁基氢氧化铵溶液的pH值为3~4。
10.如权利要求8所述的利用液相法测定多糖铁复合物溶出度的方法，其特征在于:所述0.15%四丁基氢氧化铵溶液的pH值为3.6。
【文档编号】G01N30/02GK103728386SQ201310737061
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月27日 优先权日:2013年12月27日
【发明者】田红伟, 姜作玲, 展筱林, 程宏霞, 王冬, 王海清 申请人:青岛国风药业股份有限公司