双活止痛酊的质量检测方法
【专利摘要】本发明公开了双活止痛酊的质量检测方法，采用的是高效液相色谱法测定独活所含成分蛇床子素的含量，此方法简单易行，具有良好的精密度、稳定性、准确性及重现性，能够有效地控制双活止痛酊的产品质量。
【专利说明】双活止痛酊的质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物的质量检测【技术领域】，具体涉及双活止痛酊中蛇床子素的质量检测方法。
【背景技术】
[0002]之前，我公司已获得“一种药物组合物及其制备方法”的发明专利授权，专利号为“ZL 2009 I 0113826.8”，该药物组合物由羌活、独活、威灵仙、桂枝、木瓜、伸筋草、秦艽、两面针、三七、红花、川芎、当归、鸡血藤等药味经提取精制而成，具有散寒除湿，活血止痛的作用，临床用于寒湿阻络所引起的肩痛症的辅助治疗。双活止痛酊为该组合物的酊剂剂型，其制法是:取方中各药味，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2010年版一部附录I 0)，用60%乙醇作溶剂，浸溃24小时后，渗漉，收集渗漉液至药材总量的5倍量，搅匀，滤过，灌装，即得。为确保该产品的质量，我们选取方中君药独活所含蛇床子素为检测指标对其质量进行控制。
[0003]蛇床子素为独活的主要有效成分之一，中国药典2010年版采用高效液相色谱法对独活中的蛇床子素进行测定，色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(49:51)为流动相；检测波长为330nm。孟繁浩等(HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素和欧前胡素含量.沈阳药科大学学报，2004，21，(3):201-203)采用高效液相色谱法同时测定蛇床子中蛇床子素和欧前胡素含量，色谱条件为:色谱柱为Kromasil C8 (250mmX4.6mm, 5 μ m);流动为甲醇-水(65:35)，流速0.8ml/min ;检测波长310nm。李遇伯等(RP-HPLC法测定骨疏丹中淫羊藿苷和蛇床子素的含量.沈阳药科大学学报，2005，22 (4) =279-285)采用反向高效液相色谱法测定骨疏丹中淫羊藿苷和蛇床子素的含量，色谱条件为:色谱柱为 Hypersil ODS2 (250mmX4.6 mm，5 μ m);流动为甲醇-0.4% 醋酸水溶液(65:35),流速1.0ml/min，检测波长为322nm。在方法学研究过程中，本发明曾试用上述试验条件，但由于双活止痛酊除了独活药材外，还含有羌活、独活、威灵仙、桂枝、木瓜、伸筋草、秦艽、两面针、三七、红花、川芎、当归、鸡血藤等药材，分离效果不好或阴性有干扰，均未能建立该产品的质量检测方法来控制产品中蛇床子素的含量。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是为双活止痛酊提供一种分离度好、简单易行，成本低廉的质量检测方法，进而更好的确保产品的质量和功效，同时有利于工业化生产的应用。
[0005]本发明以如下方案解决上述技术问题:
双活止痛酊的质量检测方法，包括以下步骤:
采用用高效液相色谱法测定双活止痛酊中蛇床子素的含量；
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为40?70:60?30的甲醇-0.4%冰醋酸溶液；检测波长为322nm ；
对照品溶液的制备:精密称取蛇床子素对照品，加甲醇制成浓度为10?60μ g/ml的溶液，即得；
供试品溶液的制备:精密量取供试品，加流动相稀释2?10倍，滤过，取续滤液，即得；测定:在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液5?20μ1 ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
[0006]以上所述双活止痛酊的质量检测方法，所述流动相优选为45?60:55?40的甲醇-0.4%冰醋酸溶液，最佳优选流动相为58:42的甲醇-0.4%冰醋酸溶液。
[0007]以上所述双活止痛酊的质量检测方法，所述供试品溶液的制备方法优选为:精密量取供试品，加流动相稀释5倍，滤过，取续滤液，即得。
[0008]以上所述双活止痛酊的质量检测方法，所述对照品溶液的制备方法优选为:取蛇床子素对照品，精密称定，加甲醇制成每Iml含30μ g的溶液。
[0009]以上所述双活止痛酊的质量检测方法，所述对照品溶液和供试品溶液的进样量优选为20μ1。
[0010]本发明双活止痛酊的质量检测方法，通过大量试验研究对比，是一种分离度好、成本低、可操作性强的质量检测方法，可更有效地保证产品的质量，同时更有利于工业化生产的应用。
[0011]通过阅读下面的描述和所附的权利要求书，可更好地理解本发明的这些和其他的特征、方面和优点。
【具体实施方式】
[0012]虽然本说明书通过特别指出并清楚要求保护本发明的权利要求书作出结论，但应该相信下列说明将更好地理解本发明。
[0013]本文所述的“双活止痛酊”是指，之前，我公司向国家知识产权局申请并获得授权的专利号为“ZL 2009 I 0113826.8”，名称为“一种组合物及其制备方法”发明专利，该药物组合物由如下原料药制成:羌活35-50重量份、独活25-40重量份、伸筋草35-60重量份、两面针15-40重量份、威灵仙15-40重量份、秦究5-30重量份、桂枝5_30重量份、木瓜5-30重量份、鸡血藤30-70重量份、三七20-50重量份、当归20-50重量份、红花5_30重量份、川芎5-30重量份。双活止痛酊为该药物组合物的酊剂剂型，其制法是:取方中各药味，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2010年版一部附录I 0)，用60%乙醇作溶剂，浸溃24小时后，渗漉，收集渗漉液至药材总量的5倍量，搅匀，滤过，灌装，即得。
[0014]除非另外指明，下文中所用的所有百分比和比率均按《中国药典》2010版一部执行。除非另外指明，本文中所涉及成分的所有百分比、比率和含量均基于该成分的实际含量，而不包括在市售产品中可以与这些成分结合在一起的溶剂、填料或其它物质。
[0015]方法学研究
仪器:Waters2695型高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器，Empower色谱工作站；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6X 150mm)，YWG C1810X4.6mm保护柱；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。
[0016]试药:蛇床子素化学对照品(含量测定用，批号:110822-200305，中国药品生物制品检定所提供)，纯度经检查符合含量测定用化学对照品的技术要求，含量为99.9% ；甲醇(色谱纯)，水(自制双蒸水)，冰醋酸(分析纯)。
[0017]样品:双活止痛酊及缺独活的阴性对照样品。
[0018]对照品溶液的制备精密称取蛇床子素对照品10.31mg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀(103.1 μ g/ml);精密量取3ml置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每Iml中含30.93μ g)。
[0019]供试品溶液的制备取本品5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45Mffl)滤过，取续滤液，即得。
[0020]阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除独活外其余药味，按制法制成独活阴性样品，再取此阴性样品按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含独活的阴性样品溶液。
[0021]色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶柱(Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18，
4.6 X 150mm)，保护柱:YWG C18 10X4.6mm ;流动相:甲醇-0.4%冰醋酸溶液58:42 ;流速:
1.0ml/min,柱温:室温；检测波长:322nm。
[0022]分别吸取蛇床子素对照品溶液、供试品溶液及不含独活的阴性样品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定。此条件下蛇床子素与其它组分达到基线分离，分离度R>1.5，理论板数按蛇床子素峰计算大于5000，蛇床子素保留时间约为24分钟。阴性样品溶液色谱在相应位置无吸收峰，可见阴性无干扰。
[0023]方法学验证结果:对照品纯度检查:以峰面积归一化法计算，含量为99.9%，符合含量测定要求，计算时按100%计。线性关系考察:蛇床子素的回归方程:A =3.BOXlO6C +9.79X 103，r=0.9999。表明蛇床子素进样量在0.1031?0.8248 μ g范围内线性关系良好，并且直线通过原点，可用单点外标法进行测定和计算。精密度试验:蛇床子素峰面积平均值为1119213，RSD为0.62%，表明精密度较好。稳定性试验:蛇床子素的峰面积的平均值为799808，RSD为1.03%，表明供试品溶液在24h内稳定性较好。重复性试验:蛇床子素的含量平均值为0.108 mg/ml, RSD为0.51%表明方法重复性较好。加样回收率试验:蛇床子素的平均回收率为98.16%，RSD为0.44%，表明方法回收率较好。
[0024]以双活止痛酊为供试品，采用高效液相色谱法测定蛇床子素的含量，具体实施例如下:
实施例1
色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%冰醋酸溶液(58:42)为流动相；检测波长为322nm。
[0025]对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含30 μ g的溶液，即得。
[0026]供试品溶液的制备精密量取供试品5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45Mffl)滤过，取续滤液，即得。
[0027]测定在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液20 μ I ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
[0028]实施例2
色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%冰醋酸溶液(40:60)为流动相；检测波长为322nm。[0029]对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含IOyg的溶液，即得。
[0030]供试品溶液的制备精密量取供试品5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45Mffl)滤过，取续滤液，即得。
[0031]测定在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液20 μ I ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
[0032]实施例3
色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%冰醋酸溶液(70:30)为流动相；检测波长为322nm。
[0033]对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含60 μ g的溶液，即得。
[0034]供试品溶液的制备精密量取供试品5ml，置IOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45Mffl)滤过，取续滤液，即得。
[0035]测定在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液5μ I ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
[0036]实施例4
色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%冰醋酸溶液(45:55)为流动相；检测波长为322nm。
[0037]对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含30 μ g的溶液，即得。
[0038]供试品溶液的制备精密量取供试品5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45Mffl)滤过，取续滤液，即得。
[0039]测定在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液10 μ I ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
[0040]实施例5
色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%冰醋酸溶液(60:40)为流动相；检测波长为322nm。
[0041]对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含30 μ g的溶液，即得。
[0042]供试品溶液的制备精密量取供试品5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45Mffl)滤过，取续滤液，即得。
[0043]测定在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液20 μ I ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
【权利要求】
1.双活止痛酊的质量检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法测定蛇床子素的含量; 色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为40?70:60?30的甲醇-0.4%冰醋酸溶液；检测波长为322nm ； 对照品溶液的制备:精密称取蛇床子素对照品，加甲醇制成浓度为10?60μ g/ml的溶液，即得； 供试品溶液的制备:精密量取供试品，加流动相稀释2?10倍，滤过，取续滤液，即得；测定:在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液5?20μ1 ;以相对保留时间定性，以峰面积定量。
2.根据权利要求1所述双活止痛酊的质量检测方法，其特征在于，所述流动相为45?60:55?40的甲醇-0.4%冰醋酸溶液。
3.根据权利要求2所述双活止痛酊的质量检测方法，其特征在于，所述流动相为58:42的甲醇-0.4%冰醋酸溶液。
4.根据权利要求1至3中任一所述双活止痛酊的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为:精密量取供试品，加流动相稀释5倍，滤过，取续滤液，即得。
5.根据权利要求4所述双活止痛酊的质量检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法为:取蛇床子素对照品，精密称定，加甲醇制成每Iml含30μ g的溶液。
6.根据权利要求5所述双活止痛酊的质量检测方法，其特征在于，所述对照品溶液和供试品溶液的进样量为20μ1。
【文档编号】G01N30/02GK103728384SQ201310715616
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】陈晓军, 黄园, 阮碧芳, 荣燕李, 梁月钊, 莫少红, 廖厚知, 梁山丹 申请人:广西博科药业有限公司