饮用水中大肠杆菌的检测方法
【专利摘要】检测饮用水中大肠杆菌的方法，所述方法将大肠杆菌菌悬液用缓冲液配成不同浓度梯度，然后进行半乳糖苷酶的诱导，终止反应5min，3000r/min离心5min，收集大肠杆菌，加入LPB制成悬浮液作为待测液，将待测液加入96孔酶板中，再加入等量上述CPRG溶液，混合均匀于室温下反应，3h后出现显色反应，滴加两滴待测液至试纸条上，将试纸条置于测试孔检测后记录光电传感器显示的吸光强度值，配制细菌群落数梯度浓度的大肠杆菌溶液，平行重复在光电型传感器上进行检测，记录光反射信号值并计算用光电传感法测得的大肠杆菌浓度。本饮用水中大肠杆菌的检测方法具有该方法相比常规DNA提取方法更加快速、简便，并且效果良好。
【专利说明】饮用水中大肠杆菌的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及饮用水检测【技术领域】，特别涉及饮用水中大肠杆菌的检测方法。
【背景技术】
[0002]大肠杆菌是温血动物肠道菌，通常对人体无害，被中国以及很多国家作为水及各种食品粪便污染状况的指示菌进行检测。随着社会经济的不断发展，人民生活水平的不断提高，更多的人开始选择更加新鲜、更加方便的食物作为日常摄入所需，鲜活农产品市场在国内外展现出了良好的发展前景，然而，以目前的发展状况来看，对于鲜活农产品的安全问题，还没有得到切实的保障，比如蔬菜在种植、加工过程中，不可避免地会被肥料、土壤、水源、动物和人类带来的致病菌污染。人们生食新鲜蔬菜，使致病菌通过受到污染的蔬菜带入人体，引起不同程度的疾病。近10年来，国内由微生物引起的食源性疾病事件中，大肠杆菌已占5.6%,是主要病原微生物之一。
[0003]大肠杆菌也称为大肠埃希氏菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，革兰氏阴性无芽孢杆菌，多数大肠杆菌是不致病，作为人、动物肠道中的正常菌群附着在肠道里，并随着人和动物肠道的排泄物排出体外，从而分散到自然环境中。但少数的大肠杆菌是具有毒性的。所以，一旦食品被检测出含有大肠杆菌就意味着食品可能直接或间接受到了粪便的污染。卫生学上，将大肠杆菌作为饮用水、食品等粪源性污染指示菌，因而快速准确的检测大肠杆菌的数量对实际的生产、安全检测有着重大的意义。近年来，由于大肠杆菌引发的食品安全事件层出不穷，每年由大肠杆菌引发的病例多大6.4亿，在我国，大肠杆菌是引起我国居民腹泻的首要病源，因此采用先进的生物和化学方法，快速准确的检验大肠杆菌是提升食品安全的有效途径，同时也是确保我国居民生命安全的必要措施，其检测方法的研究也变得尤为重要。
【发明内容】
[0004]本发明针对现有检测技术的局限性，提供一种检测饮用水中大肠杆菌的方法，饮用水中大肠杆菌的检测方法，所述方法将大肠杆菌菌悬液用0.02mol/L pH=6缓冲液配成不同浓度梯度，分别为103_107CFU/mL，然后进行半乳糖苷酶的诱导，首先取IOmL肉汁制作的菌悬液，加入300 μ L浓度为10mmol/L的IPTG溶液，36.5°C水浴培养30min诱导β -半乳糖苷酶，然后终止反应5min, 3000r/min离心5min,收集大肠杆菌,加入100 μ L PB制成悬浮液作为待测液，将100 μ L待测液加入96孔酶板中，再加入等量上述CPRG溶液，混合均匀于室温下反应，3h后出现显色反应，滴加两滴待测液至试纸条上，将试纸条置于测试孔检测后记录光电传感器显示的吸光强度值，根据不同浓度大肠杆菌标准液所对应的不同光反射强度值，建立标准曲线；配制细菌群落数为105CFU/mL的大肠杆菌溶液，平行5次在光电型传感器上进行检测，记录光反射信号值并计算用光电传感法测得的大肠杆菌浓度。
[0005]所述缓冲溶液为lmol/L的HCl/NaOH体系。
[0006]本饮用水中大肠杆菌的检测方法具有该方法相比常规DNA提取方法更加快速、简便，并且效果良好。
【具体实施方式】
[0007]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0008]实施例1
[0009]一种检测饮用水中大肠杆菌的方法，饮用水中大肠杆菌的检测方法，所述方法将大肠杆菌菌悬液用0.02mol/L pH=6缓冲液配成不同浓度梯度，分别为103_107CFU/mL，然后进行半乳糖苷酶的诱导，首先取IOmL肉汁制作的菌悬液，加入300 μ L浓度为lOmmol/L的IPTG溶液，36.5°C水浴培养30min诱导β -半乳糖苷酶，然后终止反应5min，3000r/min离心5min，收集大肠杆菌，加入100 μ LPB制成悬浮液作为待测液，将100 μ L待测液加入96孔酶板中，再加入等量上述CPRG溶液，混合均匀于室温下反应，3h后出现显色反应，滴加两滴待测液至试纸条上，将试纸条置于测试孔检测后记录光电传感器显示的吸光强度值，根据不同浓度大肠杆菌标准液所对应的不同光反射强度值，建立标准曲线；配制细菌群落数梯度浓度的大肠杆菌溶液，平行重复在光电型传感器上进行检测，记录光反射信号值并计算用光电传感法测得的大肠杆菌浓度。所述缓冲溶液为lmol/L的HCl/NaOH体系。
【权利要求】
1.饮用水中大肠杆菌的检测方法，其特征在于，所述方法将大肠杆菌菌悬液用0.02mol/L pH=6缓冲液配成不同浓度梯度，分别为103_107CFU/mL，然后进行半乳糖苷酶的诱导，首先取IOmL肉汁制作的菌悬液，加入300 μ L浓度为lOmmol/L的IPTG溶液，36.5°C水浴培养30min诱导β -半乳糖苷酶,然后终止反应5min, 3000r/min离心5min,收集大肠杆菌，加入100 μ LPB制成悬浮液作为待测液，将100 μ L待测液加入96孔酶板中，再加入等量上述CPRG溶液，混合均匀于室温下反应，3h后出现显色反应，滴加两滴待测液至试纸条上，将试纸条置于测试孔检测后记录光电传感器显示的吸光强度值，根据不同浓度大肠杆菌标准液所对应的不同光反射强度值，建立标准曲线；配制细菌群落数梯度浓度的大肠杆菌溶液，平行重复在光电型传感器上进行检测，记录光反射信号值并计算用光电传感法测得的大肠杆菌浓度。
2.根据权利要求1所述的饮用水中大肠杆菌的检测方法，其特征在于，所述缓冲溶液为 lmol/L 的 HCl/NaOH 体系。
【文档编号】G01N21/31GK103543263SQ201310530494
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】关杰, 关宇, 江美玲, 曹卉, 王清 申请人:大连大公环境检测有限公司