乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法
【专利摘要】本发明公开了乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，包括以下步骤：1）样品提取：准确称取乳粉或乳粉制品，置于比色管中，加入乙腈溶液混匀；2）苯甲酸的制备：移取步骤1）所得溶液中的上层乙腈提取液于圆底离心管中，加入50%碘化钾溶液，混匀，静置，氮吹浓缩；3）定容和过滤：用5%甲醇水溶液对步骤2）中所得苯甲酸溶液进行定容，然后过滤；4）测定：对步骤3）定容过滤后的苯甲酸溶液进行柱分离，然后用液相色谱仪进行测定。本发明的方具有简便、快捷、检出限低、准确性好等特点，适用于乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定。
【专利说明】乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及过氧化苯甲酰的测定方法，特别涉及乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法。
【背景技术】
[0002]我国食品添加剂使用卫生标准(GB2760-2011)中规定，增白剂过氧化苯甲酰是不允许添加到乳制品产品中。而事实上，企业为追求经济利益，在乳粉中非法添加过氧化苯甲酰的事件时有发生。
[0003]目前文献报道的过氧化苯甲酰测定方法有液相色谱法和气相色谱法，测试基质主要针对小麦粉和大米粉的研究，还没有针对乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的检测研究。由于乳粉所含蛋白质、脂肪很高，采用常规的用于小麦粉和大米粉的过氧化苯甲酰测定方法测试方法导致样品结块，无法提取样品中添加的过氧化苯甲酰测试。
[0004]因此，提供一种具有简便、快捷、准确性好等特点，适用于乳粉中过氧化苯甲酰的测定方法就成为该【技术领域】急需解决的技术难题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种具有简便、快捷、准确性好等特点，适用于乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法。
[0006]本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的:
[0007]乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，包括以下步骤:
[0008]I)样品提取:准确称取乳粉或乳粉制品，置于比色管中，加入乙腈溶液混匀；
[0009]2)苯甲酸溶液的制备:移取步骤I)所得溶液中的上层乙腈提取液于圆底离心管中，加入50质量％碘化钾溶液，混匀，静置，氮吹浓缩，得苯甲酸溶液；
[0010]3)定容和过滤:用5质量％甲醇水溶液对步骤2)中所得苯甲酸溶液进行定容，然后过滤，得定容过滤后的苯甲酸溶液；
[0011]4)测定:对步骤3)定容过滤后的苯甲酸溶液进行柱分离，然后用液相色谱仪进行测定。
[0012]一种优选技术方案，其特征在于:所述步骤4)中所述柱分离所用的分离柱是ZORBAX SB-C18 柱。
[0013]一种优选技术方案，其特征在于:所述步骤4)中所述液相色谱仪用的流动相为甲醇:乙酸铵溶液体系。
[0014]一种优选技术方案，其特征在于:所述甲醇:乙酸铵溶液体系中甲醇:乙酸铵的比例为5:95。
[0015]一种优选技术方案，其特征在于:所述步骤4)中所述液相色谱仪用的检测波长为227 纳米(nm)。
[0016]本发明的优点在于:通过乙腈提取样品中过氧化苯甲酰，并用碘化钾将提取的过氧化苯甲酰还原成具有紫外吸收的苯甲酸，取上清液进行氮吹浓缩，定容过滤后，用SB-C18柱分离，用高效液相色谱仪进行测定，建立了乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法。本发明公开的过氧化苯甲酰的测定方法具有简便、快捷、检出限低、准确性好等特点。
[0017]下面通过附图和【具体实施方式】对本发明做进一步说明，但并不意味着对本发明保护范围的限制。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1是本发明实施例1碘化钾溶液浓度反应条件实验比较曲线(碘化钾溶液浓度对还原反应的影响)。
[0019]图2是本发明实施例1碘化钾溶液加入量反应条件实验比较曲线(碘化钾溶液添加量对还原反应的影响)。
[0020]图3是本发明实施例1碘化钾溶液反应时间条件实验比较曲线(过氧化苯甲酰与碘化钾最佳反应时间)。
【具体实施方式】
[0021]实施例1
[0022]I材料和方法
[0023]1.1仪器与设备
[0024]液相色谱仪(1100型)，配二极管阵列检测器和在线脱气机；漩涡仪；离心机；氮吹仪(N-EVAP112型)；0.22 (微米)μπι针式滤膜。
[0025]1.2试剂和材料
[0026]除另有规定外，试剂均为分析纯，水为去离子水。
[0027]乙腈(色谱级)；乙酸铵(分析纯)；碘化钾溶液(50质量％)，过氧化苯甲酰乙腈标准液(1000 毫克 / 升(mg/L))。
[0028]1.3色谱条件
[0029]色谱柱:ZORBAXSB-C18 柱,250 毫米(mm) X 4.6 毫米(mm) 1.d, 5.Ο-Micron,带预柱。
[0030]流动相为甲醇:0.02mol/L乙酸铵=5:95，流速为1.0毫升/分钟(mL/min);柱温为30°C ;进样量为20微升(μ L);测定波长苯甲酸227纳米(nm)。
[0031]1.4操作步骤
[0032]1.4.1样品提取
[0033]准确称取2.5克(精确至0.01克)市售乳粉或乳粉制品，置于25毫升(mL)离心管中，准确加入乙腈溶液10毫升(mL)，立即用均质器混匀2分钟(min)，静置2分钟(min)，(若上清液浑浊，以5000转(r)离心机离心5分钟(min))，移取5毫升(mL)上层乙腈提取液于5晕升(mL)圆底尚心管,加入50质量％碘化钾溶液0.2晕升(mL),混勻，I分钟(min),静置2分钟(min)后，氮吹浓缩，用5质量％甲醇水溶液定容，过0.22微米(μπι)针式滤膜，上机测定。
[0034]1.4.2标准品制备
[0035]用乙腈配制0.01，0.02，0.04，0.1，0.2，0.4，1.0，2.0，4.0，8.0 毫克 / 升(mg/L)过氧化苯甲酰标准系列溶液，分别移取5.0毫升(mL)到5毫升(mL)圆底离心管，加入50质量％碘化钾溶液0.2毫升(mL)，混匀，I分钟(min)，静置5分钟(min)，40°C氮吹浓缩，用5质量％甲醇水溶液定容2.0毫升(mL)，过0.22微米(μ m)针式滤膜，上机测定。
[0036]2结果与讨论
[0037]2.1样品提取、净化条件的选择
[0038]据文献报道，过氧化苯甲酰微溶于水，溶于甲醇、乙醇等有机溶剂。通过实验发现，过氧化苯甲酰用水溶解，不能与碘化钾溶液发生还原反应，只能溶于甲醇等溶液才能发生还原反应。根据这一特点，本发明实验了采用甲醇进行样品中过氧化苯甲酰的提取，发现由于样品中含有蛋白质、脂肪较多，甲醇总是易导致样品结块，提取不易，而通过试验各种有机溶剂，发现采用乙腈提取样品，样品分散极好，不易结块，还极易提取样品中的过氧化苯甲酰，提取效率较高，但提取液直接上机检测，其溶液色谱分离上效果却非常不好，与样品杂质分不开，本发明人通过反复实验，意外发现，采用将提取液乙腈用氮气浓缩(吹干)并用2mL5%甲醇水溶液定容，所测结果极佳，达到了前处理简便、快捷、且准确性高而且检出下限低等特点。
[0039]2.2过氧化苯甲酰与碘化钾溶液反应条件的选择
[0040]本发明通过用过氧化苯甲酰乙腈溶液5.0毫克每升(mg/L)与不同碘化钾溶液浓度、加入量及反应时间长短进行了条件实验，试验结果表1-表3，制成图，分别见图1-图3。通过图1-图3以及表1-表3，可以看出，当碘化钾浓度达50质量％，即饱和溶液情况下，过氧化苯甲酰乙腈溶液与碘化钾溶液反应效率最高，在此基础上，当50%碘化钾溶液加入量达0.2毫升(mL)时，反应效率最大且生成苯甲酸量最稳定，因此选择0.2毫升(mL)为加入量。当加入50质量％碘化钾0.2毫升(mL)，过氧化苯甲酰乙腈溶液与碘化钾溶液反应时间影响不大，且生成苯甲酸量基本稳定，本发明实验选择反应时间为5分钟(min)。
[0041]表1碘化钾溶液浓 度对还原反应影响条件实验
[0042]
【权利要求】
1.乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，包括以下步骤: 1)样品提取:准确称取乳粉或乳粉制品，置于比色管中，加入乙腈溶液混匀； 2)苯甲酸溶液的制备:移取步骤I)所得溶液中的上层乙腈提取液于圆底离心管中，力口入50质量％碘化钾溶液，混匀，静置，氮吹浓缩，得苯甲酸溶液； 3)定容和过滤:用5质量％甲醇水溶液对步骤2)中所得苯甲酸溶液进行定容，然后过滤，得定容过滤后的苯甲酸溶液； 4)测定:对步骤3)定容过滤后的苯甲酸溶液进行柱分离，然后用液相色谱仪进行测定。
2.按照权利要求1所述的乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，其特征在于:所述步骤4)中所述柱分离所用的分离柱是ZORBAX SB-C18柱。
3.按照权利要求1所述的乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，其特征在于:所述步骤4)中所述液相色谱仪用的流动相为甲醇:乙酸铵溶液体系。
4.按照权利要求3所述的乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，其特征在于:所述甲醇:乙酸铵溶液体系中甲醇:乙酸铵的比例为5:95。
5.按照权利要求1所述的乳粉及乳粉制品中过氧化苯甲酰的测定方法，其特征在于:所述步骤4)中所述液相色谱仪用的检测波长为227纳米。
【文档编号】G01N30/02GK103487527SQ201310472422
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年10月11日 优先权日:2013年10月11日
【发明者】张春艳, 卢华卫, 云环, 郑书展, 潘国卿, 刘来俊, 白国涛, 李刚 申请人:内蒙古出入境检验检疫局检验检疫技术中心