一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法
【专利摘要】本发明涉及一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法。它是按照先用乙醚溶解药膏，再加水溶解、萃取其中的盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明，静置，分液，水液用乙醚洗涤后，干滤纸滤过，滤液用高效液相色谱进行测定的。该鉴别方法重现性好、专属性强，阴性对照无干扰，实现了一次性对麝香活血化瘀膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的同时定性鉴别，可用于麝香活血化瘀膏的质量控制。
【专利说明】一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的测定，尤其涉及一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法。
【背景技术】
[0002] 麝香活血化瘀膏是一种中西药结合的复方橡胶膏制剂，具有明显的活血化瘀、消炎止痛的功能，主要用于治疗关节扭伤，软组织挫伤，急性腰扭伤，腰肌劳损，肩周炎及未溃冻疮和结节性红斑等疾病。该橡胶膏制剂中含有十一味药物，除含有三七等具有止血、止痛、散瘀、消肿等功效的药物外，还含有盐酸苯海拉明、盐酸普鲁卡因等药物。
[0003]盐酸苯海拉明极易溶解于水，易溶于醇或氯仿，极微溶于乙醚，它能清除由橡胶、氧化锌、松香、羊毛脂、凡士林、液体石蜡组成的橡胶基质对皮肤刺激引起的过敏反应；盐酸普鲁卡易溶于水，略溶于醇，几乎不溶于乙醚，它具有局部麻醉作用。在现有技术中，仅有对其他橡胶膏剂中的盐酸苯海拉明进行含量测定的记载:它是先用醇回流提取其中的盐酸苯海拉明，再用反相高效液相色谱法或用反相离子对高效液相色谱法测定。但现有技术中没有针对橡胶膏剂中盐酸普鲁卡因测定的报道，又由于盐酸普鲁卡因在醇中溶解度不大，用加醇回流的方式不易从橡胶膏中将其提出，因而上述对其他橡胶膏剂中的盐酸苯海拉明进行含量测定的方法，并不适用于盐酸普鲁卡因。而作为橡胶膏剂的麝香活血化瘀膏，与其他制剂不同，它含有大量的橡胶基质，该橡胶基质由橡胶、氧化锌、松香、羊毛脂、凡士林、液体石蜡等物质组成，用以上方式提取困难，因此现有技术中没有对麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明、盐酸普鲁卡因进行定性或定量测定的报道，这不利于对麝香活血化瘀膏的质量控制。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，该鉴别方法重现性好，专属性强，能对麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因进行定性鉴别，可用于麝香活血化瘀膏的质量控制。
[0005]本发明的目的是这样实现的:
一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，其特征在于，它是按照以下步骤进行测定的:
(1)供试品溶液的制备
取麝香活血化瘀膏数片，除去盖衬、剪碎、混匀，称取其中的6~12g (相当于3~6片的质量)作为供试品，加入脂溶性有机溶剂浸泡，充分振摇使药膏溶解，加入一定量水，充分振摇，静置分液，取水液，用该脂溶性有机溶剂洗涤数次，静置，弃去有机溶剂，水液用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备精密称取盐酸普鲁卡因对照品、盐酸苯海拉明对照品适量，加水制成每Iml分别至少含盐酸普鲁卡因8.5 μ g、盐酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得对照品溶液；
(3)采用高效液相色谱法测定
用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与质量百分比为1%的硫酸铵溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱；检测波长为220nm ;分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液后，注入液相色谱仪进行测定，最后根据所得色谱图可定性检测该麝香活血化瘀膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因。
[0006]本方法基于供试品溶液中的盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间，应分别与对照品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间一致，因而可准确快速地对这两种物质进行定性鉴定。
[0007]上述以乙腈与质量百分比为1%的硫酸铵溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以质量百分比为1%的硫酸铵溶液为流动相B，按下述体积比进行梯度洗脱:0~7分钟，流动相A为15%，流动相B为85%，7~25分钟，流动相A为50%，流动相B为50%。该流动相的洗脱比例能使该药膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因与其相邻杂质达基线分离，进而实现各组分的鉴别。
[0008]上述浸泡时间为10分钟。根据检测结果可知:浸泡时间低于10分钟，提出的盐酸普鲁卡因、盐酸苯海拉明极少。浸泡10分钟和20分钟提出的盐酸普鲁卡因、盐酸苯海拉明，无显著性差异 ，故将浸泡时间确定为10分钟。
[0009]更为详细地说，本发明公开的麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，其特征在于，它具体是按照以下步骤进行测定的:
(1)供试品溶液的制备
称取麝香活血化瘀膏数片，除去盖衬、剪碎、混匀，之后称取其中的6~12g(相当于3~6片的质量)作为供试品，加入乙醚50ml,浸泡10分钟,充分振摇使药膏溶解,加入水15ml,充分振摇，静置，分取水液，用乙醚洗涤2次，每次15ml，弃去乙醚，水液用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备
精密称取盐酸普鲁卡因对照品、盐酸苯海拉明对照品适量，加水制成每Iml分别含盐酸普鲁卡因8.5 μ g、盐酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得对照品溶液；
(3)采用高效液相色谱法测定
采用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分比为1%的硫酸铵溶液为流动相B，按下述体积比进行梯度洗脱:O~7分钟，流动相A为15%，流动相B为85%，7~25分钟，流动相A为50%，流动相B为50% ;其检测波长为220nm ;柱温为室温；流速为1.0 mL/min ;进样量为20 μ? ;按照设置的所述色谱检测条件，分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，最后根据所得色谱图即可对该麝香活血化瘀膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因进行定性检测。
[0010]本发明具有以下有益效果:
本发明方法重现性好、专属性强，阴性对照无干扰，实现了一次性对麝香活血化瘀膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的同时定性鉴别，可用于麝香活血化瘀膏的质量控制。【专利附图】
【附图说明】
[0011]附图1是实施例1中所得的对照品溶液的色谱图。
[0012]附图2是实施例1中所得的供试品溶液的色谱图。
[0013]附图3是实施例2中所得的供试品溶液的色谱图。
[0014]附图4是实施例3中所得的供试品溶液的色谱图。
[0015]附图5是实施例4中所得的第一份供试品溶液的色谱图。
[0016]附图6是实施例4中所得的第二份供试品溶液的色谱图。
[0017]附图7是实施例4中所得的第三份供试品溶液的色谱图。
[0018]附图8是所得的阴性对照溶液的色谱图。
[0019]附图9是所得的盐酸普鲁卡因对照品溶液的紫外吸收光谱图。
[0020]附图10是所得的盐酸苯海拉明对照品溶液的紫外吸收光谱图。
【具体实施方式】
[0021]下面通过实施例对本发明进行具体描述，但以下实施例只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对其保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
[0022]实施例1
一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，它具体是按照以下步骤进行测定的:
(1)供试品溶液的制备
取批号为20130603的麝香活血化瘀膏10片，除去盖衬、剪碎，称取其中的Sg(相当于其中4片的量)，作为供试品，加入乙醚50ml，浸泡10分钟，充分振摇使药膏溶解，加入水15ml，充分振摇，静置，分取水液，用乙醚洗涤2次，每次15ml，弃去乙醚，水液用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备 精密称取由中国药品生物制品检定所提供的盐酸普鲁卡因对照品、盐酸苯海拉明对照品适量，加水制成每Iml分别含盐酸普鲁卡因8.5 μ g、盐酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得对照品溶液；
(3)采用高效液相色谱法测定
其液相色谱条件为:岛津LC-1OAvT高效液相色谱仪，IOAvP检测器，CLASS-VP数据处理软件；色谱柱用Diamonsil C18 (5 μ m, 250 X4.6 mm);流动相:以乙腈(色谱纯)为流动相A，以质量百分比为1%的硫酸铵溶液为流动相B，按下述体积比组成流动相进行梯度洗脱:0~7分钟，流动相A为15%，流动相B为85%，7~25分钟，流动相A为50%，流动相B为50% ;其检测波长为220nm ;柱温为室温；流速为1.0 mL/min ;进样量为20 μ? ;按照以上设置的色谱检测条件，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，最后分别得到对照品溶液的色谱图，参见说明书附图1，和供试品溶液的色谱图，参见说明书附图2。根据所得的该色谱图对比可知:供试品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间，分别与对照品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间一致，因而可知所检测的该供试品中含有盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明。
[0023]实施例2
一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，它是取批号为20130701的麝香活血化瘀膏5片，除去盖衬、剪碎，称取其中的8g (相当于其中4片的量)作为供试品，后按照实施例1中的操作步骤和方法，制备供试品溶液、对照品溶液，和采用高效液相色谱法测定，最后即得到本例中的供试品溶液的色谱图，参见说明书附图3。对比对照品溶液的色谱图，即说明书附图1可知:供试品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间，分别与对照品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间一致，因而可知所检测的该供试品中含有盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明。
[0024]实施例3
一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，它是取批号为20130802的麝香活血化瘀膏5片，除去盖衬、剪碎，称取其中的6g (相当于其中3片的量)，作为供试品，按照实施例1中的操作步骤和方法，制备供试品溶液、对照品溶液，和采用高效液相色谱法测定，最后即得到本例中的供试品溶液的色谱图，参见说明书附图4。对比对照品溶液的色谱图，即说明书附图1可知:供试品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间，分别与对照品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间一致，因而可知所检测的该供试品中含有盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明。
[0025]实施例4 重现性试验
一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，它是取批号为20130802的麝香活血化瘀膏共20片，除去盖衬、剪碎依次分3份，分别称取其中的8g (均相当于其中4片的量)作为供试品，按照实施例1中的操作步骤和方法，制备供试品溶液、对照品溶液，和采用高效液相色谱法测定，最后即得到本例中的供试品溶液的色谱图，参见说明书附图5、6和7。对比对照品溶液的色谱图，即说明书附图1可知:供试品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间，分别与对照品溶液中盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的色谱峰的保留时间一致，因而可知所检测的该供试品中含有盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明。
[0026]此外，本发明还做了以下研究实验:
①专属性考察实验:
阴性对照试验:按麝香活血化瘀膏的处方量，用除盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明以外的其他药物，按其制备方法制备不含盐酸普鲁卡因和盐酸苯海拉明的橡胶膏，之后按实施例I中供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，并按照实施例1所述色谱条件进行试验，结果阴性对照溶液无干扰，其色谱图见说明书附图8。
[0027]②高效液相色谱条件的选择实验:
检测波长选择
分别取一定量的盐酸苯海拉明对照品和盐酸普鲁卡因对照品，加水制成每Iml含盐酸普鲁卡因8.5μ g的盐酸普鲁卡因对照品溶液,每Iml含盐酸苯海拉明4.5 μ g的盐酸苯海拉明对照品溶液，分别在190?350nm波长范围进行光谱扫描，并以258nm、210nm和220nm为检测波长进行试验，结果发现在220nm波长处两种物质都有比较强的吸收，其溶液的紫外吸收光谱图分别见说明书附图9和10。[0028]流动相选择选择
(I)以乙腈-0.5%三乙胺溶液(用醋酸调节其pH为6.5)为流动相，进行梯度洗脱，结果柱效低，峰型差，保留时间较长，基线漂移严重，故不采用。
[0029](2)以体积比为25:75的乙腈_1%硫酸铵溶液为流动相，进行等度洗脱，结果盐酸普鲁卡因保留时间短而盐酸苯海拉明保留时间较长；故不采用。
[0030](3)以乙腈为流动相A、以质量百分比为1%的硫酸铵溶液为流动相B，按下述体积比组成流动相进行梯度洗脱:0?7分钟，流动相A为15%，流动相B为85%，7?20分钟，流动相A为60%，流动相B为40% ;结果两种物质保留时间合适，峰型都很好，但不能与相邻杂质达到基线分离；故不采用。
【权利要求】
1.一种麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，其特征在于，它是按照以下步骤进行测定的: (1)供试品溶液的制备 取麝香活血化瘀膏数片，除去盖衬、剪碎、混匀，称取其中的6~12g作为供试品，加入脂溶性有机溶剂浸泡，充分振摇使药膏溶解，加入一定量水，充分振摇，静置分液，取水液，用该脂溶性有机溶剂洗涤数次，静置，弃去有机溶剂，水液用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得供试品溶液； (2)对照品溶液的制备 精密称取盐酸普鲁卡因对照品、盐酸苯海拉明对照品适量，加水制成每Iml分别至少含盐酸普鲁卡因8.5 μ g、盐酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得对照品溶液； (3)采用高效液相色谱法测定 用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与质量百分比为1%的硫酸铵溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱；检测波长为220nm ;分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液后，注入液相色谱仪进行测定，最后根据所得色谱图可定性检测该麝香活血化瘀膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因。
2.根据权利要求1所述的麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，其特征在于:所述以乙腈与质量百分比为1%的硫酸铵溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以质量百分比为1%的硫酸铵溶液为流动相B，按下述体积比进行梯度洗脱:0~7分钟，流动相A为15%，流动相B为85%，7~25分钟，流动相A为50%，流动相B为50%。
3.根据权利要求1或2所述的麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，其特征在于:所述浸泡时间为10分钟。
4.根据权利要求1所述的麝香活血化瘀膏中盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因的鉴别方法，其特征在于，它具体是按照以下步骤进行测定的: (1)供试品溶液的制备 称取麝香活血化瘀膏数片，除去盖衬、剪碎、混匀，之后称取其中的6~12g作为供试品，加入乙醚50ml,浸泡10分钟,充分振摇使药骨溶解,加入水15ml,充分振摇,静置,分取水液，用乙醚洗涤2次，每次15ml，弃去乙醚，水液用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得供试品溶液； (2)对照品溶液的制备 精密称取盐酸普鲁卡因对照品、盐酸苯海拉明对照品适量，加水制成每Iml分别含盐酸普鲁卡因8.5 μ g、盐酸苯海拉明4.5 μ g的混合溶液，即得对照品溶液； (3)采用高效液相色谱法测定 采用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分比为1%的硫酸铵溶液为流动相B，按下述体积比进行梯度洗脱:O~7分钟，流动相A为15%，流动相B为85%，7~25分钟，流动相A为50%，流动相B为50% ;其检测波长为220nm ;柱温为室温；流速为1.0 mL/min ;进样量为20 μ? ;按照设置的所述色谱检测条件，分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，最后根据所得色谱图即可对该麝香活血化瘀膏中的盐酸苯海拉明和盐酸普鲁卡因进行定性检测 。
【文档编号】G01N30/88GK103487544SQ201310438085
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月24日 优先权日:2013年9月24日
【发明者】罗延谷, 李文艳, 罗财勇, 何咏梅, 朱丽利 申请人:重庆紫光化工股份有限公司