一种抗骨增生片的定性定量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗骨增生片的定性定量检测方法，增加了：（1）采用薄层色谱法，以柚皮苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有骨碎补；以鸡血藤对照药材为对照，鉴别抗骨增生片中含有鸡血藤；以淫羊藿苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有淫羊藿；（2）采用高效液相色谱法测定抗骨增生片中淫羊藿苷的含量。与现有技术相比，本发明方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制水平，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明的抗骨增生片的定性定量检测方法，既可以用于控制抗骨增生片的质量，又可以用来控制相同处方的其他剂型如胶囊、颗粒、丸剂等剂型的质量。
【专利说明】一种抗骨增生片的定性定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种抗骨增生片的质量控制方法。
【背景技术】
[0002] 抗骨增生片由熟地黄、鹿衔草、骨碎补、鸡血藤、淫羊藿、肉苁蓉、莱菔子组成，具有 补肾，活血、止痛之功效，用于肥大性脊椎炎，颈椎病，跟骨刺，增生性关节炎，大骨节病。该 产品的质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第7册，标准编号 WS3-B-1338-93,该标准中仅有鸡血藤显微鉴别方法，没有任何定性定量检测方法，不利于 控制抗骨增生片的产品质量。现代食品与药品杂志2006年第16卷第2期《抗骨增生片质 量标准研究》记载了抗骨增生片质量控制方法，对骨碎补、鸡血藤进行了定性鉴别，对淫羊 藿苷进行了含量测定，其定性方法操作复杂且所用试剂毒性较大。海峡药学2007年第19卷 第6期《抗骨增生片的质量标准研究》记载了抗骨增生片质量检测方法，对肉苁蓉、淫羊藿 进行了定性鉴别，对淫羊藿苷进行了含量测定，其质控方法操作繁琐。中国实验方剂学杂志 第12卷第7期《抗骨增生丸的定性定量方法研究》记载了抗骨增生丸定性定量检测方法， 对鸡血藤、骨碎补进行了定性鉴别，对淫羊藿苷和松果菊苷进行了含量测定，其定性方法操 作复杂且所用试剂毒性较大。现有质量标准不能有效的控制抗骨增生片的质量，从而将影 响该产品的质量水平及其临床疗效。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于：提供一种抗骨增生片的定性定量检测方法。本发明针对现有 控制标准的不足，对抗骨增生片的质量控制方法进行了研究，在原部颁标准的基础上增加 了 ：（1)采用薄层色谱法，以柚皮苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有骨碎补；以鸡血藤对照 药材为对照，鉴别抗骨增生片中含有鸡血藤；以淫羊藿苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有淫 羊藿；（2)采用高效液相色谱法测定抗骨增生片中淫羊藿苷的含量，本发明方法提高了抗 骨增生片的质量控制水平，从而保证了该药品的质量和临床疗效。
[0004] 本发明是这样实现的： 一种抗骨增生片的定性定量检测方法，包括鸡血藤的显微鉴别，还包括：①薄层色谱 法，以柚皮苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有骨碎补；以鸡血藤对照药材为对照，鉴别抗骨 增生片中含有鸡血藤；以淫羊藿苷为对照，鉴别抗骨增生片中含有淫羊藿；②采用高效液 相色谱法测定抗骨增生片中淫羊藿苷的含量，所述定性定量检测方法包含如下步骤： (1)取本品，置显微镜下观察：石细胞圆形或椭圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含橙 红色或棕色物。
[0005] (2)取本品，研细，加石油醚（60?90°C)，加热回流，放冷，滤过，滤液备用。残渣 加乙酸乙酯，加热回流，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取淫 羊藿苷和柚皮苷对照品，分别加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各ClOW，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水=5?15 : 0.5?1.5 : 0.5?1.5 : 0.5?I. 5为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下 检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3) 取上述石油醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取鸡血藤 对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB) 试验，吸取上述两种溶液各5~20沿，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄 层板上，以石油醚（30?60°C)_乙酸乙酯=9. 5?28. 5 : 2. 5?7. 5为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 °C加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm) 下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4) 含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05~0. 3% 甲酸溶液=20?35 : 80?65为流动相；检测波长为26(T280nm;流速为0. 5?I.OmL/min;柱温 25~35°C;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每Iml含60呢 的溶液，即得。
[0006] 供试品溶液的制备：取本品5~20片，研细，取约0. 5~2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入509T95%乙醇，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)，放冷，再称 定重量，用509T95%乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0007] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测 定，即得； 本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H4tlO15)计不得少于0.34mg。 为更好的实现本发明，所述抗骨增生片的定性定量检测方法，可进一步优化为： (1)取本品，置显微镜下观察：石细胞圆形或椭圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含橙 红色或棕色物。
[0008] (2)取本品10?30片，研细，加石油醚（60?90°C)2(T80ml，加热回流0? 5?2小时， 放冷，滤过，滤液备用。残渣加乙酸乙酯2(T80ml，加热回流0. 5~2小时，放冷，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇0. 5~2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷和柚皮苷对照品，分别加 甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一 部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各ClOW，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙 酯-丁酮-甲醇-水=5?15 : 0. 5?1.5 : 0. 5?1.5 : 0. 5?1.5为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以三氯化铝试液，在l〇5°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视；供试品色 谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3)取上述石油醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯0. 5~2ml使溶解，作为供试品溶液；另 取鸡血藤对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附 录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5~20耵，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅 胶G薄层板上，以石油醚（30?60°C)-乙酸乙酯=9.5?28.5 : 2.5?7.5为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光 灯（365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 占. (4)含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 05~0. 3% 甲酸溶液（20?35 : 80?65)为流动相；检测波长为26(T280nm;流速为0. 5?I.OmL/min;柱 温25~35°C;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每Iml含60呢 的溶液，即得。
[0009] 供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取本品5~20片，研细，取约0. 5~2g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入509T95%乙醇2(T50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率 300W，频率40kHz)30?60分钟，放冷，再称定重量，用509T95%乙醇补足减失的重量，摇匀，用 0. 45ym微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0010] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各IOy1，注入液相色谱仪，测 定，即得； 本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H4tlO15)计不得少于0.34mg。 为更好的实现本发明，所述抗骨增生片的定性定量检测方法，可再进一步优化为： (1) 取本品，置显微镜下观察：石细胞圆形或椭圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含橙 红色或棕色物； (2) 取本品20片，研细，加石油醚（60?90°C)30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液 备用。残渣加乙酸乙酯50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶 解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷和柚皮苷对照品，分别加甲醇制成每Iml含〇. 5mg的溶 液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三 种溶液各5W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水=10 : 1 : 1 : 1 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯 (365nm)下检视。；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3) 取上述石油醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯0. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取 鸡血藤对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录 VIB)试验，吸取上述两种溶液各10耵，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以石油醚（30?60°C)_乙酸乙酯=19 : 5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm)下检视；供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4) 含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 1%甲酸 溶液（28 : 72)为流动相；检测波长为270nm;流速为0. 8mL/min;柱温30°C;理论板数按淫 羊藿苷峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每Iml含60呢 的溶液，即得； 供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取本品10片，研细，取约lg，精密称定，置具塞 锥形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)30分 钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45ym微孔滤膜滤过，取续滤 液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yi，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H4tlO15)计不得少于0.34mg。
[0011] 为更好的表明本发明的实质，将本发明的方法学考察详述如下： 1、取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：石细胞圆形、长圆形或类多 角形，壁厚，胞腔含橙红色或棕色物。见图1。
[0012] 2、取本品20片，研细，加石油醚（60?90°C) 30ml，加热回流1小时，放冷，滤过， 滤液备用。残渣加乙酸乙酯50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml 使溶解，作为供试品溶液。分别按处方配比称取缺淫羊藿或缺骨碎补的其他药材，分别制成 缺淫羊藿或缺骨碎补的阴性样品，同法制成缺淫羊藿或缺骨碎补的阴性对照溶液。另取淫 羊藿苷和柚皮苷对照品，分别加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层 色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5W，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水（10 : 1 : 1 : 1)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以三氯化铝试液，在l〇5°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2、3。
[0013] 3、取上述石油醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。 按处方配比称取缺鸡血藤的其他药材，制成缺鸡血藤的阴性样品，同法制成缺鸡血藤的阴 性对照溶液。另取鸡血藤对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10耵，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（30?60°C)_乙酸乙酯（19 : 5)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下 检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图4。
[0014] 4、含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； (1)仪器与试药：Waters2695高效液相色谱仪，Waters2998PDA检测器，Empower2色 谱工作站，AY220电子分析天平（日本岛津)，CP22?电子分析天平(赛多利斯)，KQ300DV超 声仪（昆山市超声仪器有限公司），TU-1901紫外-可见分光光度仪(北京普析通用），C18 柱Kromasil0DS-2 ( 250mmX4.6mm，5Mm);柱温为 30°C,检测波长：270nm，流动相：乙 腈：0. 1%甲酸溶液（28 : 72)，流速为0.8ml/min;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水 为纯化水。
[0015] 淫羊藿苷：中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：110737-200414。
[0016] (2)对照品溶液的制备： 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每Iml含60呢的溶液，即得； (3)流动相的选择 采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量时，常用流动相有：①乙腈-水（27:73)、② 乙腈-〇. 1%甲酸溶液（28:72)。分别以两种流动相试验，所得淫羊藿苷色谱峰的峰对称性均 较好，因以乙腈-0. 1%甲酸溶液为流动相理论板数高、分离度较好，故选择乙腈-0. 1%甲酸 溶液（28:72)作为流动相。
[0017] (4)测定波长的选择 取淫羊藿苷对照品溶液，置紫外-可见分光光度仪中，于200?400nm波长范围内扫 描，结果淫羊藿苷在269. 90nm波长处有最大吸收，故选择检测波长为270nm。见图5。
[0018] (5)提取溶剂的选择 取本品，研细，取约lg，共8份，精密称定，置具塞锥形瓶中，依次精密加入稀乙醇、70% 乙醇、50%甲醇、甲醇各25ml，密塞，称定重量，超声处理（300W，40kHz) 30分钟，放冷，再称 定重量，分别用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取对照品溶 液与供试品溶液各1〇沿，注入液相色谱仪，测定并计算，结果表明，用4种溶剂提取供试品， 用70%乙醇、甲醇作为提取溶剂测得含量结果较高，但甲醇相对70%乙醇毒性大，因此，选择 70 %乙醇为提取溶剂。见表1。
[0019] 表1提取溶剂选择结果比较表
【权利要求】
1. 一种抗骨增生片的定性定量检测方法，包括鸡血藤的显微鉴别，其特征在于还包括： ①薄层色谱法，W抽皮巧为对照，鉴别抗骨增生片中含有骨碎补；W鸡血藤对照药材为对 照，鉴别抗骨增生片中含有鸡血藤；W淫羊蕾巧为对照，鉴别抗骨增生片中含有淫羊蕾；② 采用高效液相色谱法测定抗骨增生片中淫羊蕾巧的含量，所述定性定量检测方法包含如下 步骤： (1) 取本品，置显微镜下观察；石细胞圆形或楠圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含澄 红色或踪色物； (2) 取本品，研细，加石油離（60?9(TC )，加热回流，放冷，滤过，滤液备用；残渣加己酸 己醋，加热回流，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；+另取淫羊蕾 巧和抽皮巧对照品，分别加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录VI B)试验，吸取上述H种溶液各5^10rt，分别点于同一娃胶G薄层板上，W 己酸己醋-下丽-甲醇-水=5?15 : 0.5?1.5 : 0.5?1.5 : 0.5?1.5为展开剂，展开，取出， 瞭干，喷氯化铅试液，在105C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； (3) 取步骤（2)项下石油離提取液，挥干，残渣加己酸己醋使溶解，作为供试品溶液；另 取鸡血藤对照药材Ig，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附 录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5^20rt，分别点于同一W駿甲基纤维素轴为黏合剂的娃 胶G薄层板上，W石油離（30?6(TC)-己酸己醋=9. 5?28.5 : 2. 5?7. 5为展开剂，展开， 取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶液，在105C加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光 灯（365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑 占. ；、、、? (4) 含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验；W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W己膳-0. 05^0. 3% 甲酸溶液=20?35 : 80?65为流动相；检测波长为260?280皿；流速为0. 5?1. 0血/min ;柱温 25^35C ;理论板数按淫羊蕾巧峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备；取淫羊蕾巧对照品适量，精密称定，加70%己醇制成每1ml含60嗦 的溶液，即得； 供试品溶液的制备；取本品5^20片，研细，取约0. 5^2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入50%?95%己醇，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40曲Z)，放冷，再称定重 量，用50%、5%己醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含淫羊蕾W淫羊蕾巧（C3化。〇15)计不得少于〇.34mg。
2. 根据权利要求1所述抗骨增生片的定性定量检测方法，其特征在于所述定性定量检 测方法包含如下步骤： (1) 取本品，置显微镜下观察；石细胞圆形或楠圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含澄 红色或踪色物； (2) 取本品1(T30片，研细，加石油離（60?9(TC )2(T80ml，加热回流0. 5^2小时，放冷， 滤过，滤液备用；残渣加己酸己醋2(T80ml，加热回流0. 5^2小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残 渣加甲醇0. 5^2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊蕾巧和抽皮巧对照品，分别加甲醇制 成每1ml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录 VI B)试验，吸取上述H种溶液各5^10rt，分别点于同一娃胶G薄层板上，W己酸己醋-下 丽-甲醇-水=5?15 : 0.5?1.5 : 0.5?1.5 : 0.5?1.5为展开剂，展开，取出，瞭干，喷 氯化铅试液，在105C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视；；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； (3) 取步骤（2)项下石油離提取液，挥干，残渣加己酸己醋0. 5^2ml使溶解，作为供试品 溶液；另取鸡血藤对照药材Ig，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年 版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5^20rt，分别点于同一W駿甲基纤维素轴为黏 合剂的娃胶G薄层板上，W石油離（30?6(TC)-己酸己醋=9. 5?28.5 : 2. 5?7. 5为展开 齐U，展开，取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶液，在105C加热至斑点显色清晰，分别置日光及 紫外光灯（365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 英光斑点； (4) 含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验；W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W己膳-0. 05^0. 3% 甲酸溶液（20?35 : 80?65)为流动相；检测波长为260?280皿；流速为0. 5?1. 0血/min ;柱 温25^35°C ;理论板数按淫羊蕾巧峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备；取淫羊蕾巧对照品适量，精密称定，加70%己醇制成每1ml含60嗦 的溶液，即得； 供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取本品5^20片，研细，取约0. 5^2g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入50%?95%己醇20?50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频 率40曲Z )30?60分钟，放冷，再称定重量，用50%?95%己醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45 y m 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含淫羊蕾W淫羊蕾巧（C3化。〇15)计不得少于〇.34mg。
3.根据权利要求2所述抗骨增生片的定性定量检测方法，其特征在于所述定性定量检 测方法包含如下步骤： (1) 取本品，置显微镜下观察；石细胞圆形或楠圆形、长方形或多角形，壁厚，胞腔含澄 红色或踪色物； (2) 取本品20片，研细，加石油離（60?9(TC)30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液 备用；残渣加己酸己醋50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶 解，作为供试品溶液；另取淫羊蕾巧和抽皮巧对照品，分别加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶 液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述H 种溶液各5W，分别点于同一娃胶G薄层板上，W己酸己醋-下丽-甲醇-水=10 : 1 : 1 : 1 为展开剂，展开，取出，瞭干，喷氯化铅试液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯 (365nm)下检视；；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； (3) 取步骤（2)项下石油離提取液，挥干，残渣加己酸己醋0.5ml使溶解，作为供试品溶 液；另取鸡血藤对照药材Ig，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版 一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各low,分别点于同一 W駿甲基纤维素轴为黏合剂 的娃胶G薄层板上，W石油離（30?6(TC)-己酸己醋=19 : 5为展开剂，展开，取出，瞭干， 喷W 10%硫酸己醇溶液，在105C加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365皿）下 检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； (4)含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验；W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W己膳-0. 1%甲酸 溶液（28 : 7。为流动相；检测波长为270nm ;流速为0. 8血/min ;柱温30。理论板数按淫 羊蕾巧峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备；取淫羊蕾巧对照品适量，精密称定，加70%己醇制成每1ml含60喀 的溶液，即得； 供试品溶液的制备；供试品溶液的制备；取本品10片，研细，取约Ig,精酱称定，直具塞 锥形瓶中，精密加入70%己醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40曲Z )30分 钟，放冷，再称定重量，用70%己醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45 y m微孔滤膜滤过，取续滤 液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含淫羊蕾W淫羊蕾巧佑33恥〇15)计不得少于〇.34mg。
【文档编号】G01N30/90GK104345115SQ201310317681
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年7月26日 优先权日:2013年7月26日
【发明者】张妮瑜, 谷陟欣, 辛秀, 欧金秀, 郗瑞云, 刘淑妦, 袁莉, 朱丽 申请人:九芝堂股份有限公司