一种阿加曲班注射液有关物质的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种阿加曲班注射液有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以缓冲液(取冰醋酸1ml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH值至6.0)-甲醇混合液为流动相；柱温为45℃；检测波长为259nm；直接精密移取阿加曲班注射液100μl进样测定。该方法具有专属性强、操作简单、灵敏度高、准确可靠的特点。
【专利说明】-种阿加曲班注射液有关物质的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种阿加曲班注射液有关物质的检测方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 阿加曲班是一种合成的单价小分子直接凝血酶抑制剂，它可选择性地与凝血酶的 催化活性位点（丝氨酸-组氨酸-精氨酸）进行可逆性地结合，从而发挥竞争性的抑制作 用。与肝素和其他直接凝血酶抑制剂不同的是阿加曲班可抑制血凝块中的凝血酶。阿加曲 班的抗血栓作用不需要辅助因子抗凝血酶III。阿加曲班通过抑制凝血酶催化或诱导的反 应，包括血纤维蛋白的形成，凝血因子v、vm和XIII的活化，蛋白酶C的活化，及血小板聚 集发挥其抗凝血作用。其作用特点为：①直接灭活凝血酶（因子II a)的活性，对凝血酶的 产生没有直接作用，其作用不依赖于抗凝血酶；②不但灭活液相凝血酶，还能够灭活与纤维 蛋白血栓结合了的凝血酶；③阻断凝血瀑布的正反馈，间接抑制凝血酶的产生；④治疗剂 量下对血小板功能无影响，不导致血小板减少症；⑥具有良好的剂量-反应关系，效果和安 全性可W预测；⑧与活化部分凝血活酶时间（APTT)或者活化凝血时间（ACT)相关性良好。
[0003] 在药品生产、胆存和使用过程中，需要对产品质量进行检验W确保符合药用要求， 而质量检验中最关键的一项是有关物质检测，如不能有效检出样品中含有的杂质则可能会 造成毒副反应。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种阿加曲班注射液有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，W 十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W缓冲液（取冰醋酸1ml，稀释至400ml，用氨试液或氨水 调抑值至6. 0)-甲醇混合液为流动相；柱温为45C ;检测波长为259皿；直接精密移取阿 加曲班注射液IOOy 1进样测定。
[0005] 与标准JX20090312、标准YBH11152005及阿加曲班原料药日本药典JP15增补版 中有关物质的检测方法相比，本发明提供的有关物质的检测方法不但能将主成分与相邻最 难分离的杂质A有效分离检测，且阿加曲班的主要氧化降解产物（杂质B)也基本上与相邻 最近峰均能达分离检测要求，同时各种破坏试验的降解产物、空白辅料、空白溶剂（包括酸 碱降解空白溶剂）对有关物质的检测无干扰，而标准YBH11152005的破坏样中的主成分、杂 质B峰均与相邻峰未分离；JP15增补版除光降解外，主成分峰与相邻最近峰均分离度均可 达1. 5 W上，但杂质B除高温分离度可达要求外，其他均不能分离检测；标准JX20090312主 成分第一峰与杂质A第二峰包合，不能分离检测，且碱降解杂质B与相邻前峰的分离较差； 综上所述，本发明提供的方法专属性好，可将主成分与杂质有效分离检测，可有效地控制阿 加曲班注射液的质量。
[0006] 本发明提供的有关物质检测方法操作步骤如下：
[0007] 照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D)测定。
[0008] 色谱条件与系统适用性用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W缓冲液（取冰醋 酸1ml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调抑值至6. 0)-甲醇巧2 : 48)为流动相；柱温为 45C;检测波长为259nm ;调整流速使阿加曲班两个色谱峰中第一个色谱峰的保留时间约为 50分钟。精密称取杂质A和阿加曲班对照品各5mg，置25ml量瓶中，加甲醇IOml使溶解， 用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性测试液，精密量取100 U 1注入液相色谱仪，记录色 谱图，杂质A的第二个色谱峰与阿加曲班第一个色谱峰的分离度应不小于1. 2。
[0009] 测定法取本品作为供试品溶液。精密量取供试品溶液Iml，置50ml量瓶中，用流动 相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置IOml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照 溶液。精密量取对照溶液IOOy 1，调节检测器灵敏度，使阿加曲班第一个色谱峰的峰高约 为满量程的10%。分别精密量取本品和对照溶液各IOOy 1，注入液相色谱仪，记录色谱图 至阿加曲班第一个色谱峰保留时间的1.4倍。供试品溶液的色谱图中如显示杂质峰，单个 杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0. 2% )，其中相对保留时间为0. 19处的色谱峰 (W阿加曲班第一个色谱峰为参比）为降解产物，计算时其峰面积应乘W校正因子2. 44,扣 除溶剂和杂质B峰后其他杂质峰面积和不得大于对照溶液主峰面积的1. 5倍（0. 3% )。
[0010] 有关物质检查方法验证研究
[0011] 1、进样精密度
[0012] 取本品作为供试品溶液，精密量取IOOy 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，重复测 定6次，计算阿加曲班的保留时间（W主成分第一峰计）与主成分两峰面积和的相对标准 偏差，结果见表1。
[0013] 表1有关物质进样精密度试验结果
[0014]
【权利要求】
1. 一种阿加曲班注射液有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以缓冲液（取冰醋酸lml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH值至 6. 0)-甲醇混合液为流动相；柱温为45°C ;检测波长为259nm ;直接精密移取阿加曲班注射 液100 μ 1进样测定。
2. 如权利要求1所述的有关物质的检测方法，其特征在于：以缓冲液（取冰醋酸lml， 稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH值至6. 0)-甲醇混合液体积组成为：缓冲液42? 62%%，甲醇 38 ?58%。
3. 如权利要求2所述的以缓冲液（取冰醋酸lml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH 值至6.0)-甲醇混合液最佳体积组成比例为52 : 48。
【文档编号】G01N30/02GK104237397SQ201310263342
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年6月21日 优先权日:2013年6月21日
【发明者】周革文, 王秋成 申请人:深圳市泛谷医药科技有限公司