一种阿加曲班注射液含量测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种阿加曲班注射液含量测定方法，采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以缓冲液(取冰醋酸1ml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH值至6.0)-甲醇混合液为流动相，柱温45℃，检测波长为259nm，流速为1ml/min；精密移取阿加曲班注射液5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取阿加曲班对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。该方法具有专属性强、操作简单、准确可靠的特点。
【专利说明】-种阿加曲班注射液含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种阿加曲班注射液含量测定方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 阿加曲班是一种合成的单价小分子直接凝血酶抑制剂，它可选择性地与凝血酶的 催化活性位点（丝氨酸-组氨酸-精氨酸）进行可逆性地结合，从而发挥竞争性的抑制作 用。与肝素和其他直接凝血酶抑制剂不同的是阿加曲班可抑制血凝块中的凝血酶。阿加曲 班的抗血栓作用不需要辅助因子抗凝血酶III。阿加曲班通过抑制凝血酶催化或诱导的反 应，包括血纤维蛋白的形成，凝血因子v、vm和XIII的活化，蛋白酶C的活化，及血小板聚 集发挥其抗凝血作用。其作用特点为：①直接灭活凝血酶（因子II a)的活性，对凝血酶的 产生没有直接作用，其作用不依赖于抗凝血酶；②不但灭活液相凝血酶，还能够灭活与纤维 蛋白血栓结合了的凝血酶；③阻断凝血瀑布的正反馈，间接抑制凝血酶的产生；④治疗剂 量下对血小板功能无影响，不导致血小板减少症；⑥具有良好的剂量-反应关系，效果和安 全性可W预测；⑧与活化部分凝血活酶时间（APTT)或者活化凝血时间（ACT)相关性良好。
[0003] 在药品生产、胆存和使用过程中，需要对产品质量进行检验W确保符合药用要求， 而要保证药品疗效最为关键的是含量一定要达到要求。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种阿加曲班注射液含量测定方法，采用高效液相色谱法，W十八焼 基娃焼键合娃胶为填充剂；W缓冲液（取冰醋酸1ml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调抑 值至6. 0)-甲醇混合液为流动相；柱温为45C;检测波长为259皿，流速为Iml/min ;精密移 取阿加曲班注射液5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取 阿加曲班对照品约12. 5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇IOml使溶解，用水稀释至刻 度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密 量取对照品溶液和供试品溶液各IOy 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法W峰 面积计算含量。
[0005] 与标准JX20090312、标准YBH11152005及JP15增补版中阿加曲班含量测定相比， 本发明提供的含量测定方法能将主峰与所有杂质峰分离检测，尤其是主成分两峰分离度可 达1左右，避免了其他几种方法由于主峰重合程度不同造成面积重视性差而带来的系统误 差，同时各破坏样品降解产物、空白辅料、空白溶剂（包括酸碱降解空白溶剂）对本含量测 定方法无干扰。综上所述，本方法专属性强，重现性好，可作为本品的含量测定方法。
[0006] 本发明提供的含量测定方法操作步骤如下：
[0007] 照高效液相色谱法测定（中国药典2010年版二部附录V D)测定。
[0008] 色谱条件与系统适用性试验用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W缓冲液（取 冰醋酸1ml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调抑值至6.0)-甲醇（42 : 58)为流动相，柱 温45°C，检测波长为259皿，流速为Iml/min。精密称取杂质A和阿加曲班对照品各5mg， 置25ml量瓶中，加甲醇IOml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性测试液，精密 移取2ml，置IOml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性测试液，精密量取 10 U 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质A的第二个色谱峰与阿加曲班第一个色谱峰的 分离度应不小于1. 2。
[0009] 测定法精密量取本品5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试 品溶液；另取阿加曲班对照品约12. 5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇IOml使溶解，用 水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照 品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各10 y 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按 外标法W峰面积计算，即得。
[0010] 含量测定方法验证研究
[0011] 1、线性研究
[001引精密称取阿加曲班对照品50. 40mg，置50ml量瓶中，加25ml甲醇使溶解并稀释至 刻度，摇匀；精密量取上述溶液2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml分别置50ml量瓶中，用流动 相稀释至刻度，摇匀，作为线性标准溶液。
[0013] 精密量取线性标准溶液各10 U 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，W峰面积对 浓度作线性回归，并绘制相应的线性关系图，结果见表1。
[0014] 阿加曲班在0. 0402?0. 1608mg/ml范围内呈线性，线性方程为y = 111. Olx-O. 0724,相关系数为 0. 9999。
[0015] 表1含量测定方法学线性试验结果
[0016]
【权利要求】
1. 一种阿加曲班注射液含量测定方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅 胶为填充剂；以缓冲液（取冰醋酸lml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH值至6. 0)-甲 醇混合液为流动相；柱温为45°C;检测波长为259nm，流速为lml/min ;精密移取阿加曲班注 射液5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取阿加曲班对照 品约12. 5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量 取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液 和供试品溶液各10 μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
2. 如权利要求1所述的有关物质的检测方法，其特征在于：以缓冲液（取冰醋酸lml， 稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH值至6. 0)-甲醇混合液体积组成为：缓冲液37? 47%%，甲醇 53 ?63%。
3. 如权利要求2所述的以缓冲液（取冰醋酸lml，稀释至400ml，用氨试液或氨水调pH 值至6.0)-甲醇混合液最佳体积组成比例为42 : 58。
【文档编号】G01N30/88GK104237430SQ201310259361
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年6月21日 优先权日:2013年6月21日
【发明者】周革文, 王秋成 申请人:深圳市泛谷医药科技有限公司