一种土壤中钩虫幼虫的分离方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于土壤中钩虫幼虫的分离方法，包括以下步骤：安装分离装置，将土样放入；将装有土样的分离装置放入承载容器，在承载容器中加入温度为42℃～48℃、浓度为4.8％～5.2％盐水，盐水的液面没过分离装置中筛网面上的棉纸；将承载容器放置于温度为42℃～48℃的温箱或水浴箱中，放置1.5～2小时；取出分离装置，将承载容器中的液体倒出，自然沉淀15～20分钟；倒去上清液，得到含有钩虫幼虫的沉淀液。采用本发明的技术方案，能提高钩蚴回收率，并能抑制自由线虫活性，减少沉淀液中自由线虫的数量。本发明的方法实用有效、结果可靠，同时操作简便、方便鉴别。
【专利说明】一种土壤中钩虫幼虫的分离方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用于土壤中钩虫幼虫的分离方法。
【背景技术】
[0002]寄生虫病是严重影响我国人民身体健康的重要公共卫生问题之一，而钩虫病又是其中危害较为严重的寄生虫病。钩虫的幼虫和成虫都可对人体造成严重损害。
[0003]钩虫幼虫在体外发育包括杆状蝴和丝状蝴的阶段，其中感染期幼虫为丝状蝴(以下简称钩蝴)。钩虫的生活史包括幼虫在外界土壤中的发育和在人体内的发育两个阶段。钩虫卵随感染者粪便排出体外，在温度适宜的情况下经5-6天发育成为感染期幼虫，与人体皮肤或粘膜接触后进入人体，随后经在肺泡、支气管、小肠等不同组织器官中发育成为成虫。人们使用新鲜的粪便施肥或随地大便，使得钩虫卵在适宜的环境条件下发育成感染期幼虫。
[0004]根据钩虫生活史，土壤钩蝴污染情况可作为人群钩虫感染监测工作的一项重要指标。2011年全国土源性线虫病(主要指钩虫病、蛔虫病、鞭虫病)监测方案中已将土壤钩蝴污染情况纳入监测内容中。
[0005]20世纪90年代起，针对土壤钩蝴调查的方法主要有纱垫法、铜丝筛分离法、5%盐水分离法、棉纸自来水分离等方法。这些方法操作复杂、费时。由于土壤中自由生活的线虫(以下简称自由线虫)较多，棉纸自来水分离法不能有效去除自由线虫。5%盐水分离方法虽然在一定程度上抑制了自由线虫的活力，但在分离用纸和筛网规格上各地区各不相同。同时，实验中发现部分土壤样本分离后沉淀液中存在絮状沉淀的现象。
[0006]目前的分离方法均具有不足之处。因此，需要一种准确、便捷、适合现场监测工作的土壤中钩虫幼虫的分离方法。
【发明内容】
[0007]为此，本发明所要解决的技术问题是提供一种结果可靠、操作简便、方便鉴别的土壤中钩虫幼虫的分离方法，以克服现有技术存在的不足。
[0008]为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案:
[0009]一种土壤中钩虫幼虫的分离方法，包括以下步骤:
[0010]安装分离装置，将土样放在分离装置中的棉纸上；
[0011]将装有土样的分离装置放入承载容器，在承载容器中加入温度为42°C?48°C、浓度为4.8%?5.2%盐水，盐水的液面没过分离装置中筛网面上的棉纸；
[0012]将承载容器放置于温度为42V?48°C的温箱或水浴箱中，放置1.5?2小时；
[0013]取出分离装置，将承载容器中的液体倒出，将液体自然沉淀15?20分钟；
[0014]倒去上清液，得到含有钩虫幼虫的沉淀液。
[0015]采用上述的分离方法，所述分离装置中筛网面的目数为10?30目。
[0016]采用上述的分离方法，所述棉纸的厚度为38?40 μ m,密度为12.8?16.0g/m2,所述棉纸的使用层数为3层。
[0017]采用上述的分离方法，所述土样采自于早上十点前且近期未喷过杀虫剂的表层2?3cm的土壤。
[0018]采用上述的分离方法，将承载容器在温箱或水浴箱中放置1.5小时。
[0019]采用上述的分离方法，将承载容器中的液体倒出后自然沉淀15分钟。
[0020]采用上述的分离方法，所述沉淀液为50ml。
[0021]采用上述技术方案，本发明的分离方法能使钩蝴回收率提高，并能抑制自由线虫活性，减少或去除沉淀液中自由线虫的数量。此外，本发明的分离方法操作简便、方便鉴别。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明进行详细说明:
[0023]图1为本发明分离方法的流程图。
【具体实施方式】
[0024]分离土壤中的钩虫幼虫，采用以下分离方法:
[0025]早上10点前选取近期未喷过杀虫剂的土壤采样点，用土铲取土壤表层2?3cm土样，在500ml塑料烧杯中定量至300ml刻度处(约300g)后放入保鲜袋；
[0026]组装好分离装置，在分离装置中的棉纸上倒入300g 土样，用大镊子将颗粒较大的土压细，去除石子、草等杂质后，将土铺展均匀；
[0027]将装有土样的分离装置放入承载容器中，并在容器中加入温度为42°C?48°C、浓度为4.8%?5.2%的盐水，盐水的液面没过分离装置中筛网面上方的棉纸即可，筛网面的目数为10?30目；
[0028]将承载容器置于温度为42V?48°C的温箱或水浴箱中，放置1.5小时；
[0029]取出分离装置，将承载容器中的液体倒入三角量杯，自然沉淀15分钟；
[0030]缓缓弃去上清液(倾倒过程不要让液体回流),倾倒至底部留50ml液体；
[0031]将液体混匀，连同全部沉淀物倒入平皿，解剖镜下进行观察后，显微镜下鉴别钩蝴。
[0032]如果分离后沉淀中含有絮状沉淀不便观察，应采取如下步骤进行第二次分离:
[0033]将分离装置放入承载容器，在容器中加入温度为42°C?48°C、浓度为4.8%?5.2%的盐水，至盐水的液面没过分离装置中筛网面的棉纸为止。
[0034]在分离装置中倒入第一次分离后的全部沉淀液，将承载容器置42°C?48°C温箱或水浴箱中，放置20min (无需泥土)。
[0035]取出分离装置，将承载容器中的液体倒入三角量杯，自然沉淀15分钟。
[0036]缓缓弃去上清液(倾倒过程不要让液体回流),倾倒至底部留50ml液体。
[0037]将液体混匀，连同全部沉淀物倒入平皿，解剖镜下进行观察后，显微镜下鉴别钩蝴。
[0038]本发明的分离方法，所述的棉纸选定以树皮、棉花作为纸浆材料，采用传统手工利记博彩app制造，具体参数见表I。
[0039]表I棉纸参数规格范围
【权利要求】
1.一种分离土壤中钩虫幼虫的分离方法，包括以下步骤: 安装分离装置，将土样放在分离装置中的棉纸上； 将装有土样的分离装置放入承载容器，在承载容器中加入温度为42°c~48°C、浓度为4.8%~5.2%盐水，盐水的液面没过分离装置中筛网面上的棉纸； 将承载容器放置于温度为42°C~48°C的温箱或水浴箱中，放置1.5~2小时； 取出分离装置，将承载容器中的液体倒出，自然沉淀15~20分钟； 倒去上清液，得到含有钩虫幼虫的沉淀液。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述分离装置中筛网面的目数为10~30目。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述棉纸的厚度为38~40μ m，密度为 12.8 ~16.0g/m2。
4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述棉纸的使用层数为3层。
5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述土样采自于早上十点前且近期未喷过杀虫剂的表层2~3cm的土壤。
6.根据权利要求1 所述的分离方法，其特征在于将承载容器在温箱或水浴箱中放置1.5小时。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于将承载容器中的液体倒出后自然沉淀15分钟。
8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述沉淀液为50ml。
【文档编号】G01N1/34GK104020034SQ201310064485
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2013年3月1日 优先权日:2013年3月1日
【发明者】王国飞, 陈颖丹, 王聚君, 周长海 申请人:中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所