一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用，所述提取物由以下方法制备：灰毡毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的溶剂，将残渣用乙醇回流提取，提取液浓缩，然后用乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物。经过体外试验，发现本发明提供的灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物可抑制EGFR激酶活性，效果明显，即可抗皮肤肿瘤、白血病、结肠癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤。
【专利说明】一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药提取物，具体涉及一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]灰租毛忍冬是忍冬科植物灰租毛忍冬Lonicera macranthoidesHand.-Mazz的干燥花蕾或带初开的花，2010年版中国药典将其与红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、华南忍冬Lonicera Confusa DC.、黄褐毛忍冬Lonicera fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或带初开的花一同列入山银花项下。
[0003]灰毡毛忍冬具有清热解毒，疏散风热之功效，主要分布于我国贵州、四川、湖南、广西、福建等地。化学成分主要有酚酸类、黄酮类、皂苷类等。酚酸类化合物主要为咖啡酸(caffeic acid),绿原酸(chlorogenic acid)等；黄酮类化合物主要为木犀草素(Iuteolin)和槲皮素(quercetin)及其苷类；皂苷类主要为灰毡毛忍冬次皂苷乙(macranthoside B)和川续断阜苷乙(dipsacoside B)。具有抗菌、抗炎、调节免疫等药理作用。
[0004]关于灰毡毛忍冬的提取物方面，有如下报道:
[0005]CN200610046198.2公开了一种含忍冬藤提取物的药物的制备方法，具体为:取1000g忍冬藤药材，第一次加10 - 12倍量水煎煮I 一 2小时，第二次加6-8倍量水煎煮I小时，合并滤液，过滤，浓缩至每1ml相当于原生药量0.5-1.0g的提取液备用。2.纯化:取上述制备好的忍冬藤提取液用离心机高速离心，取离心液用聚酰胺柱吸附，先用水洗至流出液无色，再用3-6倍柱体积量50-80%乙醇洗脱，合并乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至每1ml相当于原生药0.5-1.0g，用截留分子量I万-3万的超滤膜超滤，超滤液减压浓缩并干燥，得到忍冬藤纯化提取物。
[0006]CN200810235536.6公开了一种山银花提取物，该提取物的主要成分为灰毡毛忍冬次皂苷乙、灰毡毛忍冬次皂苷甲、3-0-a -L-吡喃鼠李糖基(l-2)-a -L-吡喃阿拉伯糖基一常春藤皂苷元和3-0- β -D-吡喃葡萄糖基(1-4) - β -D-吡喃葡萄糖基(1-3) - a -L-吡喃鼠李糖基(1-2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基一齐墩果酸。以及该类化合物的制备方法，和其在癌症方面的应用。该产品的制备方法是所述癌症为肝癌、肺癌、子宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、腹水癌、前列腺癌、骨癌或白血病等。
[0007]尚未见到灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物及其应用的报道。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
[0009]本发明提供的一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物，由以下方法制备:灰毡毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的溶剂，用乙醇回流提取，提取液浓缩，然后用乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物。[0010]优选地，所述灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:取灰毡毛忍冬粉碎，用灰毡毛忍冬重量3-8倍体积的石油醚浸泡12_36h，用石油醚渗滤，得到灰毡毛忍冬重量3-7倍体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后将残渣用灰毡毛忍冬重量3-7倍量体积的浓度为60-90%的乙醇提取2次，每次1-2小时，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得乙醇浓缩液，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得乙酸乙酯提取物。
[0011]进一步优选，所述灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:取灰毡毛忍冬粉碎，用灰毡毛忍冬重量3-5倍体积的石油醚浸泡18_30h，用石油醚渗滤，得到灰毡毛忍冬重量5-7倍体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后将残渣用灰毡毛忍冬重量3-5倍量体积的浓度为70-85%的乙醇提取2次，每次1-2小时，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得乙醇浓缩液，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得乙酸乙酯提取物。
[0012]更进一步优选，所述灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:取灰毡毛忍冬粉碎，用灰毡毛忍冬重量3倍体积的石油醚浸泡24h，用石油醚渗滤，得到灰毡毛忍冬重量5倍体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后将残渣用灰毡毛忍冬重量3倍量体积的浓度为80%的乙醇提取2次，每次2小时，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得乙醇浓缩液，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得乙酸乙酯提取物。
[0013]本发明还提供了一种制备上述灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物的方法，该方法包括以下步骤:灰毡毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的溶剂，将残渣用乙醇回流提取，提取液浓缩，然后用乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
[0014]本发明还提供了含上述灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物的制剂，由所述提取物单独制成或由该提取物和药学上可接受的载体组成。
[0015]所述制剂为散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。
[0016]所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。
[0017]所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖等;
[0018]所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、淀粉、水、糊精、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等;
[0019]所述崩解剂选自微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠；
[0020]所述润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁；
[0021]所述助悬剂选自微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇；
[0022]所述润湿剂选自甘油、吐温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂；
[0023]所述溶剂选自乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油等；
[0024]所述表面 活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、月旨肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等；
[0025]所述矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、柠檬酸或糖精钠。
[0026]本发明还提供了灰毡毛忍冬的乙酸乙酯的检测方法，是用超高效液相色谱-四极杆联合飞行时间串联质谱分析方法(UPLC/Q-T0F-MS分析方法)以获得提取物的指纹图谱。其色谱分析条件为:WatersACQUITY UPLCtmBEH C18Column (50mmX 2.lmm.1 cL，L 7 μ m)色谱柱；二元梯度洗脱，A相为0.4%甲酸水溶液，B相为乙腈，流速0.4mL/min ;进样量3 μ L。质谱条件为电喷雾离子源，正离子模式检测。
[0027]优选地，所述色谱条件:WatersACQUITY UPLCtmBEH C18Column(50mmX2.lmm.1 d.，1.7 μ m)柱；二元梯度洗脱见下表，其中A相为0.4%甲酸水溶液，B相为乙腈，流速0.4mL/min ;进样量 3 μ I,
【权利要求】
1.一种灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述提取物由以下方法制备:灰毡毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的溶剂，将残渣用乙醇回流提取，提取液浓缩，然后用乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，提取物由以下方法制备:取灰毡毛忍冬粉碎，用灰毡毛忍冬重量3-8倍体积的石油醚浸泡12-36h，用石油醚渗滤，得到灰毡毛忍冬重量3-7倍体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后将残渣用灰毡毛忍冬重量3-7倍量体积的浓度为60-90%的乙醇提取2次，每次1-2小时，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得乙醇浓缩液，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得乙酸乙酯提取物。
3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述提取物由以下方法制备:取灰毡毛忍冬粉碎，用灰毡毛忍冬重量3-5倍体积的石油醚浸泡18-30h，用石油醚渗滤，得到灰毡毛忍冬重量5-7倍体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后将残渣用灰毡毛忍冬重量3-5倍量体积的浓度为70-85%的乙醇提取2次，每次1-2小时，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得乙醇浓缩液，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得乙酸乙酯提取物。
4.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物由以下方法制备:取灰毡毛忍冬粉碎，用灰毡毛忍冬重量3倍体积的石油醚浸泡24h，用石油醚渗滤，得到灰毡毛忍冬重量5倍体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后将残渣用灰毡毛忍冬重量3倍量体积的浓度为80%的乙醇提取2次，每次2小时，合并两次提取液，浓缩至无醇味，得乙醇浓缩液 ，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得乙酸乙酯提取物。
5.一种制备权利要求1-4任一项所述的提取物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤:灰毡毛忍冬用石油醚浸泡，然后用石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的溶剂，将残渣用乙醇回流提取，提取液浓缩，然后用乙酸乙酯萃取，收集上层清液，即得灰毡毛忍冬的乙酸乙酯提取物。
6.含权利要求1-4任一项所述的提取物的制剂，其特征在于，该制剂由所述提取物单独制成或由所述提取物和药学上可接受的载体组成。
7.权利要求1-4任一项所述的提取物的检测方法，其特征在于，该方法是用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析以获得提取物的指纹图谱。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，该方法的色谱分析条件为=WatersACQUITY UPLCtmBEH C18 Column (50mmX 2.lmm.1d.，1.7μπι)色谱柱；二元梯度洗脱，A 相为.0.4%甲酸水溶液，B相为乙腈，流速0.4mL/min ;进样量3 μ L ;质谱条件为电喷雾离子源，采用正离子模式检测。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，色谱条件为:WatersACQUITYUPLCtmBEH C18 Column (50mmX 2.lmm.1d.，1.7μπι)色谱柱；二元梯度洗脱见下表，A 相为.0.4%甲酸水溶液，B相为乙腈，流速0.4mL/min ;进样量3 μ L，
10.权利要求1-4任一项所述的提取物或权利要求6所述制剂在制备皮肤肿瘤、白血病、结肠癌、肝癌、胃癌、乳腺癌的药物中的应用。
【文档编号】G01N30/36GK103908482SQ201210591366
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2012年12月28日 优先权日:2012年12月28日
【发明者】陈士林, 黄林芳, 林森森, 任伟光, 卞兆祥, 徐宏喜, 杨大坚, 陈新滋 申请人:中国医学科学院药用植物研究所, 香港浸会大学