专利名称：：优化液相色谱系统中的梯度的方法
技术领域：
：本发明涉及为液相色谱(LC)系统中的成分分离确定一个或多个优化梯度参数值(optimumgradientparameter)的方法。本发明涉及能够为液相色谱柱中成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的液相色谱(LC)系统。
背景技术：
：现有技术中公开了一些优化液相色谱系统中成分分离的方法。例如参见P.Jandera,JournalofChromatographyA,1126,195-218(2006),禾口P·Jandera,JournalofChromatographyA,797，11-22(1998)。此外，还有许多可商购的优化软件包，包括但不限于DRYLAB软件(Rheodyne,RohnertPark,CA),CHR0MDREAM软件(IrisTechnologies,Lawrence,ΚΑ),CHR0MSW0RD软件(IrisTechnologies,Lawrence,ΚΑ),和ELUEX软件(CompuDrugChemistryLtd.(Budapest,Hungary)。这些系统或软件包不是完全自动化的且不能在液相色谱系统中提供精确、高效、可预测和快速的级分收集。在本领域存在对为液相色谱(LC)系统中成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的方法的需要。另外，在本领域存在对能够为液相色谱柱中成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的液相色谱(LC)系统的需要。
发明内容本发明涉及为液相色谱(LC)系统中成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的方法。所述一个或多个优化梯度参数值可以包括但不限于起始梯度溶剂体积浓度值、终止梯度溶剂体积浓度值、梯度持续时间周期长度(lengthofagradientdurationperiod)、及其组合。一个或多个所述优化梯度参数值在给定液相色谱(LC)系统中的使用可以提供一个或多个潜在的好处。潜在的好处包括但不限于在最短的时间段内分离成分、使用更少的溶剂分离成分、更好地分离成分、给定液相色谱(LC)系统提高的生产率、降低的分离成本、及其组合。在一个示例实施方案中，所述为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离利用保留数据(retentiondata)估算两个或更多个可洗脱的(elutable)化合物的容量因子(capacityfactor),k’s，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度；和利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值(optimumcapacityfactorvalue),k。pt，为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。所述溶剂体积浓度可以是指多组分溶剂的组合，如含0.1%的trifluoricacid的乙腈、含水缓冲液等。用于第一溶剂体积浓度中的溶剂不必与用于第二溶剂体积浓度中的那些相同，例如己烷/乙酸乙酯用于第一而氯仿/甲醇用于第二。可利用任何保留数据，包括但不限于来自技术如薄层色谱、液相色谱、体积排阻色谱、超临界流体色谱、模拟移动床17色谱(simulatedmovingbedchromatography)、毛细管电泳色谱等的任何普通模式的保留数据。这些技术的普通模式包括离子交换、反相、正相、亲合、体积排阻、电动性等等。此夕卜，在本发明中可以使用任何液相色谱方法来分离成分，包括但不限于上面所列的那些。在另一示例实施方案中，为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；和利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。在另一示例实施方案中，为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积。在一个示例实施方案中，所述利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子的步骤包括使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在又另一示例实施方案中，为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括利用色谱保留数据(chromatographyretentiondata)估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离石角定⑴起始梯度溶剂体禾只浓度值(startgradientsolventvolumeconcentrationvalue)，禾口(ii)终止梯度溶齐[J体积、浓度值(endgradientsolventvolumeconcentrationvalue)；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积(retentionvolume)和所述可洗脱的化合物之间的分辨率(resolution)。在一个示例实施方案中，所述利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子的步骤包括使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在另一示例实施方案中，可通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。在另一示例实施方案中，通过变化梯度溶剂持续时间体积(gradientsolventdurationvolume)来重新计算所述分辨率。在一个示例实施方案中，在色谱分离单元中存在使用软件的计算系统，其中在完成分辨率计算之后，梯度参数值(时间和浓度表(timesandconcentrationstable))被自动提供给所述色谱单元或用户以用于所述化合物的分离。在另一示例实施方案中，为液相色谱分离可洗脱的化合物确定一个或多个梯度参数值的方法可以由色谱分离单元中的使用软件的计算系统(computingsystem)执行，其中在用户向所述计算系统输入所述可洗脱的化合物的一个或多个特性后，所述计算系统向用户提供推荐的色谱方法类型、色谱介质(chromatographymedia)、色谱柱尺寸和色谱溶剂(chromatographysolvents)以用于分离所述可洗脱的化合物。在又另一示例实施方案中，使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法包括将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入色谱分离单元中的计算系统，利用所述计算系统产生梯度参数值，将所述梯度参数值自动提供给所述色谱分离单元或用户，和分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。在又另一示例实施方案中，使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法包括将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入液相色谱系统中的计算系统；利用计算系统产生推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和利用所述计算系统产生梯度参数值。在另一示例实施方案中，所述使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法还可以包括将所述梯度参数自动提供给所述液相色谱系统或用户；和分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。在另一示例实施方案中，使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法包括将所述可洗脱的化合物的色谱保留数据输入液相色谱装置中的计算系统；利用所述计算系统估算所述两个或更多个可洗脱化合物的容量因子；利用所述计算系统确定使用所述估算的容量因子是否所述两个或更多个可洗脱的化合物将不会分离；利用所述计算系统产生至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和利用所述至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂来分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。在某些示例实施方案中，所述为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括在薄层色谱板上分离样品，所述样品包括两个或更多个可洗脱的化合物和具有第一溶剂体积浓度的溶剂体系；在另一薄层色谱板上分离相同的样品，使用具有第二溶剂体积浓度的溶剂系统，其中所述第二溶剂体积浓度大于所述第一溶剂体积浓度；为样品内的所述两个或更多个可洗脱的化合物中的每一种计算容量因子，k’S，其中每个k=(I-Rf)/Rf,&表示给定的可洗脱的化合物在给定溶剂体系中的保留因子(retentionfactor)；利用所述容量因子，k’s，及所述第一和第二溶剂体积浓度来确定选自k=!^φ"'(I丨.:41丨系统(normalphasesystem))禾口Ink=a-mψ(反相系统(reversephasesystem))的至少一个公式中的参数⑴1和m，或(ii)a和m；和使用最佳容量因子值，k。pt，及参数⑴kQ和m，或(ii)a和m在选自φ=[(kQ/k。pt)Vm](正相系统)和爭=[(a-Ink。pt)/m](反相系统)的至少一个公式中分别计算初始的(initial)起始和终止梯度溶剂体积浓度值，Ψis和Ψie。所述为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的示例方法可以，根据需要，进一步包括一些额外的步骤来为给定液相色谱分离确定优化梯度参数值。在某些示例实施方案中，额外的步骤包括但不限于启动梯度持续时间周期调整过程、启动起始梯度溶剂体积浓度调整过程、启动终止梯度溶剂体积浓度调整过程或其任思组合。本发明还涉及能够将输入的保留数据(例如，来自薄层色谱、液相色谱、尺寸排阻色谱、超临界流体色谱、模拟移动床色谱、毛细管电泳色谱等的数据)换算成一个或多个优化的梯度参数值，并将所述一个或多个优化的梯度参数值提供给用户显示器和/或液相色谱分离单元的液相色谱(LC)优化软件。在一个示例实施方案中，所述LC优化软件将输入的呈&值形式(每个成分，在两个单独的TLC板上使用两个不同的溶剂浓度洗脱)的TLC数据转换成每种可洗脱的化合物在所述两个不同的溶剂体积浓度的计算的容量因子，k's；和利用所计算的保留因子结合最佳容量因子值，k。pt，为液相色谱系统成分确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。所述LC优化软件可被用于提供优化的梯度持续时间周期、优化的起始梯度溶剂体积浓度、优化的终止梯度溶剂体积浓度、或其任意组合。本发明又还涉及包括计算系统和与所述计算系统的用户界面的液相色谱系统，其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算至少两种可洗脱的化合物在两个不同的溶剂体积浓度的容量因子，k’S;和利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值，k。pt，来确定优化的梯度持续时间周期、优化的起始梯度溶剂体积浓度、优化的终止梯度溶剂体积浓度、或其任意组合。在一个实施方案中，所述计算系统能够使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离利用所述色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在某些示例实施方案中，所述液相色谱系统能够向用户提供液相色谱分离的一个或多个分离参数值，且包括计算系统和与所述计算系统的用户界面，其中所述计算系统能够提供利用保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，k’s；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值，k。pt，为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和将(i)所述起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)所述终止梯度溶剂体积浓度值提供给用户以供核查。在一个实施方案中，所述计算系统能够使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离利用所述色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在一个示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；和利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。在一个实施方案中，所述计算系统能够使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离利用所述色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在一个示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统和与所述计算系统的用户界面，其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算每个可洗脱的化合物的保留体积。在一个实施方案中，所述计算系统能够使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离利用所述色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在另一示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统和与所述计算系统的用户界面，其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。在一个实施方案中，所述计算系统能够使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离利用所述色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在一个实施方案中，可通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。在另一示例实施方案中，通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。在一个示例实施方案中，在色谱分离单元中存在使用软件的计算系统，其中在完成分辨率计算之后，梯度参数值(时间和浓度表)被自动提供给所述色谱单元或用户以用于所述化合物的分离。在另一示例实施方案中，液相色谱系统能够使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物，能够由所述计算系统执行为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值，和能够在用户将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入所述计算系统之后向用户提供推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。在一个示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物；(b)由所述计算系统执行为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值；和(C)将所述梯度参数自动提供给色谱系统或用户。在另一示例实施方案中，液相色谱系统能够使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物，能够由所述计算系统执行为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值，和能够将所述梯度参数自动提供给所述色谱系统或用户。在一个示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物；(b)利用所述计算系统产生至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；以及(c)利用所述计算系统为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值。在一个示例实施方案中，所述计算系统能够通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。在另一示例实施方案中，所述计算系统能够通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。在又另一示例实施方案中，液相色谱系统能够使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物，能够由所述计算系统执行为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值，能够将所述梯度参数自动提供给色谱系统或用户，和能够利用所述计算系统产生推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。在一个示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物；(b)由所述计算系统执行为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值；和(c)在用户将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入所述计算系统之后向用户提供推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。在一个示例实施方案中，液相色谱系统包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到计算系统中的可洗脱的化合物的保留数据利用所述计算系统估算所述两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；(b)利用所述计算系统确定使用所述估算的容量因子是否所述两个或更多个可洗脱的化合物将不分离；(c)利用所述计算系统产生至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和(d)利用所述至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂来分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。本发明的液相色谱系统可以进一步包括液相色谱分离单元，所述液相色谱分离单元包括液相色谱柱、级分收集器和液相色谱分离单元软件，其中所述液相色谱分离单元软件在操作上适合从所述计算系统接收一个或多个所述优化的工艺参数以高效地处理给定的LC样品。本发明还涉及其上存储有用于执行所公开的为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法的计算机可执行指令的计算机可读介质。所述计算机可读介质可被用于将所述计算机可执行指令加载到能够执行所述计算机可执行指令的计算系统上。在阅读以下对公开的实施方案的详细说明和附加的权利要求书之后，本发明的这些及其它特征和优点将变得显而易见。图1显示了根据本发明的能够向用户提供一个或多个梯度参数值的示例液相色谱(LC)系统的示意图2图示了一个示例液相色谱(LC)分离的起始梯度溶剂体积浓度、终止梯度溶剂体积浓度和梯度持续时间周期；图3显示了用于示例薄层色谱(TLC)分离的示例薄层色谱(TLC)保留因子测量；图4-6显示了根据本发明为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的示例方法的流程图7显示了根据本发明用于启动起始梯度溶剂体积浓度调整过程的示例方法步骤的流程图8显示了根据本发明用于启动终止梯度溶剂体积浓度调整过程的示例方法步骤的流程图9显示了根据本发明利用用户选择的“速度程序(speedprocess)“模式为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的示例方法的流程图；图10显示了根据本发明利用用户选择的“纯度程序(purityprocess)"或“纯度程序(purityprocess)"模式为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的示例方法的流程图11和12显示了根据本发明为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的示例方法的流程图13图示了使用实施例1所述的本发明的优化的梯度过程进行的实际成分分离；图14图示了使用实施例2所述的本发明的优化的梯度过程进行的实际成分分离；图15图示了使用实施例3所述的本发明的优化的梯度过程进行的实际成分分离；图16图示了使用实施例4所述的本发明的优化的梯度过程进行的实际成分分离；和图17图示了使用实施例5所述的本发明的优化的梯度过程进行的实际成分分离。具体实施例方式为促进对本发明原理的理解，下面给出了对本发明的具体实施方案的说明并使用了特定语言来描述所述具体实施方案。但应当理解，特定语言的使用并不意在限制本发明的范围。对所讨论的本发明的原理的变化、进一步改进、以及这类进一步应用被认为对于本领域技术人员来说将是显而易见的。必须注意，除非文中清楚地另外指出，在这里和在所附的权利要求书中使用的单数形式“a”、“an”和“the”都包括复数所指事物。因此，例如，提及“a溶剂”时包括多种这样的溶剂，并且提及“溶剂”时包括提及一种或多种溶剂以及本领域技术人员所知的其等同物，等等。在描述本公开的实施方案中所采用的修饰例如组合物中成分的量、浓度、体积、处理温度、处理时间、收率或产率、流速以及类似的值及其范围的“约”是指可能存在的数量上的变化，例如，由于典型的测量和处理过程；由于在这些过程中不注意的误差；由于用于实施所述方法的成分的差异；以及类似的近似考虑。术语“约”还包括由于具有特定起始浓度或混合物的配方老化造成的量的差异，和由于混合或处理具有特定起始浓度或混合物的配方造成的量的差异。无论是否用术语“约”修饰，这里所附的权利要求都包括了与这些量等同的量。在本文中，术语“色谱“是指物理分离方法，在所述方法中要被分离的成分被在两个相之间分配，其中一个是固定的(固定相)而另一个(流动相)在一定的方向移动。在本文中，术语"色谱保留数据"是指与被分析物(例如目标物质或可洗脱的化合物)在固定相等之上的保留有关的信息，包括但不限于保留时间、保留体积、每种可洗脱成分的&值、溶剂组成和浓度、板类型、固定相等等。在本文中，术语“流体“是指气体、液体和超临界流体。在本文中，术语"梯度参数值"是指与用于液相色谱(LC)系统中成分分离的溶剂梯度有关的值。梯度参数值可以包括但不限于起始梯度溶剂体积浓度值、终止梯度溶剂体积浓度值、梯度持续时间周期长度、其它梯度溶剂浓度值、及其组合。在本文中，术语“液相色谱“是指通过使溶解在“流动相“中的流体混合物通过包含固定相的柱来分离混合物，其将被分析物(即，目标物质)与混合物中的其它分子分离并使其被分开。液相色谱方法可以包括但不限于重力流动、低压、中压、高压、超高压、制备(prep)、生产(process)等。在本文中，术语“特性“是指可不破坏化合物的化学组成测得的所述化合物的化学和物理特性。例如，可洗脱的化合物的特性包括那些决定色谱分离条件的特性如可溶性、极性、电荷、反离子、亲合力、PH、离解常数、络合特性、分子大小、偶极矩、电负性(electronegativity)、化学结构等。在本文中，术语"固定相"是指固定在柱或管中的材料，其在混合物的流动相分离中通过使溶解在“流动相“中的流体混合物通过包含固定相的柱来从样品中有选择地吸附被分析物，其将待测量的被分析物与混合物中的其它分子分离并使其被分开。在本文中，术语“基本上(substantially)”是指在合理的量之内，但包括从绝对值变化约0%到约50%、约0%到约40%、约0%到约30%、约0%到约20%、或约0%到约10%的量。本发明涉及为液相色谱(LC)系统中的成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的方法。本发明还涉及能够为给定液相色谱分离而向用户提供一个或多个梯度参数值的液相色谱(LC)系统。图1中提供了一个根据本发明能够向用户提供一个或多个梯度参数值的示例液相色谱(LC)系统的示意图。如图1所示，示例液相色谱(LC)系统10包括LC方法优化器部件11，其从用户(未显示)接收数据13，处理数据13，并向LC系统系统部件12和通过用户界面如显示屏(未显示)向用户(未显示)提供一个或多个梯度参数值14。然后所述LC系统部件12执行实际样品的分离并通过用户界面如显示屏(未显示)向用户(未显示)提供分离结果15。下面提供了对示例方法和液相色谱(LC)系统的进一步说明。I、为LC系统确定优化的梯度参数值的方法
技术领域：
：本发明涉及为液相色谱(LC)系统中的成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的方法。所述一个或多个优化梯度参数值可以包括但不限于起始梯度溶剂体积浓度值、终止梯度溶剂体积浓度值、梯度持续时间周期长度及其组合。图2图示了可使用本发明的方法优化的几个参数。如图2所示，图表20显示了如线24所示在LC分离期间梯度溶剂体积浓度值的变化。在时间0，梯度溶剂体积浓度包括起始梯度溶剂体积浓度值21。在大于0的时间，该梯度溶剂体积浓度值进入梯度持续时间周期23，在此期间梯度溶剂体积浓度值升高到终止梯度溶剂体积浓度值22。在本发明的某些实施方案中，所公开的方法确定起始梯度溶剂体积浓度值21、终止梯度溶剂体积浓度值22和梯度持续时间周期23的长度以优化成分的洗脱，同时在分离期间保持期望的分辨率水平。在另一示例实施方案中，为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；和利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。在一个实施方案中，所述色谱保留数据是使用薄层色谱法获得的。在另一示例实施方案中，所述利用所述色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子的步骤包括(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在一个示例实施方案中，所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值可被用于计算每个可洗脱的化合物的保留体积。在另一示例实施方案中，所述每个可洗脱的化合物的保留体积被用于计算各个可洗脱的化合物之间的分辨率在另一示例实施方案中，所述方法包括如果没有达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率则启动梯度持续时间调整过程。所述梯度持续时间调节可以包括(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在另一示例实施方案中，所述方法进一步包括启动起始梯度溶剂浓度调整过程。所述起始梯度溶剂浓度调整过程可以包括(a)降低起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在另一示例实施方案中，所述方法进一步包括启动终止梯度溶剂浓度调整过程。所述终止梯度溶剂浓度调整过程可以包括(a)降低终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在又另一示例实施方案中，为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算可洗脱的化合物保留体积。在一个示例实施方案中，所述利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子的步骤包括使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在另一示例实施方案中，所述每个可洗脱的化合物的保留体积被用于计算各个可洗脱的化合物之间的分辨率。在另一示例实施方案中，所述方法包括如果没有达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率则启动梯度持续时间调整过程。所述梯度持续时间调节可以包括(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在另一示例实施方案中，所述方法进一步包括启动起始梯度溶剂浓度调整过程。所述起始梯度溶剂浓度调整过程可以包括(a)降低起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(C)。在另一示例实施方案中，所述方法进一步包括启动终止梯度溶剂浓度调整过程。所述终止梯度溶剂浓度调整过程可以包括(a)降低终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(C)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在又另一示例实施方案中，为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法包括利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。在一个示例实施方案中，所述利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子的步骤包括使用(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。在一个实施方案中，可通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。在另一示例实施方案中，通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。在另一示例实施方案中，所述方法包括如果没有达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率则启动梯度持续时间调整过程。所述梯度持续时间调节可以包括(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在另一示例实施方案中，所述方法进一步包括启动起始梯度溶剂浓度调整过程。所述起始梯度溶剂浓度调整过程可以包括(a)降低起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在另一示例实施方案中，所述方法进一步包括启动终止梯度溶剂浓度调整过程。所述终止梯度溶剂浓度调整过程可以包括(a)降低终止梯度溶剂体积浓度到减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为各个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(C)确定是否达到各个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。在一个示例实施方案中，在色谱分离单元中存在使用软件的计算系统，其中在完成分辨率计算之后，梯度参数值(时间和浓度表)被自动提供给所述色谱单元或用户以用于所述化合物的分离。在一个示例实施方案中，本发明的方法利用色谱保留数据(例如薄层色谱保留数据)来为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值。在示例方法中，薄层色谱法数据(例如，每个可洗脱成分的&值、溶剂组成和浓度、以及板种类)被用于计算至少两种可洗脱的化合物在两个不同溶剂体积浓度的容量因子，k’s，其中每个k=(I-Rf)Rf,Rf表示给定化合物在给定溶剂体系中的保留因子。这类薄层色谱法数据被示于图3中。如图3所示，示例薄层色谱(TLC)数据30包括用于使用(1)第一溶剂组成值φi(试验31)和(第二溶剂组成值φ2(试验32)的示例薄层色谱(TLC)板试验31和32的保留因子测量34。如下面进一步讨论的那样，所计算的保留因子(即图3所示的Rf\,t，Rf1,b，Rf2,t和Rf2,b)被随后结合最佳容量因子值，k。pt，用于为液相色谱系统部件(例如图1所示的LC系统部件1确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。尽管图3显示第二溶剂组成值大于第二溶剂组成值，但在本文中也考虑了相反情形。图4-6中显示了本发明的一个为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的示例方法。如图4所示，示例方法100始于块(block)40，并进行到步骤41，其中由用户选择TLC板的类型(例如，二氧化硅)。示例方法100从步骤41进行到步骤42，其中由用户选择待分离的样品。该样品由两个或更多个可洗脱的成分组成。示例方法100从步骤42进行到步骤43，其中样品使用具有体积浓度值f工的第一溶剂混合物在TLC板上操作。示例方法100从步骤43进行到步骤44，其中样品使用具有体积浓度值f2的第二溶剂混合物在另一个TLC板上操作，其中φ2不同于華10示例方法100从步骤44进行到步骤45，其中用户为所述两种溶剂混合物中的每一种内的所述两个或更多个可洗脱的成分中的每一个计算保留因子，Rf。示例方法100从步骤45进行到步骤46，其中用户选择柱，其具有(i)期望的尺寸和(ii)与前面使用的TLC板相似的类型(例如，二氧化硅)。示例方法100从步骤46进行到步骤47，其中用户向LC优化器11中输入数据。输入的数据可以包括但不限于由用户计算的保留因子Rf；柱的类型(例如，正相、反相等等)；柱的尺寸；流速；以及在两个前面的TLC操作期间使用的第一和第二溶剂体积浓度值V1和$2。LC优化器11由所计算的保留因子Rf计算容量因子，k，其中k=(I-Rf)/Rf，Rf表示给定可洗脱化合物在第一和第二溶剂混合物中的每一个之内的保留因子。示例方法100从步骤47进行到块48，其中示例方法100进行到图5所示的块49示例方法100从块49进行到判定块(decisionblock)50。在判定块50，由LC优化器11基于步骤47中输入的数据做出决定，即将到来的液相色谱操作(即在图1所示的LC系统部件12中)是以正相操作还是以反相操作进行。如果在判定块50做出决定-即将到来的液相色谱操作将以正相操作进行，则示例方法100进行到步骤51，其中使用公式k=!^φΛ来自步骤47的所计算的容量因子，k，和在步骤47中输入的第一和第二溶剂体积浓度来拟合(fitted)参数kQ和m。换句话说，在步骤51，LC优化器11使用公式k=kQ(p_m执行所计算的k值和输入的溶剂体积浓度值的线性最小二乘法拟合(linearleastsquaresfit)，以为每种可洗脱的成分获得参数Ictl和m的值。示例方法100从步骤51进行到步骤52，其中由LC优化器11使用公式f=[(k0/k。pt)1/m]、前面计算的参数Ictl和m的值、和最佳容量因子值，k。pt(其可以存储在LC优化器11中或由用户在上述步骤47中输入)分别计算初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值φis和fieo在此步骤中，使用参数h和m为第一洗脱化合物计算的溶剂浓度被称作起始梯度体积浓度，φis，而使用h和m为第二洗脱化合物计算的溶剂浓度被称作终止梯度体积浓度，fieo在某些示例实施方案中，数值2.0被(i)存储在LC优化器11中或(ii)由用户选择和输入，作为最佳容量因子值，k。pt。示例方法100从步骤52进行到以下讨论的块55。如果在判定块50由LC优化器11做出决定-即将到来的液相色谱操作(即，在图1所示的LC系统部件12中)将以反相操作进行，则示例方法100进行到步骤53，其中使用公式lnk=a-mf、来自步骤47的早先计算的容量因子，k，和在步骤47中输入的第一和第二溶剂体积浓度拟合(fitted)参数a和m。换句话说，在步骤53，LC优化器11使用公式Ink=a-mφ执行计算的k值和输入的溶剂体积浓度值的线性最小二乘法拟合，以为每种可洗脱的成分获得参数a和m的值。示例方法100从步骤53进行到步骤54，其中由LC优化器11使用公式f=[(a-Ink。pt)/m]、前面计算的参数a和m的值、和上述讨论的k。pt分别计算初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值fis和Ψie。在此步骤，使用参数a和m为第一洗脱化合物计算的溶剂浓度被称作起始梯度体积浓度，fis，而使用a和m为第二洗脱化合物计算的溶剂浓度被称作终止梯度体积浓度，爭ie。如上所述，在某些示例实施方案中，数值2.0被(i)存储在LC优化器11中或(ii)由用户选择和输入(如步骤47中)，作为最佳容量因子值，k。pt。示例方法100从步骤M进行到块55。示例方法100从块55进行到图6所示的块56。示例方法100从块56进行到步骤57，其中等于一个柱体积的初始值被LC优化器11用作梯度持续时间周期。应当注意，在此步骤LC优化器11可以将某些其它初始值用作初始梯度持续时间周期(即，两个或更多个柱体积)。示例方法100从步骤57进行到判定块58。在判定块58，由LC优化器11基于步骤47中输入的数据做出决定，待使用的即将到来的液相色谱柱(即，在图1所示的LC系统部件12中)是正相柱还是反相柱。如果在判定块58LC优化器11做出决定色谱操作使用正相柱进行，则示例方法100进行到步骤59，其中由LC优化器11使用公式I为每个可洗脱的成分计算保留体积，Ve其中m和1为来自步骤51的早先计算的参数；A=来自步骤52的早先计算的起始梯度体积浓度Φis；B=[(来自步骤52的早先计算的终止梯度体积浓度tie)-(来自步骤52的早先计算的起始梯度体积浓度fis)]/(梯度持续时间周期)；Vm为柱体禾只(columnvolume)(艮口空体禾只(voidvolume))；Vd为滞后体积(dwellcolume)(S卩，溶剂混合的部位与柱头(theheadofthevolume)之间的体积)；和Vh为初始滞留体积(initialholdvolume)。应当注意Vh为使得第一可洗脱的成分接近梯度的开始离开柱的最小值。Vh为流速(flowrate)的0_1倍。还选择任意的最终滞留体积，例如2(Vm+VD+Vh)。在步骤59，LC优化器11还使用公式II计算所述两个或更多个化合物的峰的平均带宽(bandwidth)w权利要求1.为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法，所述方法包括在(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离之内利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，k’s，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度；和利用所述估算的容量因子结合最佳容量因子值，k。pt，为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。2.权利要求1的方法，其中所述方法包括利用所述容量因子，k’s，及所述第一和第二溶剂体积浓度来确定选自k=k0φ"1对于正相系统，和Ink=a-mφ对于反相系统的至少一个公式的参数(i)1和m或(ii)a和m;和使用最佳容量因子值，k。pt，及参数(i)1和m或(ii)a和m在选自f=[(k0/kopt)1/m]对于正相系统，和f=[(a-Ink。pt)/m]对于反相系统的至少一个公式中分别计算初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值φ化和<ie.3.权利要求2的方法，其中所述最佳容量因子值，k。pt，等于2.0。4.权利要求2的方法，进一步包括利用所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、和梯度持续时间周期值来(i)使用选自以下公式I和IV中的至少一个计算每个可洗脱化合物的保留体积5.权利要求4的方法，其中所述梯度持续时间周期调整过程包括(a)提高所述初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)(i)使用公式I和IV中的至少一个及所述增大的梯度持续时间周期值重新计算每个可洗脱的化合物的保留体积，(ii)使用公式II重新计算峰的平均带宽，Wg，和(iii)使用公式III重新计算分辨率；(c)确定是否所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，和⑵达到至少1.5的分辨率Rs，和如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Ve所示，且⑵达到至少1.5的分辨率民，则所述方法进一步包括向用户提供所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物未被完全洗脱，如、<Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，或(2)未达到至少1.5的分辨率Rs，则所述方法进一步包括重复步骤(a)、(b)和(c)，其中步骤(a)、(b)和(c)被一直重复直至达到第一固定次数；禾口如果达到了该第一固定次数，则向用户提供所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或启动起始梯度溶剂体积浓度调整过程。6.权利要求5的方法，其中所述方法进一步包括所述启动起始梯度溶剂体积浓度调整过程的步骤，其中所述起始梯度溶剂体积浓度调整过程包括(e)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(f)(i)使用公式I和IV中的至少一个、所述增大的梯度持续时间周期值、所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值和所述初始终止梯度溶剂体积浓度值重新计算每个可洗脱的化合物的保留体积，(ii)使用公式II重新计算峰的平均带宽，Wg，和(iii)使用公式III重新计算分辨率；(g)判断是否所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，和⑵达到至少1.5的分辨率Rs，和如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Ve所示，且⑵达到了至少1.5的分辨率民，则所述方法进一步包括向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述初始终止梯度溶剂体积浓度值以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物未被完全洗脱，如义<Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，或(未达到至少1.5的分辨率Rs，则所述方法进一步包括重复步骤(e)、(f)和(g)，其中步骤(e)、(f)和(g)被一直重复直至达到第二固定次数；和如果达到了该第二固定次数，则向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述初始终止梯度溶剂体积浓度值、和所述增大的梯度持续时间值以供核查，或启动终止梯度溶剂体积浓度调整过程。7.权利要求6的方法，其中所述方法进一步包括所述启动终止梯度溶剂体积浓度调整过程的步骤，其中所述终止梯度溶剂体积浓度调整过程包括(P)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(q)(i)使用公式I和IV中的至少一个、所述增大的梯度持续时间周期值、所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值和所述减小的终止梯度溶剂体积浓度值重新计算每个可洗脱的化合物的保留体积，()使用公式II重新计算峰的平均带宽，Wg，和(iii)使用公式III重新计算分辨率；(r)判断是否所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如V1KVffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，和(2)达到至少1.5的分辨率Rs，和如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Ve所示，且⑵达到了至少1.5的分辨率民，则所述方法进一步包括向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述减小的终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物未被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，或(未达到至少1.5的分辨率Rs，则所述方法进一步包括重复步骤(P)、(q)和(r)，其中步骤(ρ)、(q)和(r)被一直重复直至达到第三固定次数；和如果达到该第三固定次数，则向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述减小的终止梯度溶剂体积浓度值、和所述增大的梯度持续时间值以供核查。8.权利要求7的方法，其中所述初始梯度持续时间周期值为一个柱体积，每个增大的梯度持续时间周期值彼此相差约一个柱体积，每个减小的起始梯度溶剂体积浓度值是前一起始梯度溶剂体积浓度值的约90%，每个减小的终止梯度溶剂体积浓度值是前一终止梯度溶剂体积浓度值的约90%，所述第一固定次数为约10，所述第二固定次数为约100，和所述第三固定次数为约100。9.权利要求2的方法，其中所述利用所述容量因子的步骤包括确定参数1和m。10.权利要求5的方法，其中所述向用户提供所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查的步骤还包括向液相色谱分离单元提供所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以用于液相色谱分离单元软件，其中所述液相色谱分离单元软件在操作上适合接收和在液相色谱分离过程中利用所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值。11.计算机可读介质，其上存储有用于实施权利要求5的方法的计算机可执行的指令。12.计算机可读介质，其上存储有用于实施权利要求8的方法的计算机可执行的指令。13.液相色谱系统，包括计算系统，与所述计算系统的用户界面，和可编程的指令或软件，其使得能够实施权利要求8的方法。14.权利要求13的液相色谱系统，进一步包括液相色谱分离单元，其包括液相色谱柱，级分收集器，和液相色谱分离单元软件，其中所述液相色谱分离单元软件在操作上适合在液相色谱柱中分离样品的同时从所述计算系统接收和利用一个或多个优化的工艺参数。15.能够向用户提供用于液相色谱分离的一个或多个分离参数值的液相色谱系统，所述系统包括计算系统，和与所述计算系统的用户界面，所述计算系统能够在(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离之内利用色谱保留数据估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，k’s，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值，k。pt，为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和将(i)所述起始梯度溶剂体积浓度值和(ii)所述终止梯度溶剂体积浓度值提供给用户以供核查。16.权利要求15的液相色谱系统，其中所述用户界面包括供用户使用的视觉显示器。17.权利要求15的液相色谱系统，其中所述计算系统能够利用所述容量因子k及所述第一和第二溶剂体积浓度来确定选自k=k0φ-对于正相系统，和Ink=a-mf对于反相系统的至少一个公式的参数(i)Iitl和m或(ii)a和m;使用最佳容量因子值，k。pt，及参数(i)Ictl和m或(ii)a和m在选自f=[(k0/kopt)1/m]对于正相系统，和f=[(a-Ink。pt)/m]对于反相系统的至少一个公式中分别计算初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值f化和中ie；利用所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、及梯度持续时间周期值来(i)使用选自以下公式I和IV中的至少一个计算每个可洗脱的化合物的保留体积18.权利要求17的液相色谱系统，其中所述启动梯度持续时间周期调整过程的步骤包括(a)提高所述初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)(i)使用公式I和IV中的至少一个及所述增大的梯度持续时间周期值重新计算每个可洗脱的化合物的保留体积，(ii)使用公式II重新计算峰的平均带宽，Wg，和(iii)使用公式III重新计算分辨率；(c)判断是否所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如V1KVffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，和(2)达到至少1.5的分辨率Rs，和如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Ve所示，且⑵达到至少1.5的分辨率Rs，则向用户提供所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物未被完全洗脱，如义<Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Vg所示，或(2)未达到至少1.5的分辨率Rs,则重复步骤(a)、(b)和(c)，其中步骤(a)、(b)和(c)被一直重复直至达到第一固定次数；和如果达到该第一固定次数，则向用户提供所述初始的起始和终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或启动起始梯度溶剂体积浓度调整过程。19.权利要求18的液相色谱系统，其中所述启动起始梯度溶剂体积浓度调整过程的步骤包括(e)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(f)(i)使用公式I和IV中的至少一个、所述增大的梯度持续时间周期值、所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值和所述初始终止梯度溶剂体积浓度值重新计算每个可洗脱的化合物的保留体积，(ii)使用公式II重新计算峰的平均带宽，Wg，和(iii)使用公式III重新计算分辨率；(g)判断是否所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，和(2)达到至少1.5的分辨率Rs，和如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Ve所示，且⑵达到至少1.5的分辨率Rs，则向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述初始终止梯度溶剂体积浓度值以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物未被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Vg所示，或(2)未达到至少1.5的分辨率Rs,则重复步骤(e)、(f)和(g)，其中步骤(e)、(f)和(g)被一直重复直至达到第二固定次数；和如果达到该第二固定次数，则向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述初始终止梯度溶剂体积浓度值、和所述增大的梯度持续时间值以供核查，或启动终止梯度溶剂体积浓度调整过程。20.权利要求19的液相色谱系统，其中所述启动终止梯度溶剂体积浓度调整过程的步骤包括(P)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(q)(i)使用公式I和IV中的至少一个、所述增大的梯度持续时间周期值、所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值和所述减小的终止梯度溶剂体积浓度值重新计算每个可洗脱的化合物的保留体积，()使用公式II重新计算峰的平均带宽，Wg，和(iii)使用公式III重新计算分辨率；(r)判断是否所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如V1KVffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vm+Vh+Vd+Ve所示，和(2)达到至少1.5的分辨率Rs，和如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Ve所示，且⑵达到至少1.5的分辨率Rs，则向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述减小的终止梯度溶剂体积浓度值、以及所述增大的梯度持续时间值以供核查，或如果(1)所述两个或更多个可洗脱的化合物未被完全洗脱，如Vffl+Vh+Vd+Vg和V2<Vffl+Vh+Vd+Vg所示，或(2)未达到至少1.5的分辨率Rs,则重复步骤(p)、(q)和(r)，其中步骤(p)、(q)和(r)被一直重复直至达到第三固定次数；和如果达到该第三固定次数，则向用户提供所述减小的起始梯度溶剂体积浓度值、所述减小的终止梯度溶剂体积浓度值、和所述增大的梯度持续时间值以供核查。21.权利要求19的液相色谱系统，其中所述计算系统还能够向液相色谱分离单元提供(i)初始的或减小的起始溶剂体积浓度值，()初始的或减小的终止梯度溶剂体积浓度值，和(iii)所述增大的梯度持续时间值以用于液相色谱分离单元软件中，其中所述液相色谱分离单元软件在操作上适合接收和在液相色谱分离过程中利用(i)所述初始的或减小的起始溶剂体积浓度值，(ii)所述初始的或减小的终止梯度溶剂体积浓度值，和(iii)所述增大的梯度持续时间值。22.为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法，所述方法包括利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；和利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。23.权利要求22的方法，其中所述色谱保留数据是使用薄层色谱获得的。24.权利要求22的方法，其中所述利用色谱保留数据来估算所述两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子的步骤包括(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。25.权利要求22的方法，进一步包括利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算每个可洗脱的化合物的保留体积。26.权利要求25的方法，进一步包括利用每个可洗脱的化合物的所述保留体积来计算每个可洗脱的化合物之间的分辨率。27.权利要求26的方法，进一步包括如果没有达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率则启动梯度持续时间调整过程。28.权利要求27的方法，进一步包括(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。29.权利要求22的方法，进一步包括启动起始梯度溶剂浓度调整过程。30.权利要求29的方法，进一步包括(a)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。31.权利要求22的方法，进一步包括启动终止梯度溶剂浓度调整过程。32.权利要求31的方法，进一步包括(a)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(C)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(C)。33.为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法，所述方法包括利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算每个可洗脱的化合物的保留体积。34.权利要求33的方法，进一步包括利用每个可洗脱的化合物的所述保留体积来计算每个可洗脱的化合物之间的分辨率。35.权利要求34的方法，进一步包括如果没有达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率则启动梯度持续时间调整过程。36.权利要求35的方法，进一步包括(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。37.权利要求33的方法，进一步包括启动起始梯度溶剂浓度调整过程。38.权利要求37的方法，进一步包括(a)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。39.权利要求33的方法，进一步包括启动终止梯度溶剂浓度调整过程。40.权利要求39的方法，进一步包括(a)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。41.为液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值的方法，所述方法包括利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。42.权利要求41的方法，进一步包括如果没有达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率则启动梯度持续时间调整过程。43.权利要求42的方法，进一步包括(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。44.权利要求41的方法，进一步包括启动起始梯度溶剂浓度调整过程。45.权利要求44的方法，进一步包括(a)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。46.权利要求41的方法，进一步包括启动终止梯度溶剂浓度调整过程。47.权利要求46的方法，进一步包括(a)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。48.权利要求41的方法，其中通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。49.权利要求41的方法，其中通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。50.权利要求41的方法，由液相色谱系统中的计算系统使用软件执行，其中在完成分辨率计算之后自动将梯度参数值提供给所述液相色谱系统或用户以用于所述化合物的分罔。51.权利要求41的方法，由液相色谱系统中的计算系统使用软件执行，其中在用户将所述可洗脱的化合物的特性输入所述计算系统之后，所述计算系统向用户提供至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。52.使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法，包括将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入液相色谱系统中的计算系统；利用所述计算系统产生梯度参数值；将所述梯度参数自动提供给所述液相色谱系统或用户；和分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。53.权利要求52的方法，其中由包含以下的方法确定所述梯度参数值利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱化合物的保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。54.权利要求53的方法，其中通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。55.权利要求53的方法，其中通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。56.权利要求52的方法，由液相色谱系统中的计算系统使用软件执行，其中在用户将所述可洗脱的化合物的特性输入所述计算系统之后，所述计算系统向用户提供至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂，以用于分离所述可洗脱的化合物。57.使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法，包括将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入液相色谱系统中的计算系统；利用所述计算系统产生推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和利用所述计算系统产生梯度参数值。58.权利要求57的方法，进一步包括自动将所述梯度参数提供给所述液相色谱系统或用户；和分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。59.权利要求57的方法，进一步包括在所述利用所述计算系统产生梯度参数的步骤之前输入所述两个或更多个可洗脱的化合物的色谱保留数据。60.权利要求57的方法，其中由包含以下的方法确定所述梯度参数值利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物的保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。61.权利要求57的方法，其中通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。62.权利要求57的方法，其中通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。63.使用液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物的方法，包括将所述可洗脱的化合物的色谱保留数据输入液相色谱装置中的计算系统中；利用所述计算系统估算所述两个或更多个可洗脱化合物的容量因子；利用所述计算系统确定使用所述估算的容量因子是否所述两个或更多个可洗脱的化合物将不分离；利用所述计算系统产生至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和利用所述至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂来分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。64.液相色谱系统，包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；和利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值。65.权利要求64的液相色谱系统，其中所述色谱保留数据是使用薄层色谱获得的。66.权利要求64的液相色谱系统，其中所述计算系统能够利用所述色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子，包括(i)包括第一溶剂体积浓度的第一分离和(ii)包括第二溶剂体积浓度的第二分离，其中所述第二溶剂体积浓度不同于所述第一溶剂体积浓度。67.权利要求64的液相色谱系统，其中所述计算系统能够利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算每个可洗脱的化合物的保留体积。68.权利要求67的液相色谱系统，其中所述计算系统能够利用每个可洗脱的化合物的保留体积来计算每个可洗脱的化合物之间的分辨率。69.权利要求68的液相色谱系统，其中如果没有达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率则所述计算系统能够启动梯度持续时间调整过程。70.权利要求69的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。71.权利要求64的液相色谱系统，其中所述计算系统能够启动起始梯度溶剂浓度调整过程。72.权利要求71的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。73.权利要求64的液相色谱系统，其中所述计算系统能够启动终止梯度溶剂浓度调整过程。74.权利要求73的液相色谱系统，进一步包括(a)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。75.液相色谱系统，包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积。76.权利要求75的液相色谱系统，其中所述计算系统能够利用每个可洗脱的化合物的保留体积来计算每个可洗脱的化合物之间的分辨率。77.权利要求76的液相色谱系统，其中如果没有达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率则所述计算系统能够启动梯度持续时间调整过程。78.权利要求77的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。79.权利要求75的液相色谱系统，其中所述计算系统能够启动起始梯度溶剂浓度调整过程。80.权利要求79的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。81.权利要求75的液相色谱系统，其中所述计算系统能够启动终止梯度溶剂浓度调整过程。82.权利要求81的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。83.液相色谱系统，包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述计算系统能够利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。84.权利要求83的液相色谱系统，其中如果没有达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率则所述计算系统能够启动梯度持续时间调整过程。85.权利要求84的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)提高初始梯度持续时间周期值至增大的梯度持续时间周期值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。86.权利要求83的液相色谱系统，其中所述计算系统能够启动起始梯度溶剂浓度调整过程。87.权利要求86的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)降低所述起始梯度溶剂体积浓度至减小的起始梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。88.权利要求83的液相色谱系统，其中所述计算系统能够启动终止梯度溶剂浓度调整过程。89.权利要求88的液相色谱系统，其中所述计算系统能够(a)降低所述终止梯度溶剂体积浓度至减小的终止梯度溶剂体积浓度值；(b)为每个可洗脱的化合物重新计算保留体积；(c)确定是否达到每个可洗脱的化合物之间的分辨率；和(d)如果没有达到分辨率则重复步骤(a)、(b)和(c)。90.权利要求83的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。91.权利要求83的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。92.权利要求83的液相色谱系统，其中在完成分辨率计算之后所述计算系统自动将梯度参数值提供给所述液相色谱系统或用户以用于所述化合物的分离。93.权利要求83的液相色谱系统，其中在用户将所述可洗脱化合物的特性输入所述计算系统之后，所述计算系统向用户提供至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。94.液相色谱系统，包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物；(b)由所述计算系统执行，为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值；和(c)将所述梯度参数自动提供给所述色谱系统或用户。95.权利要求94的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过以下确定所述梯度参数值利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。96.权利要求95的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。97.权利要求95的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。98.权利要求94的液相色谱系统，其中在用户将所述可洗脱的化合物的特性输入所述计算系统之后，所述计算系统能够向用户提供至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。99.液相色谱系统，包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物；(b)利用所述计算系统产生至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和(c)利用所述计算系统为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值。100.权利要求99的液相色谱系统，其中所述计算系统能够将所述梯度参数自动提供给所述液相色谱系统或用户；和与所述液相色谱通信以分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。101.权利要求99的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过以下确定所述梯度参数值利用色谱保留数据来估算两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；利用所估算的容量因子结合最佳容量因子值为所述液相色谱分离确定(i)起始梯度溶剂体积浓度值，和(ii)终止梯度溶剂体积浓度值；和利用所述起始和终止梯度溶剂体积浓度值来计算所述可洗脱的化合物的保留体积和所述可洗脱的化合物之间的分辨率。102.权利要求99的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过变化所述起始或终止梯度溶剂体积浓度值来重新计算所述分辨率。103.权利要求99的液相色谱系统，其中所述计算系统能够通过变化梯度溶剂持续时间体积来重新计算所述分辨率。104.能够向用户提供液相色谱分离的一个或多个分离参数值的液相色谱系统，所述系统包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到与所述液相色谱系统相通信的计算系统中的可洗脱的化合物的一个或多个特性以液相色谱分离两个或更多个可洗脱的化合物；(b)由所述计算系统执行，为所述可洗脱的化合物的液相色谱分离确定一个或多个梯度参数值；和(c)在用户将所述可洗脱的化合物的一个或多个特性输入所述计算系统之后向用户提供推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物。105.液相色谱系统，包括计算系统；和与所述计算系统的用户界面；其中所述液相色谱系统能够(a)使用输入到计算系统中的可洗脱的化合物的保留数据利用所述计算系统估算所述两个或更多个可洗脱的化合物的容量因子；(b)利用所述计算系统确定使用所述估算的容量因子所述两个或更多个可洗脱的化合物是否将不分离；(C)利用所述计算系统产生至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂以用于分离所述可洗脱的化合物；和(d)利用所述至少一个推荐的色谱方法类型、色谱介质、色谱柱尺寸和色谱溶剂来分离所述两个或更多个可洗脱的化合物。全文摘要本发明公开了为液相色谱(LC)系统中的成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的方法。还公开了能够为液相色谱柱中的成分分离确定一个或多个优化梯度参数值的液相色谱(LC)系统。文档编号G01N30/00GK102362177SQ201180001541公开日2012年2月22日申请日期2011年1月26日优先权日2010年1月26日发明者列斯尼奥夫斯基A.,麦克里里D.,小安德森J.,麦考恩J.,萨里-诺尔豪斯R.申请人:全技术联合公司