专利名称：硫酸头孢噻利缩合物杂质的快速检测方法
技术领域：
本发明涉及一种硫酸头孢噻利中缩合物杂质用聚苯乙烯凝胶色谱柱及高效液相色谱(HPLC)仪的快速检测方法。
背景技术：
硫酸头孢噻利为新的第四代注射用氨噻肟型头孢菌素类抗生素，该药品对大多数 G+和G—菌具有良好的抗菌活性，其抗菌活性和抗菌谱都优于第3代头孢菌类，在临床中使用广泛。研究表明该类抗生素中聚合物或缩合物杂质(下文采用“缩合物杂质”)是引起速发型过敏反应的真正过敏原，因此检测并控制该产品中缩合物杂质的含量是减少该类抗生素过敏反应的根本途径[参见金少鸿，胡昌勤，中国新药杂志，1994，3 (4)，38 41 ；胡昌勤，赵建西，金少鸿，孙学兰，中国抗生素杂志，1991，16(4)，270 275]。对于硫酸头孢噻利药物及其相关物质的分析方法，国外文献报道较少，有的也只是对硫酸头孢噻利的合成和体内代谢研究，或是与其他抗生素相比表现出来的优良抗菌作用以及对小鼠给药出现痉挛或惊厥等不良反应的报道。国内目前只有对药物中硫酸头孢噻利含量[参见卢协勤，张根元，抗感染学，2007，4 ), 169-171]或者在人体内代谢的少数文献报道，对于硫酸头孢噻利缩合物杂质的检测还未有报道；中国药典至2010年版均没有对硫酸头孢噻利的相关质量检测方法作要求。因此，开发一种新的、快速检测硫酸头孢噻利中缩合物杂质的分析方法非常必要。
发明内容
本发明的目的是研究开发一种硫酸头孢噻利缩合物杂质快速、准确检测的分析方法。本发明的技术方案如下，硫酸头孢噻利及其缩合物杂质高效液相色谱的快速分析方法，其特点在于采用一种耐压、微孔型聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为固定相的高聚物色谱柱，选用高效液相色谱操作条件为a.聚苯乙烯凝胶色谱柱MKF-GPC-120，5 10 μ m，柱长200 320，柱径4. 6 8. 6mm(I. D.)；b.流动相甲醇/水=50 85/50 15 (体积比)；c.流速0. 8 1. 2mL/min,进样量10 20 μ L，柱温室温；d.采用UV检测器，检测波长为2Mnm。与现有技术相比，本发明具有如下优点1、能将缩合物杂质和硫酸头孢噻利达到基线分离，以及准确测定其杂质的含量。2、测试时间快速，色谱检测全过程仅约20min，分析时间短。3、本发明在常规高效液相色谱仪上即可完成操作，不需昂贵的中、低压制备色谱， 因此对仪器的要求低，方法有利于普及。
图1为硫酸头孢噻利在聚苯乙烯凝胶色谱柱:MKF_GPC型色谱柱(MKF_GPC_120， 8ym，300X7.anm(I.D.))中的HPLC图，流动相甲醇/水=65 35(体积比)；流速ImL/ min ；进样物质为供试品-1，其中1、2分别代表缩合物杂质峰和硫酸头孢噻利峰。
具体实施例方式实验器材及试剂(1)实验仪器戴安Summit型高效液相色谱系统(美国戴安公司)；THERMO SCIENTIFIC LTQ XL 液质仪；⑵色谱柱MKF-GPC 型色谱柱(MKF-GPC-120,8 μ m, 300 X 7. 8mm(I. D.),(南京麦科菲高效分离载体有限公司)。(3)实验试剂硫酸头孢噻利；甲醇；氢氧化钠；高效液相去离子水。硫酸头孢噻利供试品的配制供试品-1 取硫酸头孢噻利样品约5mg，精密称定，以甲醇/水(pH 6. 0-7. 0)= 1 1溶剂定容至10mL，待测(现用现配)。供试品-2 取硫酸头孢噻利样品约5mg，精密称定，以甲醇/水(pH 9. 0) = 1 1 溶剂定容至10mL，待测(现用现配)。供试品-3 取硫酸头孢噻利样品约5mg，精密称定，以甲醇/水(pH 10. 5) = 1 1 溶剂定容至10mL，待测(现用现配)。实施例1色谱条件检测机器戴安Summit型高效液相色谱系统；色谱柱MKF-GPC-120(300mmX7.8mm，8ym)；流动相甲醇/ 水=85 15(体积比)；流速:lmL/min ；检测波长:254nm ；进样量20 μ L ；进样物质供试品_1。实施例2色谱条件检测仪器、色谱柱、流速、检测波长、进样物质、进样量同实施例1，流动相甲醇/水=65 35(体积比)。实施例3色谱条件检测仪器、色谱柱、流速、检测波长、进样物质、进样量同实施例1，流动相甲醇/水=50 50(体积比)。实施例4色谱条件MKF-GPC(200mm X 4. 6mm，5 μ m)；流动相甲醇 / 水=50 50 (体积比)；流速0. 8mL/min ；进样物质为供试品_1 ；检测仪器、检测波长、进样量、进样物质同实施例1。实施例5色谱条件MKF-GPC (300mm X 7. 8謹，5 μ m)；流动相甲醇/水=80 20 (体积比)；流速1. 2mL/min ；进样物质为供试品_1 ；检测仪器、检测波长、进样量、同实施例1。
实施例6色谱条件检测仪器、色谱柱、流动相比例、流速、检测波长、进样量同实施例2，进样物质为供试品_2。实施例7色谱条件检测仪器、色谱柱、流动相比例、流速、检测波长、进样量同实施例2，进样物质为供试品_3。实施例8LC-MS条件THERM0 SCIENTIFIC LTQ XL液质仪；色谱柱、流速、检测波长、进样量， 进样物质同实施例1，流动相甲醇/水=75 25(体积比)；质谱分流速0. 2mL/min ;ESI + 模式扫描；扫描范围400 2000m/z。
权利要求
1.一种硫酸头孢噻利中缩合物杂质的高效液相色谱快速检测方法，其特征在于所述方法包括以下条件a.高聚物色谱柱的选用聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，粒径5 ΙΟμπι，柱长200 320mm，柱内径 4. 6 8. 6mm ；b.流动相甲醇和水的体积比为50 85 50 15 ；c.流速0.8 1. 2mL/min，进样量10 20 μ L，柱温室温；d.采用UV检测器，检测波长为254nm。
2.根据权利要求1所述的硫酸头孢噻利中缩合物杂质的高效液相色谱快速检测方法， 其特征在于所述的高聚物色谱柱为微孔型聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物色谱固定相充填。
3.根据权利要求1所述的硫酸头孢噻利中缩合物杂质的高效液相色谱快速检测方法， 其特征在于所述的高聚物色谱柱为MKF-GPC-120，孔径4 15nm。
4.根据权利要求1所述的硫酸头孢噻利中缩合物杂质的高效液相色谱快速检测方法， 其特征在于所述的硫酸头孢噻利中缩合物杂质为硫酸头孢噻利分子的二聚缩合物，或三聚缩合物，或多聚缩合物，或不同缩合物的混合物。
全文摘要
本发明涉及一种对硫酸头孢噻利中缩合物杂质的快速检测方法。本发明采用高效液相色谱法，色谱条件为聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物色谱柱MKF-GPC，5～10μm，200～320×(4.6～8.6)mm(I.D.)，流动相组成为甲醇∶水＝50～85∶50～15(体积比)，流速为0.8～1.2mL/min，检测波长254nm；进样量20μL；本发明是一种快速、灵敏度高、可用常规高效液相色谱仪完成分析检测硫酸头孢噻利缩合物杂质的新方法。
文档编号G01N30/02GK102323357SQ20111024702
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月26日 优先权日2011年8月26日
发明者刘晓宁, 徐会, 魏荣卿 申请人:南京工业大学