专利名称：一种苯乙醇胺a快速检测卡及其检测方法
技术领域：
本发明涉及一种苯乙醇胺A快速检测卡及其检测方法，是一种检测苯乙醇胺A的检测器具，属于苯乙醇胺A检测技术领域。
背景技术：
现代畜牧业为人们提供了极其丰富的各种食品，但同时畜牧业中存在大量使用养殖添加剂的现象，特别是在家畜饲料中使用β肾上腺受体激动剂，如盐酸克伦特罗(瘦肉精)、莱克多巴胺等，这类添加剂具有促进脂肪分解和增加肌肉生长的作用可以提高瘦肉率，人食用了用这类添加剂饲养的畜产品后，会出现中毒症状。因此，我国已明文规定严禁使用。苯乙醇胺A是2011年最新发现添加在饲料中的β-受体兴奋剂，又名克伦巴胺，分子式为C19H24N2O4，化学结构式为2- - (4-硝基苯基)丁基-2-羟基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，是福莫特罗的同分异构体，其是美国礼来公司合成莱克多巴胺的副产物，具有同盐酸克伦特罗和莱克多巴胺相同的作用和效果。目前，研究组织或饲料中苯乙醇胺A检测方法方面的资料较少，主要是运用高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测食品中苯乙醇胺A的检测方法是非常必要的。本发明拟发明一种基于小分子物质苯乙醇胺A偶联蛋白质后而具有抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金或乳胶颗粒标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测饲料或组织等样品中的苯乙醇胺A。根据检测卡样品检测线(T)和质控线(C)的有无显色来判定样品中的苯乙醇胺A含量。反应是利用苯乙醇胺A蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，适合现场操作。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查，结果准确，灵敏度高， 准确率大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能检测苯乙醇胺A的检测器具，直接应用免疫学的方法检测饲料或组织，如肌肉、肝脏或肾脏等样品中苯乙醇胺A的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。本发明的技术方案一种苯乙醇胺A快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4 ；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜或乳胶颗粒膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9， 另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7 ；胶体金膜或乳胶颗粒膜为含抗苯乙醇胺A抗体胶体金或乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含苯乙醇胺A蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。采用上述苯乙醇胺A快速检测卡，检测样品为饲料、组织样品、尿液或血清，处理方法如下
A、尿样或血清取尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或在 15°C，4000r/min 条件下离心 IOmin ；
B、饲料称取0.5-lg饲料样品，加入l_2mL样品抽提液，在试管中搅拌1 min，静置10 min后，取清亮上层液作测试样品；
C、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏)取0.5-lg剪碎或勻浆过的动物组织样品，置于含 l-2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1 min后，经100°C水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。样品抽提液为0. 01mol/L PBST溶液(pH7. 4)，内含0. 15mol/LNaCl、质量浓度 0. 5% 吐温-20。当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中苯乙醇胺A含量未超标。当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中苯乙醇胺A含量超标。当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。本发明的有益效果本发明的优点是能检测饲料、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏) 等样品中含有的苯乙醇胺A，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
图1苯乙醇胺A快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条， 3、检测窗孔，4、加样孔。图2测试条的硝酸玻璃纤维膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带， 11、质控带。图3苯乙醇胺A快速检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜， 7、胶体金膜或乳胶颗粒膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施例方式本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下 实施例1
一种苯乙醇胺A快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1。检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm， 厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。
测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2. 5mm。测试条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长60mm，宽4mm ；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm,长20_25mm，宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检测带10，含苯乙醇胺A蛋白质偶联物；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5 —端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6 —端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7，胶体金膜或乳胶颗粒膜7是含抗苯乙醇胺A单克隆抗体胶体金或乳胶颗粒标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜或乳胶颗粒膜7厚 0. 5-0. 8mm,长 5mm，宽 4mm。样品垫 8 厚 0. 5-0. 8mm,长 20mm，宽 4mm。吸水膜 9 厚 0. 5-0. 8mm, 长16-20mm，宽4mm。胶体金膜或乳胶颗粒膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为l-2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。本发明苯乙醇胺A检测卡用于检测饲料、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏)、尿样或血清等样品中的苯乙醇胺A的检测。实施例2 样品的处理方法如下
A、尿样或血清尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或在 15°C、4000r/min 条件下离心 IOmin ；
B、饲料称取Ig饲料样品，加入2mL样品抽提液，在试管中搅拌1min，静置10 min后，
取清亮上层液作测试样品。C、组织样品(如肌肉、肝脏或肾脏)取Ig剪碎或勻浆过的动物组织样品，置于含 2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品Imin后，经100°C水浴5分钟，冷却至室温， 取清亮的中间部分作测试样品。样品抽提液PBST为含 0. 15mol/LNaCl、含 0. 5% 吐温-20 的 0. 01mol/L、pH7. 4 PBST 溶液。使用苯乙醇胺A快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入苯乙醇胺A快速检测卡的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜或乳胶颗粒膜7所含的抗苯乙醇胺A单克隆抗体胶体金或乳胶颗粒标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-lOmin内观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金或乳胶颗粒标记的抗体，在测试带上分别与含苯乙醇胺A蛋白质偶联物，以及
质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检苯乙醇胺A存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的苯乙醇胺A蛋白质偶联物反应，从而检测带不显色。主要反应的结果有以下3种情况
1、当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中苯乙醇胺A含量未超标。2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说明被检测样品中苯乙醇胺A含量超标。3、当检测带10和质控带11均不显色，则表明检测试条已失效。
权利要求
1.一种苯乙醇胺A快速检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4);测试条(2)是由支承背板(5) 上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜或乳胶颗粒膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、 和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜 (7)；胶体金膜或乳胶颗粒膜为含抗苯乙醇胺A抗体胶体金膜或乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含苯乙醇胺A蛋白质偶联物的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11)，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
2.用权利要求1所述的苯乙醇胺A快速检测卡的检测方法，其特征在于应用免疫学的方法直接检测样品中苯乙醇胺A的含量，检测样品为饲料、组织样品、尿液或血清，处理方法如下A、尿样或血清尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或在 15°C、4000r/min 条件下离心 IOmin ；B、饲料称取0.5-lg饲料样品，加入l_2mL样品抽提液，在试管中搅拌1 min，静置10 min后，取清亮上层液作测试样品；C、组织样品如肌肉、肝脏或肾脏，取0.5-lg剪碎或勻浆过的动物组织肉、肝脏或肾脏样品，置于含l_2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1 min后，经100°C水浴5 分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品；样品抽提液为ρΗ7· 4、0· 01mol/L PBST溶液，内含0. 15mol/L的NaCl，质量浓度0. 5% 吐温-20 ；当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中苯乙醇胺A含量未超标；当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中苯乙醇胺A含量超标；当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。
全文摘要
一种苯乙醇胺A快速检测卡及其检测方法，属于苯乙醇胺A检测技术领域。本发明苯乙醇胺A快速检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜或乳胶颗粒膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜或乳胶颗粒膜为含抗苯乙醇胺A单克隆抗体胶体金或乳胶颗粒标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜横向上有两条检测带，一条为含苯乙醇胺A蛋白质偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是应用免疫学的方法直接检测饲料、组织样品、尿液或血清等样品中的苯乙醇胺A含量。本发明苯乙醇胺A快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N21/78GK102323262SQ20111022782
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月10日 优先权日2011年8月10日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司