专利名称：桑葛制剂中总黄酮类和总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及质量检测方法
技术领域：
本发明涉及中药材的质量检测领域，具体而言，涉及一种对桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及对桑葛制剂的质量检测方法。
背景技术：
桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮，性甘、寒，归肺经，具有泻肺平喘、利水消肿的功能，主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。葛根为豆科多年生藤本植物野葛Pueraria lobata(ffilld) Ohwi的干燥根,是中医临床常用药物,具有扩张冠状动 脉、减慢心率、降低心肌耗氧量、改善心、脑血液循环等作用。在现有技术中，人们将桑白皮和葛根两味药材混合制成了桑葛制剂，并将其应用到降脂、脑卒中等中药组合物的制备中。由于桑葛制剂在中药组合物中的重要作用，所以其质量检测也一直受到人们的关注。现有的含量测定方法中仅以测定单一活性成分葛根素和I-脱氧野尻霉素(DNJ)为指标，这一方法虽然能够快速地检测出上述两种主要成分，但由于桑葛制剂中还存在着大量其他有效成分，而使得该药物在临床应用中的有效性和安全性无法得到较好的监控。
发明内容
为了解决上述现有桑葛制剂检测方法不能全面反映总黄酮类和总生物碱类活性成分的含量，无法控制桑葛制剂质量的问题，本发明提供了一种桑葛制剂总黄酮类和总生物碱类活性成分的指纹图谱构建方法。本发明提供的桑葛制剂总黄酮类成分和总生物碱类活性成分指纹图谱的构建方法，包括以下步骤a)将桑葛制剂制备成可用于液相色谱分离的桑葛制剂溶液；b)总黄酮类指纹图谱的构建将桑葛制剂溶液注入液相色谱仪，紫外检测器的波长为250nm ;柱温为20-40°C ；以乙腈为流动相A，以O. 3%醋酸为流动相B进行梯度洗脱，得到总黄酮类指纹图谱；以及c)总生物碱类成分指纹图谱的构建称取预定量的桑葛制剂溶液，分别将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入该桑葛制剂溶液，水浴下进行反应；再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到上述桑葛制剂溶液，过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪，荧光检测器的激发波长为254nm，发射波长为309nm，柱温在20_40°C的范围内；其中，高效液相色谱仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相C，O. I %醋酸为流动相D进行梯度洗脱，，得到总生物碱类成分指纹图谱。进一步地，步骤b)的梯度洗脱的程序如下O 20分钟流动相A体积比保持为10.5%，流动相B体积比保持为89. 5 % ;
20 60分钟流动相A体积比由10. 5 %线性上升到40 %，流动相B体积比由89. 5%下降到60% ；60 62分钟流动相A体积比由40 %线性下降到10.5%，流动相B体积比由60 %上升至IJ 89. 5% ；62 70分钟流动相A体积比保持为10.5%、流动相B体积比保持为89. 5 %，得到总黄酮类成分指纹图谱；进一步地，步骤c)的梯度洗脱程序如下O 50分钟，流动相C体积比由30 %上升到35 %，流动相D体积比由70 %下降到65% ；50 60分钟，流动相C体积比保持为35 %，流动相D体积比保持为65 % ；
60 61分钟，流动相C体积比由35 %上升到100 %，流动相D体积比由65 %下降到0% ；61 70分钟，流动相C体积比保持为100 %，流动相D体积比保持为O % ； 70 71分钟，流动相C体积比由100 %下降到30 %，流动相D体积比由O %上升到 70% ；进一步地，步骤b)包括通过将葛根素加入水中制备葛根素参照物溶液的步骤，上述葛根素参照物溶液与桑葛制剂溶液同时注入液相色谱仪。进一步地，步骤c)包括将I-脱氧野尻霉素盐酸加入水中制得I-脱氧野尻霉素盐酸参照物溶液的步骤；制得的I-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液与桑葛制剂溶液同时注入高效液相色谱仪。进一步地，总黄酮类成分的对照指纹图谱中具有17个共有指纹峰，相对保留时间分别为I 号峰为 O. 487±0. 009，2 号峰为 O. 536±0. 004，3 号峰即 S 峰为 I. 000±0· 000，4 号峰为 I. 099±0. 030,5 号峰为 I. 217±0. 002,6 号峰为 I. 308±0. 001,7 号峰为I. 890±0. 002,8 号峰为 2. 268±0. 008,9 号峰为 2. 314±0· 006，10 号峰为 2. 445±0. 010，
11号峰为 2. 507±0. 028，12 号峰为 2. 549±0. 010，13 号峰为 2. 722±0. 012，14 号峰为 2. 771±0. 012，15 号峰为 2. 930±0. 007，16 号峰为 3. 423±0. 019，17 号峰为
3.529±0. 017。进一步地，当桑葛制剂中桑白皮与葛根的质量比为2 I时，总生物碱类活性成分的对照指纹图谱中具有13个共有指纹峰，相对保留时间分别为I 号峰为 O. 514±0· 03,2 号峰即 S 峰为 I. 000±0· 000,3 号峰为 I. 401±0. 001，4 号峰为 I. 427±0. 003，5 号峰为 I. 478±0. 009，6 号峰为 I. 522±0. 008，7 号峰为
1.917±0· 012,8 号峰为 2. 030±0. 007,9 号峰为 2. 212±0· 022，10 号峰为 2. 530±0. 044，
11号峰为 2. 617±0· 008，12 号峰为 3. 630±0. 017，13 号峰为 3. 740±0. 018。进一步地，当桑葛制剂中桑白皮与葛根的质量比为4 1、1 : 2和I : 4时，总生物碱类活性成分的对照指纹图谱中具有9个共有指纹峰，相对保留时间分别为I 号峰为 O. 512±0· 018，2 号峰即 S 峰为 I. 000±0· 000，3 号峰为 I. 450±0. 003，4 号峰为 I. 880±0. 002,5 号峰为 2. 154±0. 005,6 号峰为 2. 288±0. 006,7 号峰为
2.469±0. 006，8 号峰为 2. 559±0. 013,9 号峰为 2. 621±0· 010。
本发明的另一目的在于提供一种桑葛制剂的质量检测方法，包括以下步骤将待测桑葛制剂制成液相色谱用溶液；按照上述构建方法中的步骤b)和c)所描述的方法获得待测桑葛制剂的总黄酮类成分和总生物碱类成分的指纹图谱；以及将待测桑葛制剂的总黄酮类成分指纹图谱与上述总黄酮类成分的对照指纹图谱进行比较，以及将待测桑葛制剂的总生物碱类成分指纹图谱与上述总生物碱类成分的对照指纹图谱进行比较。采用本发明提供的指纹图谱构建方法，可以有效、准确地构建出桑葛制剂的总黄酮类成分指纹图谱和总生物碱类成分指纹图谱。该指纹图谱构建方法具有稳定性好、重现性好的优点。另外，通过构建得到的指纹图谱及对照指纹图谱对现有桑葛制剂进行质量控
制，有利于对市场现有桑葛制剂的监控，提高了药品安全度，维护了广大消费者的权益。
构成本申请的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中图I当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为2 I时，总黄酮类成分的对照指纹图谱；图2当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为2 : I时，总生物碱类成分的对照指纹图谱；图3当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为4 : I时，总黄酮类成分的对照指纹图谱；图4当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为4 : I时，总生物碱类成分的对照指纹图谱；图5当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为I : 2时，总黄酮类成分的对照指纹图谱；图6当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为I : 2时，总生物碱类成分的对照指纹图谱；图7当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为I : 4时，总黄酮类成分的对照指纹图谱；图8当桑葛制剂中桑白皮和葛根的质量比为I : 4时，总生物碱类成分的对照指纹图谱；图9桑葛制剂中总黄酮类成分空白指纹图谱，即不加入任何桑葛制剂或参照物，只加入各种试剂而得到的高效液相色谱；以及图10总生物碱类活性成分空白指纹图谱，即不加入任何桑葛制剂或参照物，只加入各种试剂而得到的高效液相色谱。图11待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比2I混合的总黄酮类成分指纹图谱；图12待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比4 : I混合的总黄酮类成分指纹图谱；
图13待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比I:2混合后的总黄酮类成分指纹图谱；图14待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比I:4混合后的总黄酮类成分对照指纹图谱；图15待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比2I混合的总生物碱类成分指纹图谱；图16待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比4: I混合后的总生物碱类成分指纹图谱；图17待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质量比I:2混合后的总生物碱类成分指纹图谱；图18待测桑葛制剂(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照质 量比I:4混合后的总生物碱类成分指纹图谱。
具体实施例方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。本发明所涉及的桑葛制剂可以通过如下方法制备(I)桑白皮药材经过切制或粉碎，用水提取，获得桑白皮药材水提取液，提取液浓缩后离心，上清液过强酸型阳离子交换树脂，收集O. I IN的氨水洗脱液，洗脱液浓缩后得到桑白皮提取物，或经过喷雾干燥、减压或常压干燥得桑白皮提取物；(2)葛根药材经过切制或粉碎，用水提取，获得葛根药材的水提取液，提取液浓缩后离心，上清液继续浓缩成稠膏得到葛根提取物，或经过喷雾干燥、减压或常压干燥得葛根提取物；(3)将桑白皮提取物和葛根提取物混合均匀，得桑葛提取物；将桑葛提取物加入常规赋形剂，按照常规工艺，制成临床可接受的剂型，包括但不限于浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂，制得桑葛制剂。当然，上述制备方法并不是唯一制备桑葛制剂的方法。本领域技术人员完全可以根据实践操作，采用其他桑葛制剂的制备方法。本发明的一个目的在于提供一种桑葛制剂总黄酮类成分和总生物碱类活性成分指纹图谱的构建方法，包括以下步骤a)将桑葛制剂制备成可用于液相色谱分离的桑葛制剂溶液；可将桑葛制剂溶于水中形成液相色谱分离桑葛制剂溶液。桑葛制剂在水中具有一定的溶解度，可通过超声振荡的方法加快桑葛制剂在水中的溶解。在本发明的一个具体实施例中，发明人采用了功率250W，频率33KHZ进行超声辅助处理，提高了桑葛制剂的溶解度。也可采用其他溶剂来溶解桑葛制剂，以使得桑葛制剂可用于液相分离，本领域技术人员可根据具体情况而采用不同的溶剂，在这里就不再赘述。b)总黄酮类指纹图谱的构建桑葛制剂中含有多种黄酮各类活性成分，现有技术中仅以单一葛根素作为检测指标，而本发明采用液相检测方法，利用梯度洗脱工艺将桑葛制剂中总黄酮类成分完全分离出来，全面地考察桑葛制剂中总黄酮的成分及含量组成。具体的构建方法为将桑葛制剂溶液注入液相色谱仪，紫外检测器的波长为250nm;柱温为20-400C ;以乙腈为流动相A，以O. 3%醋酸为流动相B进行梯度洗脱，即可得到总黄酮类指纹图谱；c)总生物碱类成分指纹图谱的构建桑葛制剂中含有多种总生物碱类活性成分，现有技术中仅以DNJ作为检测指标，而本发明在荧光检测法的基础上，利用梯度洗脱工艺将桑葛制剂中总生物碱类成分完全分离出来，全面考察桑葛制剂总的生物碱类活性成分及含量组成。该指纹图谱的构建方法包括称取预定量的桑葛制剂溶液，分别将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入该桑葛制剂溶液，水浴下反应；再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到上述桑葛制剂溶液，过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪，荧光检测器的激发波长为254nm，发射波长为309nm，柱温在20_40°C的范围内；其中，高效液相色谱仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相C，O. I %醋酸为流动相D进行梯度洗脱，得到总生物碱类成分指纹图谱。这里所称“预定量”，是指按照液相色谱的性能以及实际需求设定注射到液相色谱柱中的样品的浓度，而计算取出的桑葛制剂溶液的体积。 本发明所采用的柱温、检测器的波长均为常规实验参数，本领域技术人员可根据具体操作在此范围内选择合适的参数。通过以上步骤，可测得桑葛制剂中总黄酮及总生物碱类活性成分的指纹图谱，不仅仅单一地以一种有效成分作为测试目标，而是全面地反映了制剂中总黄酮及总生物碱活性成分的含量，有利于控制桑葛制剂的质量。在本发明提供的一个具体实施方式
中，步骤b)总黄酮类指纹图谱的构建方法具体包括将桑葛制剂溶液注入液相色谱仪(十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂)，紫外检测器的波长为250nm ;柱温为20_40°C;流速为O. 8-1. Oml/min ;以乙腈为流动相A，以O. 3%醋酸为流动相B进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序如下O 20分钟流动相A体积比保持为10.5%，流动相B体积比保持为89. 5 % ;20 60分钟流动相A体积比由10. 5 %线性上升到40 %，流动相B体积比由89. 5%下降到60% ； 60 62分钟流动相A体积比由40 %线性下降到10.5%，流动相B体积比由60 %上升至IJ 89. 5% ；62 70分钟流动相A体积比保持为10. 5 %、流动相B体积比保持为89. 5 %，得到总黄酮类成分指纹图谱；经过上述梯度洗脱方法，可以有效地将桑葛制剂中的总黄酮类成分梯度洗脱出来，所得图谱的分离度较高。优选地，在上述步骤中还可包括将葛根素加入水中制得葛根素参照物溶液的步骤；将葛根素参照物溶液与桑葛制剂溶液同时注入液相色谱仪。参照物的加入可用于考察指纹图谱的稳定程度和重现性，有助于色谱的辨认；在本发明提供的一个具体实施方式
中，步骤c)总生物碱类成分指纹图谱的构建方法中的梯度洗脱程序如下O 50分钟，流动相C体积比由30 %上升到35 %，流动相D体积比由70 %下降到65% ；
50 60分钟，流动相C体积比保持为35 %，流动相D体积比保持为65 % ；60 61分钟，流动相C体积比由35 %上升到100 %，流动相D体积比由65 %下降到0% ；61 70分钟，流动相C体积比保持为100 %，流动相D体积比保持为O % ；70 71分钟，流动相C体积比由100 %下降到30 %，流动相D体积比由O %上升到70% ;得到总生物碱类成分指纹图谱。优选地，步骤c)中还包括将I-脱氧野尻霉素盐酸加入水中制得I-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液的步骤，I-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液与桑葛制剂溶液可同时注入高效液相色谱仪。在本发明提供的具体实施例中，通过对10批桑葛制剂的指纹图谱测试和比较分析，得到的总黄酮类成分对照指纹图谱(对照指纹图谱)中具有17个共有指纹峰的，相对保留时间分别为I 号峰为 O. 487±0. 009，2 号峰为 O. 536±0. 004，3 号峰即 S 峰为 I. 000±0· 000，4 号峰为 I. 099±0. 030,5 号峰为 I. 217±0. 002,6 号峰为 I. 308±0. 001,7 号峰为I. 890±0. 002,8 号峰为 2. 268±0. 008,9 号峰为 2. 314±0· 006，10 号峰为 2. 445±0. 010，
11号峰为 2. 507±0. 028，12 号峰为 2. 549±0. 010，13 号峰为 2. 722±0. 012，14 号峰为 2. 771±0. 012，15 号峰为 2. 930±0. 007，16 号峰为 3. 423±0. 019，17 号峰为
3.529±0. 017。这些共有峰构成了桑葛制剂中总黄酮活性成分的指纹特征，可作为桑葛制剂总黄酮类活性成分的对照指纹图谱。在本发明提供的另一具体实施例中，当桑葛制剂中桑白皮与葛根的质量比为
2 I时，通过对10批桑葛制剂的指纹图谱测试和比较分析，总生物碱类活性成分共有模式指纹图谱(对照指纹图谱)中具有13个共有指纹峰，相对保留时间分别为I 号峰为 O. 514±0· 03,2 号峰即 S 峰为 I. 000±0· 000,3 号峰为 I. 401±0. 001，·4 号峰为 I. 427±0. 003，5 号峰为 I. 478±0. 009，6 号峰为 I. 522±0. 008，7 号峰为
1.917±0· 012,8 号峰为 2. 030±0. 007,9 号峰为 2. 212±0· 022，10 号峰为 2. 530±0. 044，11号峰为2. 617±0· 008，12号峰为3. 630±0. 017，13号峰为3. 740±0. 018。这些共有峰构成了桑葛制剂中总生物碱活性成分的指纹特征，可作为桑葛制剂总生物碱类活性成分的对照指纹图谱。在本发明提供的又一具体实施例中，当桑葛制剂中桑白皮与葛根的质量比为4 : 1、1 : 2和I : 4时，通过对10批桑葛制剂的指纹图谱测试和比较分析，得到的总生物碱类对照指纹图谱(对照图谱)中具有9个共有指纹峰，相对保留时间分别为I 号峰为 O. 512±0· 018，2 号峰即 S 峰为 I. 000±0· 000，3 号峰为 I. 450±0. 003，4 号峰为 I. 880±0. 002,5 号峰为 2. 154±0. 005,6 号峰为 2. 288±0. 006,7 号峰为
2.469±0. 006,8号峰为2. 559±0. 013,9号峰为2. 621±0. 010。这些共有峰构成了桑葛制剂中总生物碱活性成分的指纹特征，可作为桑葛制剂总生物碱类活性成分的对照指纹图
-i'TfeP曰。在得到上述对照指纹图谱的基础上，本发明提供了一种桑葛制剂的质量检测方法，包括以下步骤将待测桑葛制剂制成可用于液相色谱分离的溶液；按照上述构建方法所记载的步骤b)和c)获得待测桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分的指纹图谱；将待测桑葛制剂总黄酮类成分的指纹图谱与总黄酮类成分对照指纹图谱进行比较，以及将待测桑葛制剂总生物碱类成分指纹图谱与总生物碱类成分对照指纹图谱进行比较。以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》计算待测桑葛制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似性。相似度高，则表明待测桑葛制剂的质量较好；如果相似度低，则表明待测桑葛制剂的质量较差，总黄酮和总生物碱成分含量不达标。实施例I桑葛制剂总黄酮类对照指纹图谱的构建实施例I所采用的10批桑白皮药材和葛根的产地主要为河南、河北、安徽、广西、湖南，上述品种经过鉴别，符合药典标准，无明显生物差异性，具体情况请见表I:表I
Γ1Ε1产地是否有生物差异性~
桑白皮Y070609HN Μ I
桑白皮Y100513HB WitI
桑白皮Y100716HB Mt
桑白皮Y101113HB Mt
桑白皮Y101229HB MI
桑白皮Y110104HN ISI
桑白皮Y101230AH WW
桑白皮Y100826HN M
桑白皮Y101026HB Mt
桑白皮Y101102HN M
葛根G110111HN M ^
葛根G110112HN M ^
葛根G110112AH HI
葛根G110113AH WW
葛根G110114AH HI
葛根G110117HN M ^
葛根G110118HN M ^
权利要求
1.一种桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述方法包括 a)将所述桑葛制剂制备成液相分离用桑葛制剂溶液； b)总黄酮类成分指纹图谱的构建 将所述桑葛制剂溶液注入以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱仪，紫外检测器波长为250nm ;柱温为20_40°C ;以乙腈为流动相A，以O. 3%醋酸为流动相B进行梯度洗脱，得到所述总黄酮类成分指纹图谱；以及 c)总生物碱类成分指纹图谱的构建 将预定量的所述桑葛制剂溶液置于容器中，将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入所述容器中，水浴下反应；再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到所述桑葛制剂溶液，过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪，其中， 所述高效液相色谱仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，荧光检测器激发波长为254nm，发射波长为309nm，柱温为20_40°C，以乙腈为流动相C，O. I %醋酸为流动相D进行梯度洗脱，得到所述总生物碱类成分指纹图谱。
2.根据权利要求I所述的构建方法，其特征在于，所述步骤b)的梯度洗脱程序如下 O 20分钟流动相A体积比保持为10. 5%，流动相B体积比保持为89. 5% ; 20 60分钟流动相A体积比由10. 5 %线性上升到40 %，流动相B体积比由89. 5 %下降到60% ； 60 62分钟流动相A体积比由40 %线性下降到10.5%，流动相B体积比由60 %上升到 89. 5% ； 62 70分钟流动相A体积比保持为10. 5 %、流动相B体积比保持为89. 5 %，得到所述总黄酮类成分指纹图谱。
3.根据权利要求I所述的构建方法，其特征在于，所述步骤c)的梯度洗脱程序如下 O 50分钟，所述流动相C体积比由30 %上升到35 %，所述流动相D体积比由70 %下降到65% ； 50 60分钟，所述流动相C体积比保持为35%，所述流动相D体积比保持为65% ； 60 61分钟，所述流动相C体积比由35 %上升到100 %，所述流动相D体积比由65 %下降到0% ； 61 70分钟，所述流动相C体积比保持为100%，所述流动相D体积比保持为0% ； 70 71分钟,所述流动相C体积比由100%下降到30%，所述流动相D体积比由0%上升到70%，得到所述总生物碱类成分指纹图谱。
4.根据权利要求I所述的构建方法，其特征在于，所述步骤b)进一步包括将葛根素加入水中制得葛根素参照物溶液的步骤，所述葛根素参照物溶液与所述桑葛制剂溶液同时注入所述液相色谱仪。
5.根据权利要求I所述的构建方法，其特征在于，所述步骤c)进一步包括将I-脱氧野尻霉素盐酸盐溶入水中制得I-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液的步骤，所述I-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液与所述桑葛制剂溶液同时注入所述高效液相色谱仪。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的构建方法,其特征在于,所述总黄酮类成分的对照指纹图谱具有17个共有指纹峰，相对保留时间分别为I号峰为 O. 487±0. 009，2 号峰为 O. 536±0. 004，3 号峰为 S峰，为 I. 000±0. 000，4 号峰为 I. 099±0. 030，5 号峰为 I. 217±0· 002，6 号峰为 I. 308±0· 001，7 号峰为 I. 890±0. 002，.8 号峰为 2. 268±0. 008,9 号峰为 2. 314±0. 006，10 号峰为 2. 445±0. 010，11 号峰为.2.507±0. 028，12 号峰为 2. 549±0. 010，13 号峰为 2. 722±0· 012，14号峰为 2. 771±0· 012，.15 号峰为 2. 930±0. 007，16 号峰为 3. 423±0. 019，17 号峰为 3. 529±0. 017。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的构建方法，其特征在于，当所述桑葛制剂中桑白皮与葛根的质量比为2 I时，所述步骤c)得到的总生物碱类成分的对照指纹图谱具有13个共有指纹峰，相对保留时间分别为I号峰为 O. 514±0· 03，2 号峰为 S 峰，为 I. 000±0· 000，3 号峰为 I. 401 ±0. 001，4 号峰为 I. 427±0· 003，5 号峰为 I. 478±0. 009，6 号峰为 I. 522±0· 008，7 号峰为 I. 917±0· 012，.8号峰为 2. 030±0. 007,9 号峰为 2. 212±0. 022，10 号峰为 2. 530±0. 044，11 号峰为.2.617±0· 008，12 号峰为 3. 630±0. 017，13 号峰为 3. 740±0. 018。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的构建方法，其特征在于，当所述桑葛制剂中桑白皮与葛根的质量比为4 : 1、1 : 2和I : 4时，所述步骤c)得到的总生物碱类成分的对照指纹图谱中具有9个共有指纹峰，相对保留时间分别为I号峰为 O. 512±0. 018，2 号峰为 S 峰，为 I. 000±0. 000，3 号峰为 I. 450±0. 003，4 号峰为 I. 880±0. 002，5 号峰为 2. 154±0. 005，6 号峰为 2. 288±0. 006，7 号峰为 2. 469±0. 006，.8号峰为 2. 559±0. 013，9 号峰为 2. 621±0· 010。
9.一种桑葛制剂的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测方法包括 将待测桑葛制剂制备成液相分离用桑葛制剂溶液； 所述待测桑葛制剂总黄酮类成分和总生物碱类成分指纹图谱的获得按照权利要求I所述构建方法中的步骤b)和c)获得所述待测桑葛制剂的总黄酮类成分和总生物碱类成分指纹图谱；以及 将所述待测桑葛制剂的总黄酮类成分指纹图谱与权利要求6所述构建方法中的总黄酮类成分对照指纹图谱进行比较，以及将所述待测桑葛制剂的总生物碱类成分指纹图谱与权利要求7或8所述构建方法中的总生物碱类成分对照指纹图谱进行比较。
全文摘要
本发明提供了一种桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分指纹图谱的构建方法以及桑葛制剂的质量检测方法。上述指纹图谱的构建方法包括a)桑葛制剂溶液的制备，b)总黄酮类成分指纹图谱的构建，以及c)总生物碱类成分指纹图谱的构建。通过本发明提供的构建方法，得到了桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分的指纹图谱，该指纹图谱可用于桑葛制剂的质量控制。该构建方法和检测方法提高了桑葛制剂的质量控制标准，较为全面地反应了总黄酮类和总生物碱类活性成分的含量情况，而且具有稳定性好、重现性好的优点。
文档编号G01N30/02GK102890124SQ20111020412
公开日2013年1月23日 申请日期2011年7月20日 优先权日2011年7月20日
发明者段震文, 郭树仁, 薛岚 申请人:北京北大维信生物科技有限公司