专利名称：测量细胞介导免疫反应的试验的利记博彩app
技术领域：
本发明一般涉及基于免疫学诊断试验的领域。更特别地，本发明考虑检测细胞介导免疫反应的方法。本发明还能测定病情、治疗剂和环境污染物的免疫抑制作用。本发明的试验也能整合到病理学架构中以提供诊断报告系统和促进临床护理管理。
背景技术：
关于本说明书中作者的发表物详细书目在说明的结尾按字母顺序集中。在该说明书中参考的任何现有技术不应认为或不应作为承认或任何形式暗示表明该现有技术在任何国家中构成一般常识的一部分。基于免疫学的诊断提供检测各种病情的重要工具。考虑到免疫系统内组分的特异性，更是如此。尽管有此特异性，基于免疫学的诊断并不总是必须有足够敏感性以检测低水平的适应性和/或先天免疫活性，例如响应低度感染或出现持续低水平感染或显示免疫缺陷或任何免疫抑制形式的对象。因为适应性和先天免疫潜能，需要发展与细胞介导免疫反应相关的敏感性增强的诊断方法。在对已接触或正在显示诱导或关联免疫抑制的病情和试剂的对象尤其如此。基于免疫学的一种诊断方法形式涉及在分离细胞培养或全血液培养中用抗原或有丝分裂原激活T细胞，然后是检测效应分子，例如活化T细胞(也称为效应T细胞)生成的细胞因子。效应分子一般用诸如酶免疫分析，多元珠分析，酶联免疫斑点法(ELISpot)和流式细胞仪等技术检测。这些试验用于检测疾病特异性T细胞反应。评价对象的细胞介导免疫反应的能力在控制免疫缺陷和免疫抑制中特别重要。免疫缺陷的表征是有效增加免疫反应的能力下降。这种反应的受损或缺失可能来自原发性或获得性(继发性)免疫缺陷。原发性免疫缺陷(PID)可基因遗传，且表征为获得性或先天免疫系统的独特成分缺失(Hu 和 Gatti, Curr Opin Allergy Clin Immunol. 8 (6) : 540 - 546, 2008)。然而，大部分免疫缺陷是获得性(继发性)，并能由病原试剂诱导，如随着HIV感染发生；由药物诱导，如器官移植后免疫抑制治疗；由病情诱导，如在癌症(如白血病，淋巴瘤)中发生；或由环境污染物和污染物质诱导。免疫缺陷的分子基础多样化，然而，细胞介导免疫在调节很多观察到的临床表现中有重要作用。目前，免疫缺陷综合征以依赖于病原的特定方式诊断和管理。
例如，HIV感染的主要特点是⑶4+T细胞逐渐丧失和整体免疫功能受损，包括对病原例如巨细胞病毒(CMV)和乙型肝炎病毒(HBV)的抗原特异性获得性免疫反应受损(Douek等，Annu. Rev. Med. 60:471-84，2009 和 Chang 等，J. Virol. 83:7649-58，2009)。因此，CD4+T计数和病毒载量是HIV感染的重要替代标记，并已经广泛作为免疫功能障碍和预防治疗后渐进感染及免疫重建的有效预测(Hengel和Kovacs, J. Infect. Dis. 188 (12) : 1791-3，2003)。然而，当机会性感染在正常CD4+T细胞计数和低病毒载量存在情况下出现时，很多情况中临床疾病不与这些替代标记特定预测的免疫功能水平相关(Solomon等，J. Infect.Dis.187 :1915-23,2003)。相似地，还以特定方式监控患者的细胞免疫缺陷状态，所述患者进行实体器官移植(S0T)并接受抑制免疫系统药物(免疫抑制剂)作为抗排异测量的患者。通常，监控患者免疫抑制剂药物水平，以及监控常规血液计数和移植、医院或社区获得性感染的发生(Schrem等，Dtsch Arztebl Int. 106(9) :148 - 156，2009)。与很多当前用于监控和定义疾病状态相关免疫缺陷的标记关联的根本问题是细胞介导免疫的缺失。已开发了一些T细胞功能试验来检测对有丝分裂原，例如植物血细胞凝集素(PHA)、商陆促分裂原和伴刀豆球蛋白(ConA)的淋巴增殖反应然而，这些只检测T细胞功能能力；所述细胞是参与细胞介导免疫的细胞子集。重要的是，先天免疫机理对 宿主防御贡献重大变得日益明显，其通过单独作用或增加特异性T细胞反应(Cooper等，Hematology :314-30, 2003)因此，先天(自然杀伤(NK)细胞)和获得性(T细胞)免疫细胞的功能反应一起形成细胞介导免疫的更广泛分析。评价细胞介导免疫的能力临床上重要。例如，超过三千三百万成人和儿童被HIV感染(2008年全球艾滋病疫情报告(2008Report on the Global AIDS Epidemic), UNAIDS ；ISBN 9789291737116)并且目前每年全球进行约100，000例实体器官移植(Matesanz等，Transplant Proc. 41(6) :2297-301,2009)。先天免疫功能障碍已经涉及到HIV感染中，所述全血IFN-Y分析用于监控对TLR-7/8激动剂化合物(咪唑喹啉，R848)的先天免疫反应(Nowroozalizadeh等，Cytokine46:325-31,2009)。另外，检测功能T细胞反应(Cylex ImmuKnow (注册商标)，如US2003/0199006A1所述)的诊断设备检测来自PHA刺激CD4+细胞的ATP生成(Kowalski等，Jlmmunotoxicol. 4(3) :225_32，2007)。特定地，Cylex分析已经显示在SOT设置的临床应用，从而包括感染和排异在内的不良事件能得到有效控制。需要开发一种能评价对象中先天和获得性细胞介导免疫反应的组合功能状态的试验，并测定能诱导免疫抑制的病情和试剂。
发明内容
本发明提供评价对象中细胞介导免疫的状态和潜能的方法。本文所述方法能在获得性和先天免疫反应的共同刺激下部分预测。这提供目标对象中包括任何免疫抑制程度的细胞介导免疫潜能的预测检测。在一个实施方式中，全血或其部分的细胞与刺激淋巴细胞获得性和先天免疫反应的一种或多种试剂接触。细胞介导免疫反应的水平通过测量免疫细胞生成的效应分子的出现或水平来确定。在特定实施方式中，全血或其部分包括T细胞和NK细胞。一种或多种试剂刺激或加强通过T细胞的获得性免疫反应和通过NK细胞的先天免疫反应。因此，所述试验检测获得性和先天细胞介导免疫的组合潜能。与单独测量获得性或先天免疫活性相比,组合免疫反应提供细胞介导免疫反应性更好的检测。另外，所述试验能用小血液体积例如I μ 1-1000 μ I进行，并因此该试验适合手指点剌和基于毛细管取样。本文也考虑大体积试验，例如I. 5ml-200ml，包括5ml，IOml和20ml ο评价组合的获得性和先天免疫的能力很重要，例如，用于鉴定病情和治疗及环境试剂，所述试剂诱导可造成更大继发性感染风险的免疫抑制。因此，本发明的一方面描述检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测免疫细胞生成的免疫效应分子水平，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应水平。本发明的另一方面提供检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平的增加，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应水平，其中免疫反应的水平指示选自以下列表的疾病或病症的存在或缺失或水平或阶 段病原体感染，自体免疫疾病，癌症，炎症病症，接触毒性试剂，接触治疗试剂和免疫缺陷。本发明的另一方面描述检测对象中疾病或病症的出现、缺失、水平或阶段的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平的增加，其中免疫效应分子的水平指示疾病或病症。甚至本发明的另一方面提供监控对象响应疾病或病症的治疗方案的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与用于治疗方案的试剂接触，和在能加强获得性和先天免疫的一种或多种分子存在情况下，检测来自免疫细胞的免疫效应分子的出现或水平增加，其中免疫效应分子的水平指示治疗方案的功效。本发明还描述测定试剂是否诱导对象免疫抑制的方法，所述方法包括将接触试剂后的对象淋巴细胞来源与刺激获得性和先天免疫的一种或多种增强剂接触，并且检测来自淋巴细胞的效应分子的出现和水平，其中效应分子的水平确定所述试剂诱导的免疫抑制的水平。在一个实施方式中，血液样品用TLR激动剂和TLR激动剂共刺激。根据此方面，所述试剂可以是药物或环境毒药。本发明方法也能称为“试验”。本文的试验用于评价对象的普通免疫反应或检测对特定病情的免疫反应，所述病情例如自体免疫疾病，乳糜泻，癌症，致病生物或试剂的感染，接触毒性试剂或药物和免疫缺陷或免疫抑制病症，如由某一病情诱导。淋巴细胞来源是便捷的全血，但是本发明描述任何淋巴细胞来源的应用，包括含淋巴细胞的分离样品以及经历细胞分离和/或清除的样品。血液的微样品例如衍生自针刺和毛细管方法，也形成本发明的一部分。样品包括至少T细胞(T淋巴细胞)和NK细胞(NK淋巴细胞)。提及“免疫细胞”包括T细胞。可选地，单糖例如右旋糖或葡萄糖加入到反应混合物中。提及“全血”包括没有稀释的全血，和以约10%-约100%总样品分析体积(即反应混合物)的体积用于试验的全血,包括约50%-约100%和80%-约100%。分析体积范围可以为I μ 1_大于1000 μ 1，包括
I.5ml-200ml,例如 5ml_20ml。一类试剂可用于增强获得性和先天免疫或者两种或更多试剂可共同使用。示例包括用TCR激动剂和TLR激动剂共刺激。淋巴细胞也可接触特定抗原，以检测对象的抗原诱导获得性和先天免疫反应的组合能力。所述对象可以是人或非人动物。因此，本发明有人体医学，兽医和畜牧业应用。人在本发明实践中是特别有用的对象。另一个实施方法中，本发明描述检测病情是否诱导对象免疫抑制的方法，所述方法包括将有病情的对象淋巴细胞来源与加强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，并测量来自淋巴细胞的免疫效应分子的出 现或水平，其中免疫效应分子的水平指示诱导病情或与之相关的免疫抑制程度。试剂盒和皮肤试验也形成本发明的一部分。一个实施方式中，样品是全血，从包含试剂或孵育中加入试剂的收集管内收集。一般，血液在肝素存在下维持。当加入或后续加入血液时，肝素可在试管中。血液收集管的应用与标准自动化实验室系统相容，这些适合大量和随机存取抽样的分析。血液收集管也使处理成本最小化并减少实验室接触全血和血浆，因而降低实验室人员接触病原体的风险，所述病原体例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)。另夕卜，使用收集管进行孵育使所述试验的灵敏度高于先前所用24孔培养板。因此本发明提供增强的细胞介导免疫试验，所述试验包括在一个实施方式中使用收集管，可选单糖例如右旋糖和用加强获得性和先天免疫的一种或多种试剂的孵育步骤。培养步骤一般5-50小时，例如24小时。可选地加入抗原。免疫效应分子一般是细胞因子，例如但不限于IFN-Y，白细胞介素(例如IL-2，IL-4，IL-6，IL-10, IL-12或IL-13)，转化生长因子β (TGFβ )或粒细胞或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(分别是G-CSF和GM-CSF)。其他效应分子在表6中列出。免疫效应分子的出现或水平可根据分子自身水平或编码该分子基因表达的程度测定。本发明试验也能用于治疗方案管理的个性化医疗方法和/或作为病理学架构平台部分。此平台可以基于或不基于网络。因此也提供商业方法，其中在运输管中收集血液，然后在定义位点分析细胞介导免疫反应，随后结果通过合适结构以电子报告形式送达临床护理提供者。另外，可以小体积血液进行试验的能力对儿童，老年和体弱人群有用。附图
简要说明一些图片包括彩色表现或实体。彩色照片可向专利权所有人要求或从合适的专利局获得。如从专利局获得，可能需要交费。图IA-C是图形表述，显示来自全血培养物的单独刺激物IFN- Y反应。正常健康供体群散布，使用TCR刺激物有丝分裂原(A)和抗⑶3抗体(B)或TLR刺激物R848 (C)。图2A-C是图形表述，显示抗⑶3抗体(TCR激动剂)和不同TLR激动剂的协同。(A)TLR-2 ;Pam3CSK4 和脂甘露聚糖，(B)TLR-4 ；LPS (脂多糖)和(C)TLR-7/8 ；R848 (咪唑喹啉)化合物。图片上的数字显示相比抗CD3抗体单独刺激培养物，用TLR/抗CD3抗体共刺激培养物的IFN-Y反应增加倍数。图3是图形表述，显示使用TCR/TLR共刺激的协同以在正常健康个体中设定界限(临界值)IFN-y反应。这可设定健康人群参考范围，从而能观察免疫缺陷个体的IFN-Y反应下降。因此，若反应落在健康人群临界值(界限)内时，可推断来自药物治疗或疾病的免疫抑制测量。图4是图形表述，显示在来自治疗(TCR+TLR激动剂)和未治疗(NIL)全血的人血浆中检测多个分析物。通过用抗⑶3抗体(TCR激动剂)和TLR-7/8激动剂；R848 (咪唑喹啉)的组合刺激来治疗人全血。数个趋化因子，细胞因子和胞外信号分子只在用TCR和TLR激动剂同时刺激的全血的血浆中发现(蓝色条；TCR+TLR)。与未治疗全血相比，数个其他分子上调(红色条；NIL)。图5的图形显示与HIV感染和正常健康组中用全血和单独TCR激动剂或TLR激动剂刺激相比，全血培养物的双重刺激物(TCR+TLR) IFN-Y反应间观察到的协同。研究人群包括(i )未处理HIV阳性(源自南非)；和(ii )正常健康供体(源自澳大利亚)。人群中值见表7。图6的图形显示HIV感染组的组合激动剂(TCR+TLR)刺激的全血中，观察到的IFN- Y反应水平和CD4T细胞计数间的关联性。
图7是图形表述，显示在给定供体中能测定免疫抑制剂抑制浓度的TCR和TLR激动剂组合刺激全血。发明详述整篇说明书中，除非上下文需要另外说明，术语“包括”或其变体如“包含”或“含有”应理解为指示包括所述元件或整数或者元件或整数组而不排除任何其他元件或整数或者元件或整数组。本对象说明书所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数事物，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“T细胞”包括单个T细胞，和两个或更多T细胞；提及“试齐IJ”包括单一试剂，和两种或更多试剂；提及“发明”包括发明的单个或多个方面；等等。术语“T细胞”和“T淋巴细胞”在本文中可互换使用。“免疫细胞”包括T细胞和先天免疫系统细胞，例如NK细胞。提及“制剂”，“试剂”，“分子”和“化合物”包括单个实体和两个或多个这类实体的组合。“组合”也包括多个部分，例如单独提供制剂或单独使用或分散或分散前一起混合的两部分组合物。例如，多部分试验包可以有分别加强获得性和先天免疫维持的两种或更多制剂。在一个实施方式中，两种制剂是TCR激动剂和TLR激动剂。因此，本发明的此方面包括制剂，所述制剂干燥和疏松或固定到试验包的分隔墙或固体支持物。“组合”也包括含获得性免疫刺激物和先天免疫刺激物的融合或嵌合分子。获得性免疫刺激物可以通过T细胞受体依赖性或非依赖性方式调节获得性免疫。TCR激动剂的示例是抗CD3抗体。TLR激动剂包括TLR-7/8激动剂，例如R848 (咪唑喹啉)。本发明部分通过来自接触获得性和先天免疫增强的淋巴细胞的效应分子生成增加来预测。这使得试验更灵敏以评价对象中细胞介导免疫反应。因此，本发明提供检测、评价或另外监控对象中细胞介导反应的试验，这是通过测量由获得性和先天免疫增效剂刺激的T细胞效应分子的出现或水平。淋巴细胞与增强获得性和先天免疫的试剂接触。一般使用至少两种试剂，其中至少一种增强获得性免疫(通过T细胞)且至少一种增强先天免疫(通过NK细胞)。或者，使用包括获得性免疫刺激物和先天免疫刺激物的嵌合分子。获得性免疫刺激物可以通过T细胞受体依赖性或非依赖性方式。因此，本发明提供检测对象中细胞介导反应的方法，并进而提供检测病情或试剂是否诱导免疫抑制或与之相关的方法。所述方法也能诊断传染病，病理状况，测定免疫活性水平和评价对内源或异源试剂的获得性和先天免疫细胞反应，以及评价接触毒性试剂例如铍或其他毒剂。因此，本发明的方面描述检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测免疫细胞生成的免疫效应分子水平，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应水平。本发明的另一方面提供检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平的增加，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应水平，其中免疫反应的水平指示选自以下列表的疾病或病症的存在或缺失或水平或阶段病原体，自体免疫疾病，癌症，炎性病症和接触毒性试剂。而本发明的另一方面提供检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测来自 免疫细胞的免疫效应分子水平的增加，其中免疫效应分子的水平指示细胞介导免疫反应水平并指示选自以下列表的疾病或病症的存在或缺失或水平或阶段病原体，自体免疫疾病，癌症，炎性病症和接触毒性试剂。本发明的另一方面描述检测对象中疾病或病症的出现、缺失、水平或阶段的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平的增加，其中免疫效应分子的水平指示疾病或病症。本发明还描述测定试剂是否诱导对象中免疫抑制的方法，所述方法包括将接触试剂后的对象淋巴细胞来源与刺激获得性和先天免疫的一种或多种增强剂接触，并且检测来自淋巴细胞的效应分子的出现和水平，其中效应分子的水平确定所述试剂诱导的免疫抑制的水平。根据此方面，所述试剂可以是药物或环境毒药。在一个实施方式中，血液样品用TCR激动剂(如抗⑶3抗体)和TLR激动剂(如TLR-7/8激动剂，咪唑喹啉(R848))共刺激。因此，本发明描述检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与提高获得性和先天免疫的TCR激动剂和TLR激动剂接触，和检测从免疫细胞生成的免疫效应分子水平，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应水平。本发明的另一方面提供检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫的TCR激动剂和TLR激动剂接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平的增加，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应水平，其中反应水平指示选自以下列表的疾病或病症的存在或缺失或水平或阶段病原体感染，自体免疫疾病，癌症，炎性病症和接触毒性试剂。也提供增强获得性和先天免疫的TCR激动剂和TLR激动剂在细胞介导免疫反应的诊断试验生产中的应用，所述方法通过用增强获得性和先天免疫系统的一种或多种分子孵育淋巴细胞和检测效应分子的出现或提高。另一个实施方式中，本发明描述检测对象病情是否诱导免疫抑制的方法，所述方法包括将有病情的对象淋巴细胞来源与加强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，并测量来自淋巴细胞的免疫效应分子的出现或水平，其中免疫效应分子的水平指示诱导病情或与之相关的免疫抑制程度。也提供增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂在细胞介导免疫反应的诊断试验生产中的应用，所述方法通过用增强获得性和先天免疫的一种或多种分子孵育淋巴细胞和检测效应分子的出现或提高。此应用包括检测或监控疾病或病症的存在、缺失、水平或阶段，所述疾病或病症例如病原体感染、自身免疫疾病、癌症、炎性病症和/或接触药剂或毒性试剂如铍或其他环境毒剂。测量“免疫效应分子”包括检测一种或多种不同类型的分子。提及获得性和先天免疫潜能，包括刺激T细胞受体依赖性和/或非依赖性免疫和Toll样受体(TLR)依赖性免疫，例如由NK细胞介导。“免疫细胞”指包括“T细胞”。也可加入额外试剂以调控调节T细胞(T调节细胞)活性。后者包括抑制T调节细胞的抑制功能。本文所涵盖的调节T调节细胞的试剂包括CD25配体；编码JAKl或TYK2遗传物质的正义或反义寡核苷酸；中和抗体；包括寡核苷酸的CpG ;用作TLR调控剂的寡核苷酸；和其他TLR调控剂。在特定实施方式中，T调节细胞是活性被抑制的免疫反应抑制细胞。因此，本发明还针对检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象的调节T细胞来源与试剂接触，所述试剂选自(i)调节T细胞抑制子的抑制剂jp(ii)免疫增强细胞或其亚群的激活剂；并将T细胞与增强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，和测量来自免疫细胞的免疫效应分子水平的提高，其中免疫效应分子水平指示对象的细胞介导反应的水平。T调节功能的抑制剂或调节剂的示例包括⑶25配体，例如但不限于⑶25的多克隆或单克隆抗体或其抗原结合片段，CD25的人源化或去免疫多克隆或单克隆抗体或者多克隆或单克隆抗体的重组或合成形式。试剂的其他示例包括正义或反义核和分子，其针对编码Janus酪氨酸激酶I (JAKl)或酪氨酸激酶2 (TYK2)或JAKl或TYK2蛋白的小分子抑制剂的mRNA或DNA (即遗传物质)。提及“小分子”包括免疫球蛋白新抗原受体(IgNAR)，如描述于国际专利公开号WO 2005/118629。然而，合适试剂的其他示例包括刺激试剂，例如通过Toll样受体(TLR)和/或其他机理作用的CpG分子。因此，作为TLR调节试剂的包含一种或多种寡核苷酸的CpG也形成本发明的一部分。
可使用单一类型试剂或使用两个或更多类型试剂来调节T调节细胞。例如，所述试验可用CD25配体和JAK1/TYK2正义或反义寡核苷酸；CD25配体和TLR调节试剂JAKl/TYK2正义或反义寡核苷酸和TLR调节试剂；或⑶25配体，JAK1/TYK2正义或反义寡核苷酸和TLR调节试剂进行。或者，只用一种类型试剂。或者，可使用包括寡核苷酸和TLR调节试剂的CpG。根据本发明的不同方面，淋巴细胞/免疫细胞也可接触抗原以测量抗原诱导的获得性和先天免疫反应。提及“对象”，包括人类或非人物种，包括灵长类，家畜动物(如绵羊，牛，猪，马，驴，山羊)，实验室试验动物(如小鼠，大鼠，兔，豚鼠，猪，仓鼠)，伴侣动物(如狗，猫)，鸟类物种(如家禽鸟，飞鸟)，爬行动物和两栖动物。因此本发明可用于人体医学，以及畜牧和兽医和野生应用，包括马、狗和骆驼比赛行业。例如，本发明的试验通常可用于马的强度劳作(如赛跑)之前和/或之后以筛选运动诱发肺出血(EIPH)的证据。所有马在运动中显示一定程度的一些EIPH形式。然而，EIPH的亚临床形式难以检测。提及人，包括特定人群，例如儿童、老年和体弱人群以及特定种族的特定组和群体。另一个实施方式中，对象是人且细胞介导的免疫反应试验用于筛选对致病微生物、病毒和寄生虫的响应，发展潜能或监 控免疫情况，乳糜泻，监控对象响应肿瘤攻击和测定任何免疫缺陷或免疫抑制的出现。后者可出现，例如由包括多种化疗试剂的某些药物引起。或者，接触环境毒剂或污染物。免疫效应分子可以是响应细胞活化或抗原刺激生成的某一范围分子的任何一种。尽管干扰素(IFN)例如IFN-Y是特别有用的免疫效应分子，其他包括细胞因子，例如白介素(IL)如 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12 或 IL-13，肿瘤坏死因子 α (TNF-α )，转化生长因子β (TGF-β )，集落刺激因子(CSF)例如粒细胞(G)-CSF或粒细胞巨噬细胞(GM)-CSF，以及许多其他分子如补体通路中的补体或组分。可概括的其他效应分子包括表6所列的那些。T细胞受体激动剂的示例包括PHA，葡萄球菌肠毒素B(SEB)，CpG寡核苷酸，T细胞受体复合物的抗体和抗CD3抗体。不依赖T细胞受体的获得性免疫刺激物示例包括PMA和ConA。TLR激动剂包括Pam3CSK4(TLR-2配体)，脂甘露聚糖(TLR-2配体)，聚(I:C)-(TLR_3配体)，脂多糖(TLR-4配体)，咪唑喹啉化合物，例如R848(TLR-7/8配体)和CpG寡脱氧核苷酸(TLR-9配体)。至于选择TLR激动剂，激动剂按降序选自TLR-7/8>TLR-4>TLR-3>TLR-2。“CpG分子”指包括CpG序列或基序的寡核苷酸。本发明延伸至Toll样受体(TLR)功能或免疫系统其他方面的任何调节剂。本发明也提供检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与TLR激动剂和获得性免疫刺激物接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平，其中免疫效应分子的水平指示对象的细胞介导免疫反应。本发明试验能检测对象中疾病或病症的存在或缺失或水平或阶段，所述疾病或病症例如病原体感染，自身免疫疾病，癌症，接触炎性病症，接触药物，接触毒性试剂例如铍或其他毒剂或污染物以及免疫缺陷或免疫抑制例如由病情诱导。获得性和先天免疫试剂可以在反应容器中游离或固定于固体支持物，例如珠或反应容器的边或底部。试剂可用干燥形式，在使用前或期间重建。相似地，如果包括抗原，所述抗原可以游离或固定于反应容器，例如容器本身或珠或其他固体支持物。在一个实施方式中，从对象收集的样品一般存于血液收集管中。血液收集试管包括抽血管或其他类似容器。便利地，当样品是全血时，肝素化血液收集管。或者，血液收集后向试管加入肝素。尽管全血特别加以考虑且是最方便的样品，本发明也延伸到含有免疫细胞的其他样品，例如淋巴液，脑液，组织液和包括鼻腔和肺液在内的呼吸液以及经历细胞清除的样品。提及“全血”，包括没有被例如用组织培养，培养基，试剂，赋形剂等稀释的全血。在一个实施方式中，术语“全血”包括至少10%全血体积的试验样品(即反应混合物)。术语“至少 10% 体积”包括血液体积为 10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99 和100%的反应混合物总试验体积。可加入额外试剂,例如培养基,酶,赋形剂、抗原等,而没有离开包括“全血”的样品。也可使用小体积血液,例如I μ 1-1000 μ I。示例包括5μ1,10μ1,20μ1,50μ1,ΙΟΟμ I和500μ I和其间的部分。因此，样品体积包括约I μ I-约200ml，包括lml，5ml，IOml和 20ml。血液收集管的应用与标准自动化实验室系统相容，这些可适合大量和随机存取抽样的分析。血液收集管也使处理成本最小化并减少实验室接触全血和血浆，因而降低实验室人员接触病原体的风险，例如HIV，乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)。孵育步骤与收集管的组合特别有效并增强试验的灵敏度，如在单糖例如右旋糖或 葡萄糖存在下孵育细胞的可选特性。细胞介导免疫系统的细胞丧失在对象抽血后的延长期增加全血中免疫反应的能力，并且没有干扰的反应在抽血后约24小时常常严重降低或缺失。人工减少和对专门塑料制品的需求允许在护理地点用抗原进行细胞介导的刺激，例如医师诊所、诊所、门诊设施和兽医检验或农场上。一旦抗原刺激完成，不再需要新鲜和活性细胞。IFN-Y和其他细胞因子或免疫效应分子在血浆中稳定，因此，样品能在不需要特殊条件或快速要求情况下存储，或运输。孵育步骤可以为1-50小时，例如1-40小时或8_24小时或以下之间的时间段1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49 或 50 小时。24 小时时间段特别合适。检测细胞介导免疫的能力对评价对象能力重要，所述能力包括对病原体例如微生物或病毒或寄生虫感染的响应，增加自体免疫反应例如自体免疫糖尿病或保护抵御癌症或其他肿瘤情况或检测炎性病症或检测对象对毒性试剂例如铍的接触或敏感性。本文所述试验也能检测导致免疫抑制或药物诱导免疫抑制的病情。因此，提及“检测对象的细胞介导免疫反应”，包括和涵盖传染和自体免疫疾病的免疫诊断，免疫活性标记和炎症、癌症和毒性试剂的标记。重要的是，测定组合的获得性和先天免疫反应。另外，使用小体积血液的能力使得试验在例如儿童、老年和体弱人群中简单易行。在一个实施方式中，造成免疫抑制的病情包括慢性感染和癌症。能导致免疫抑制的药物包括那些用于治疗风湿性关节炎，癌症和炎症性肠病的药物。病原体或感染原包括细菌，寄生虫和病毒。细菌的示例包括革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物，例如分枝杆菌属(Mycobacterium),葡萄球菌属(Staphylococcus),链球菌属(Streptococcus),大肠杆菌(Escherichia coli),沙门氏菌(Salmonella),梭状芽抱杆菌属(Clostridium),志贺菌属(Shigella),变形杆菌属(Proteus),芽孢杆菌属(Bacillus),嗜血杆菌属(Hemophilus),伯疏氏螺旋体属(Borrelia)等。结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)以及结核分枝杆菌感染产生的病症例如结核病(TB)是特别有用的祀标。病毒示例包括肝炎病毒(乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒)，疱疹病毒和人类免疫缺陷病毒(HIV)和其产生的疾病。寄生虫包括疟原虫属(Plasmodium)，环癣，肝寄生虫等等。其他病原体包括真核细胞，例如酵母和真菌。
本文所述用于检测的自体免疫疾病包括脱发斑秃，强直性脊柱炎，抗磷脂综合征，自体免疫阿狄森氏病，多发性硬化症，肾上腺自体免疫疾病，自体免疫溶血性贫血，自体免疫性肝炎，自体免疫卵巢炎和睾丸炎，白塞氏病，大疱性类天疱疮，心肌病，口炎性腹泻皮炎(celiac sprue-dermatitis),慢性疲劳综合征(CFIDS),慢性炎症脱髓鞘,慢性炎症多神经病，变应性肉芽肿性血管炎，瘢痕性类天疱疮，CREST综合征，冷凝集素病，克隆氏病，疱疹样皮炎，盘状红斑狼疮，基本混合冷球蛋白血症，纤维组织肌痛，肾小球肾炎，格雷弗氏病，急性多发性神经根炎，桥本甲状腺炎，特发性肺纤维化，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，IgA肾病，胰岛素依赖型糖尿病(I型)，扁平苔藓，红斑狼疮，梅尼埃病，混合性结缔组织病，多发性硬化症，重症肌无力，心肌炎，寻常性天疱疮，恶性贫血，结节性多动脉炎，多软骨炎，多腺体综合征(polyglancular syndromes),风湿性多肌痛,多发性肌炎和皮肌炎，原发性无丙种球蛋白血症，原发性胆汁性肝硬化，牛皮癣，雷诺氏现象，赖特尔综合症，风湿热，类风湿关节炎，结节病，硬皮病，干燥综合征，全身肌强直综合征，系 统性红斑狼疮，多发性大动脉炎，颞动脉炎/巨细胞动脉炎，溃疡性结肠炎，葡萄膜炎，血管炎和白癜风。通常评价接触传染实体的对象的潜在或实际细胞介导反应非常重要。本发明方法也能用于检测这些情况是否出现以及疾病过程的水平和阶段。 能导致免疫抑制的其他病情包括炎症病情。本发明描述的炎症病情示例包括但不限于，导致某些区域变红、肿胀、疼痛和发热感觉响应的疾病和紊乱，其用于保护受损伤或疾病影响的组织。能使用本发明方法治疗的炎症疾病包括但不限于，痤疮，心绞痛，关节炎，吸入性肺炎，疾病，积脓症，肠胃炎，炎症，肠流感，NEC，坏死性肠炎，盆腔炎，咽炎，PID，胸膜炎，喉咙发炎，红肿，发红，喉咙痛，肠胃感冒和尿路感染，慢性炎症脱髓鞘多神经病，慢性炎症脱髓鞘多神经根神经病，慢性炎症脱髓鞘多神经病，慢性炎症脱髓鞘多神经根神经病。关于非人类应用，本发明也检测马的EIPH和各种动物病症，例如袋獾面部肿瘤。癌症治疗部分取决于细胞介导免疫和肿瘤本身或能导致免疫抑制的肿瘤治疗药物。本文所述肿瘤包括一组疾病和紊乱，特征为细胞生长失控(例如肿瘤形成)而这些细胞没有任何分化为专门且不同细胞。这些疾病和紊乱包括=ABLl原癌基因，AIDS相关癌症，听神经瘤，急性淋巴细胞性白血病，急性髓细胞白血病，腺样囊腺癌，肾上腺皮质癌，特发性髓样化生，秃头症，泡软组织肉瘤，肛门癌，再生障碍性贫血，星形胶质细胞瘤，共济失调毛细血管扩张症，基底细胞癌(皮肤)，膀胱癌，骨瘤，肠瘤，脑干胶质瘤，脑和中枢神经系统肿瘤，乳腺癌，中枢神经系统肿瘤，类癌瘤，子宫颈癌，儿童脑肿瘤，儿童癌症，儿童白血病，儿童软组织肉瘤，软骨肉瘤，绒毛膜癌，慢性淋巴细胞性白血病，慢性粒细胞白血病，结直肠癌，皮肤T细胞淋巴瘤，隆凸性皮肤纤维肉瘤，促纤维组织增生性小细胞癌，导管癌，内分泌癌，子宫内膜癌，室管膜瘤，食道癌，尤文氏肉瘤，肝外胆道癌，眼癌，眼黑色素瘤，视网膜母细胞瘤，输卵管癌，范科尼贫血，纤维肉瘤，胆膀胱癌，胃癌，胃肠道癌，胃肠道类癌肿瘤，泌尿生殖系统的癌症,生殖细胞瘤,妊娠滋养细胞疾病肿瘤,神经胶质瘤,妇科癌症,恶性血液肿瘤，毛细胞白血病，头颈癌，肝细胞癌，遗传乳腺癌，组织细胞增生症，何杰金氏病，人类乳头状瘤病毒，水囊状胎块，高钙血症，下咽癌，眼内黑色素瘤，胰岛细胞癌，卡波西肉瘤，肾癌，郎格罕细胞组织细胞增多病，喉头癌，平滑肌肉瘤，白血病，李-佛美尼综合症，唇癌，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴性水肿，淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，男性乳腺癌，肾恶性横纹肌肿瘤，髓母细胞瘤，黑色素瘤，默克尔细胞癌，间皮瘤，转移癌，口腔癌，多发性内分泌肿瘤，蕈样肉芽肿，骨髓增生异常综合征，骨髓瘤，骨髓增生性疾病，鼻腔癌，鼻咽癌，肾胚细胞瘤，神经母细胞瘤，神经纤维瘤病，奈梅亨破损综合症，非黑色素瘤皮肤癌，非小细胞肺癌(NSCLC)，眼癌，食道癌，□腔癌，□咽癌，骨肉瘤，造□术卵巢癌，胰腺癌，鼻窦癌，副甲状腺癌，腮腺肿瘤，阴茎癌，周边神经外胚层肿瘤，垂体肿瘤，真性红细胞增多症，前列腺癌，罕见癌症和相关疾病，肾细胞癌，成视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，先天性皮肤异色症，唾液腺肿瘤，肉瘤，神经鞘瘤，塞扎里综合征，皮肤癌，小细胞肺癌(SCLC)，小肠肿瘤，软组织肉瘤，脊髓肿瘤，鳞状细胞癌(皮肤)，胃癌，滑膜肉瘤，睾丸癌，胸腺癌，甲状腺癌，移行细胞癌(膀胱)，移行细胞癌(肾-肾盂-/_输尿管)，滋养细胞癌，尿道癌，泌尿系统的癌症，膜板块蛋白，子宫肉瘤，子宫癌，阴道癌，外阴癌，沃尔登斯特伦氏巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。如上所示,淋巴细胞免疫细胞还可接触抗原以测量抗原诱导的获得性和先天组合免疫。 免疫效应分子的检测可以在蛋白或核酸水平测量。因此，免疫效应分子的“出现或水平”包括直接和间接数据。例如，细胞因子mRNA的高水平是显示细胞因子水平增加的间接数据。免疫效应物的配体对检测和/或定量这些分子特别有用。免疫效应物的抗体特别有用。本文所述试验的技术为本领域已知,并包括,例如放射性免疫测定、夹心法,ELISA和酶联免疫斑点法。“抗体”包括抗体部分，哺乳动物化(例如人源化)抗体，去免疫抗体，重组或合成抗体以及杂交和单链抗体。对于人皮肤实验，本文特定描述人源化或去免疫抗体用于检测效应物分子。多克隆和单克隆抗体都可用免疫效应物分子或其抗原片段免疫得到，并任一种类都可用于免疫分析。获取两种血清的方法为本领域熟知。多克隆血清不太优选，但相对易于制备，通过向合适实验室动物注射有效剂量的免疫效应物或其抗原部分，从动物收集血清，并用任何已知免疫吸附剂技术分离特定血清。尽管此种方法生产的抗体可用于几乎任何类型免疫分析，但是它们通常因为产品的潜在异质性而不受青睐。免疫分析中应用单克隆抗体特别有用，因为其能大量生产且产品具有同质性。通过融合永生细胞系和对免疫原性制品敏感的淋巴细胞获得用于单克隆抗体生产的杂交瘤细胞系制备可用本领域技术人员熟知的技术完成。因此，另一方面本发明描述检测对象含淋巴细胞的样品中免疫效应分子的方法，所述方法包括将样品或等分样品与对免疫效应分子或其抗原片段特异的抗体在足以形成抗体-效应物复合体情况下接触一段时间，并且然后检测复合体，其中在淋巴细胞与增强获得性和先天免疫系统的一种或多种试剂孵育后产生免疫效应分子。“样品”包括全血或其包括淋巴细胞的部分。此方法包括平板或球形固体支持物上的微阵列，宏阵列和纳米阵列。可用微或宏阵列。“样品”也包括约Iy 1-1000μ I的小体积样品，包括 5 μ 1，10μ 1，20μ 1，50μ I 和 ΙΟΟμ I。广泛的免疫试验技术可参见美国专利号4，016, 043，4，424，279和4，018, 653。下面是一类试验的描述。没有标记的抗体固定于固体底物，待检测免疫效应分子(如细胞因子)的样品与结合分子接触。经过一段合适时间的孵育，时间足以形成抗体-免疫效应物分子复合体，然后加入对效应物分子特异的二抗、标记有能产生检测信号的报道分子，孵育且时间足以形成另一抗体-效应物-标记抗体复合物。洗去任何没有反应的物质，通过观察报道分子产生的信号来测定效应物分子的存在。结果可以通过简单观察可见信号来定量，或通过对比包括已知抗原量的对照样品来定量。此广义技术为本领域技术人员熟知，可以是多种变化中的任一种。在这些试验中，对即时免疫效应物特异的一抗可共价或被动结合到固体表面。通常固体表面是玻璃或聚合体，最常用聚合体是纤维素，聚丙烯，尼龙，聚苯乙烯，聚氯乙烯或聚丙烯。固体支持物可以是试管，珠，球，微孔板盘，或其他适合作免疫分析的合适表面。结合过程为本领域熟知，并通常由共价交联结合或物理吸附组成，洗涤聚合体-抗体复合物以制备检测样品。待检测的等份样品随后加入固相复合物并在合适情况下(例如约20° C-约40° C)孵育足够时间(例如2-120分钟或更合适的时间，过夜)以使结合抗体中存在的任何亚基。孵育期后，洗涤抗体亚基固相并干燥，用对部分效应分子特异的二抗孵育。二抗连接报道分子，用于指示二抗与效应分子的结合。
此试验存在很多变化。一个特别有用的变化是所有或很多成分基本同时混合时同时分析。另外，抗体与细胞因子的结合可以通过与针对所提及一抗的经标记抗体的结合来测定。通过本说明书所用的“报道分子”，指通过分子其化学性质提供可分析鉴定的信号，能检测结合抗原的抗体。检测可以是定性或定量。这类试验中最常用的报道分子是酶，荧光团或含分子的放射性核素(即放射性同位元素)和化学发光分子。合适荧光团的示例在表I中提供。酶免疫测定的情况中，酶一般通过戊二醛或过碘酸盐与二抗偶联。然而，如已公知，存在本领域技术人员可用的广泛不同偶联技术。常用的酶包括辣根过氧化物酶，葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶等。与特定酶一起使用的底物通常选择为在相应酶水解后产生可检测的颜色变化。合适酶的示例包括碱性磷酸酶和过氧化物酶。也可以使用荧光底物，产生荧光产物而不是上面提及的发色底物。所有情况中，将酶标记的抗体加入第一抗体-抗原复合物中，使之结合，然后洗去多余试剂。然后将包括合适底物的试剂加入抗体-抗原-抗体复合物中。底物与连接二抗的酶反应，产生定性可见信号，通常可用分光光度分析进一步定量，指示样品中存在的抗原量。再者，本方面延伸至基本同时的分析。或者，荧光化合物例如荧光素和若丹明，可以化学偶联于抗体上而不改变其结合能力。当用特定波长光照射激活时，荧色物标记抗体吸收光能，诱导分子激发性状态，然后发射用光学显微镜视觉可检测的特征性颜色的光。荧光标记抗体可结合第一抗体-抗原复合物。洗去未结合试剂后，剩余三元复合物随后暴露在合适波长光下，观察到的荧光指示感兴趣抗原的存在。免疫荧光和酶免疫分析技术在本领域都已完善，并特别优选用于本方法。然而，也可使用其他报道分子，例如放射性同位素，化学发光或生物发光分子。可以使用一系列其他检测系统，包括胶体金和本发明涵盖的所有这种检测系统。本发明也包括遗传分析，例如涉及PCR分析以检测编码免疫效应物的遗传序列的RNA表达产物。在一个实施方式中，使用引物对完成PCR，引物之一或两者一般用相同或能给出可区分信号的不同报道分子标记。使用荧光团在本发明实践中特别有用。合适荧光团的示例可选自表I中给出的列表。其他标记包括发光和磷光以及红外染料。这些染料或荧光团也可用作抗体的报道分子。
表I合适突光团列表
权利要求
1.一种检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞样品来源与增强获得性和先天免疫系统的一种或多种试剂接触，和检测来自免疫细胞的免疫效应分子水平的出现或增加，其中免疫效应分子的出现或水平指示对象的细胞介导免疫反应。
2.一种测定试剂是否诱导对象免疫抑制的方法，所述方法包括将接触试剂后的对象淋巴细胞样品来源与刺激获得性和先天免疫的一种或多种增强剂接触，并且检测来自淋巴细胞的免疫效应分子的出现和水平，其中免疫效应分子的水平确定试剂诱导的免疫抑制的水平。
3.—种检测对象病情是否诱导免疫抑制的方法，所述方法包括将有病情的对象淋巴细胞样品来源与加强获得性和先天免疫的一种或多种试剂接触，并测量来自淋巴细胞的免疫效应分子的出现和水平，其中免疫效应分子的水平指示病情诱导或与之相关的免疫抑制程度。
4.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象是人。
5.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品是未稀释的全血。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述样品是包括待分析样品体积约10%-100%的全血。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述全血包括待分析样品体积的约50%-I00%ο
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述全血包括待分析样品体积的约80%-I00%ο
9.如权利要求I或2或6中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品是Iμ 1-1000 μ I的小体积血液。
10.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述全血还用抗原孵育。
11.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述全血收集在包含肝素的试管中。
12.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述加强获得性免疫反应的试剂是T细胞受体激动剂。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述试剂选自CpG寡核苷酸，T细胞受体复合物抗体，植物血细胞凝集素和抗CD3抗体。
14.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述加强先天免疫系统的试剂是Toll样受体(TLR)激动剂。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述TLR激动剂通过TLR-7/8，TLR-4，TLR-3 或 TLR-2 刺激。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述激动剂选自TLR配体，脂甘露聚糖，聚(I:C)-，和咪唑喹啉，R848。
17.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述加强获得性免疫系统的试剂通过T细胞受体非依赖性方式刺激。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述试剂选自伴刀豆球蛋白，商陆促分裂原和乙酸肉豆蘧佛波醇(PMA)。
19.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫效应分子是细胞因子。
20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述细胞因子是IFN-Y。
21.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫效应物用其特异性抗体检测。
22.如权利要求21中所述的方法，其特征在于，所述免疫效应物使用ELISA检测。
23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述免疫效应物使用酶联免疫斑点法检测。
24.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象由选自分枝杆菌属，葡萄球菌属，链球菌属，伯疏氏螺旋体属，大肠杆菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌属，志贺菌属，变形杆菌属，芽孢杆菌属，疱疹病毒，乙型或丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒(HIV)的病原体感染或有其产生的疾病。
25.如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述病情是结核分枝杆菌感染或结核病(TB)。
26.如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述病情是肝炎病毒或HIV感染。
27.如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述对象有选自下述的病情脱发斑秃，强直性脊柱炎，抗磷脂综合征，自体免疫阿狄森氏病多发性硬化症，肾上腺自体免疫疾病，自体免疫溶血性贫血，自体免疫肝炎，自体免疫卵巢炎和睾丸炎，白塞氏病，大疱性类天疱疮，心肌病，口炎性腹 写皮炎(celiac sprue-dermatitis),慢性疲劳综合征(CFIDS),慢性炎症脱髓鞘，慢性炎症多神经病，变应性肉芽肿性血管炎，瘢痕性类天疱疮，CREST综合征，冷凝集素病，克隆氏病，疱疹样皮炎，盘状红斑狼疮，基本混合冷球蛋白血症，纤维组织肌痛，肾小球肾炎，格雷弗氏病，急性多发性神经根炎，桥本甲状腺炎，特发性肺纤维化，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，IgA肾病，胰岛素依赖型糖尿病(I型)，扁平苔藓，红斑狼疮，梅尼埃病，混合性结缔组织病，多发性硬化症，重症肌无力，心肌炎，寻常性天疱疮，恶性贫血，结节性多动脉炎，多软骨炎，多腺体综合征，风湿性多肌痛，多发性肌炎和皮肌炎，原发性无丙种球蛋白血症，原发性胆汁性肝硬化，牛皮癣，雷诺氏现象，赖特尔综合症，风湿热，类风湿关节炎，结节病，硬皮病，干燥综合征，全身肌强直综合征，系统性红斑狼疮，多发性大动脉炎，颞动脉炎/巨细胞动脉炎，溃疡性结肠炎，葡萄膜炎，血管炎，白癜风和炎症性肠病。
28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述疾病是乳糜泻。
29.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述疾病是自体免疫糖尿病。
30.如权利要求I或2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象有选自下列的癌症ABL1原癌基因，AIDS相关癌症，听神经瘤，急性淋巴细胞性白血病，急性髓细胞白血病，腺样囊腺癌，肾上腺皮质癌，特发性髓样化生，秃头症，泡软组织肉瘤，肛门癌，再生障碍性贫血，星形胶质细胞瘤，共济失调毛细血管扩张症，基底细胞癌(皮肤)，膀胱癌，骨瘤，肠瘤，脑干胶质瘤，脑和中枢神经系统肿瘤，乳腺癌，中枢神经系统肿瘤，类癌瘤，子宫颈癌，儿童脑肿瘤，儿童癌症，儿童白血病，儿童软组织肉瘤，软骨肉瘤，绒毛膜癌，慢性淋巴细胞性白血病，慢性粒细胞白血病，结直肠癌，皮肤T细胞淋巴瘤，隆凸性皮肤纤维肉瘤，促纤维组织增生性小细胞癌，导管癌，内分泌癌，子宫内膜癌，室管膜瘤，食道癌，尤文氏肉瘤，肝外胆道癌，眼癌，眼黑色素瘤，视网膜母细胞瘤，输卵管癌，范科尼贫血，纤维肉瘤，胆膀胱癌，胃癌，胃肠道癌，胃肠道类癌肿瘤，泌尿生殖系统的癌症，生殖细胞瘤，妊娠滋养细胞疾病肿瘤，神经胶质瘤,妇科癌症,恶性血液肿瘤,毛细胞白血病,头颈癌,肝细胞癌,遗传乳腺癌，组织细胞增生症，何杰金氏病，人类乳头状瘤病毒，水囊状胎块，高钙血症，下咽癌，眼内黑色素瘤，胰岛细胞癌，卡波西肉瘤，肾癌，郎格罕细胞组织细胞增多病，喉头癌，平滑肌肉瘤，白血病，李-佛美尼综合症，唇癌，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴性水肿，淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，男性乳腺癌，肾恶性横纹肌肿瘤，髓母细胞瘤，黑色素瘤，默克尔细胞癌，间皮瘤，转移癌，口腔癌，多发性内分泌肿瘤，蕈样肉芽肿，骨髓增生异常综合征，骨髓瘤，骨髓增生性疾病，鼻腔癌，鼻咽癌，肾胚细胞瘤，神经母细胞瘤，神经纤维瘤病，奈梅亨破损综合症，非黑色素瘤皮肤癌，非小细胞肺癌(NSCLC)，眼癌，食道癌，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，造口术卵巢癌，胰腺癌，鼻窦癌，副甲状腺癌，腮腺肿瘤，阴茎癌，周边神经外胚层肿瘤，垂体肿瘤，真性红细胞增多症，前列腺癌，罕见癌症和相关疾病，肾细胞癌，成视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，先天性皮肤异色症，唾液腺肿瘤，肉瘤，神经鞘瘤，塞扎里(Sezary)综合征，皮肤癌，小细胞肺癌(SCLC)，小肠肿瘤，软组织肉瘤，脊髓肿瘤，鳞状细胞癌(皮肤)，胃癌，滑 膜肉瘤，睾丸癌，胸腺癌，甲状腺癌，移行细胞癌(膀胱)，移行细胞癌(肾-肾盂-/_输尿管)，滋养细胞癌，尿道癌，泌尿系统的癌症，膜板块蛋白(uroplakin),子宫肉瘤，子宫癌，阴道癌，外阴癌，沃尔登斯特伦氏巨球蛋白血症和肾母细胞瘤。
31.一种检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与T细胞受体激动剂和Toll样受体激动剂接触，和检测来自T细胞的免疫效应分子水平的出现或增加，其中免疫效应分子的出现或水平指示对象的细胞介导免疫反应水平，其中反应水平指示选自以下的疾病或病症的存在或缺失或水平或阶段病原体感染，自体免疫疾病，癌症，炎性病症和接触毒性试剂。
32.—种检测对象中细胞介导免疫反应活性的方法，所述方法包括将对象淋巴细胞来源与通过T细胞受体非依赖性方式加强获得性免疫系统的试剂和toll样受体激动剂接触，和检测来自T细胞的免疫效应分子水平的出现或增加，其中免疫效应分子的出现或水平指示对象的细胞介导免疫反应水平，其中反应水平指示选自以下的疾病或病症的存在或缺失或水平或阶段病原体感染，自体免疫疾病，癌症，炎性病症和接触毒性试剂。
33.加强获得性和先天免疫系统的一种或多种试剂在生产细胞介导免疫反应诊断试验中的应用，所述诊断试验将先天和获得性刺激物与包括T细胞和NK细胞的来源孵育，并且检测效应分子的出现或提高。
34.使用如权利要求33所述的应用，其特征在于，所述使用的两种试剂是TCR激动剂和TLR激动剂。
35.一种允许用户测定对象细胞介导免疫反应状态的方法，所述方法包括 (a)通过通讯网络接收来自用户的数据，所述数据的形式是参比对照能关联到细胞介导免疫反应状态的免疫效应分子水平或浓度，在淋巴细胞接触一种或多种能强化获得性和先天免疫反应的试剂之后测量免疫效应分子； (b)通过单变量或多变量分析处理对象数据得出免疫反应状态值； (C)根据免疫反应状态值与预定值的比较结果测定对象状态；和 Cd)通过通讯网络将对象状态指标发送用户。
全文摘要
本发明一般涉及基于免疫学的诊断试验领域。更特定地，本发明描述检测细胞介导免疫反应的方法。本发明还能测定病情，治疗试剂和环境污染物的免疫抑制作用。本发明的试验也能整合到病理学架构中以提供诊断报告系统和促进临床护理管理。
文档编号G01N33/53GK102713619SQ201080058756
公开日2012年10月3日 申请日期2010年12月21日 优先权日2009年12月23日
发明者J·伯勒, R·达拉斯海拉斯 申请人:塞尔雷斯蒂斯有限公司