专利名称：一种快速检测黄曲霉毒素含量的方法
技术领域：
本发明属于食品安全检验技术领域，具体涉及一种快速检测食品、饲料中黄曲霉 毒素残留含量的方法。
背景技术：
黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物。当粮食未能及时晒干及储藏 不当时，往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素。在湿热地区的食品和饲料中 出现黄曲霉毒素的机率很高。黄曲霉毒素主要污染饲料、粮油食品、动植物食品等；如饲料、 花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果、辣椒类等中均会有黄曲霉毒素污染。其中以饲料、辣椒、 花生和玉米污染最严重。而当人们误食了被黄曲霉毒素污染的食物后会对身体健康产生危 害。目前，对于黄曲霉毒素污染的提前预防还比较困难。因此，如何对各种食品原材料中的 黄曲霉毒素残留进行快速检测，从源头上避免黄曲霉毒素进入生产和消费环节就显得尤为 重要。现有技术中，黄曲霉毒素的快速检测方法主要为酶联免疫法，饲料企业、食品加工 企业中所用的检测试剂盒大多是ELISA快速检测试剂盒。但该类试剂盒还存在检测花费 高，检测步骤较复杂等问题。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种新的快速检测黄曲霉毒素含量 的方法，在保证检测准确度和检测安全性的同时，降低检测成本，缩短检测时间。本发明的目的通过以下技术方案实现。除非另有说明，本发明所采用的百分数均为重量百分数。—种快速检测黄曲霉毒素含量的方法，包括以下步骤1、将待测样品粉碎后称取0. 5 50g置于烧杯中，加入萃取剂10 100ml，振摇 2 IOmin或超声萃取3 30min ；所述的萃取剂为三氯甲烷、二氯甲烷、正丁醇、苯、异丁 醇、异丙醇、甲基乙基酮、乙酸乙酯、四氢呋喃甲基异丁醇、醋酸丁酯、丙酮、乙腈或是甲醇浓 度彡20%的甲醇乙腈混合物中的一种；待测样品的称取质量按下式确定待测样品质量=(黄曲霉毒素Bl标准品浓度 yg/mix供试品体积ml)/黄曲霉毒素的限量标准；其中，黄曲霉毒素的限量标准参考GB 13078-2001《饲料卫生标准》和GB 2715-2005《粮食卫生标准》；黄曲霉毒素B 1标准品浓 度为 0. 02 lyg/ml。所述的待测样品为饲料、花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果或辣椒类中的一种。将待测样品粉碎至过20目筛网。2、萃取物过滤后固液分离，滤液在水浴45 85 °C下浓缩、挥发，定容至1 5ml得 供试品；3、在长度> 8cm的薄层硅胶板上分别点加同量的供试品和黄曲霉毒素Bl标准品，然后分别在供试品和黄曲霉毒素Bl标准品样点中点加5 30 μ 1的衍生试剂；所述的衍 生试剂为醋酸、盐酸、硝酸、硫酸、草酸、酒石酸、抗坏血酸、水杨酸、苹果酸或柠檬酸中的一 种；其中，盐酸、硝酸和硫酸的浓度为体积百分数0. 5 20%，其余酸的浓度为体积百分数 0. 5 50% ；然后将薄层硅胶板上的供试品和黄曲霉毒素Bl标准品用展开剂展开；所述的展开方式为二次展开，展开剂分为1号展开剂和2号展开剂，其中，1号展开 剂为乙醚、石油醚、己烷、环己烷或四氯化碳中的一种，2号展开剂为苯-丙酮、氯仿-丙酮、 环己烷-乙酸乙酯或苯-乙酸乙酯的一种；二次展开的具体操作方式有两种一种是先使 用1号展开剂竖向展开，然后再使用2号展开剂竖向展开，1号展开剂展开直径> 5cm，2号 展开剂展开直径比1号展开剂展开直径小0. 3 1. 5cm ；另一种是先用1号展开剂横向展 开，再用2号展开剂竖向展开；所述的供试品与黄曲霉毒素Bl标准品点样总量相同，样点大小保持一致，直径在 0. 2 0. 6cm ；点样一次性点完或是少量多次点完；4、待供试品和黄曲霉毒素标准品Bl挥干后，在波长300 400nm紫外灯下对两者 的荧光强弱进行比较，衍生后黄曲霉毒素Bl为蓝紫色，如果供试品样点出现与黄曲霉毒素 标准品Bl颜色相同、比移值相同的荧光条带，且供试品的荧光强度强于黄曲霉毒素标准品 Bi，则表示供试品中黄曲霉毒素含量超标，否则即为合格。本发明相对于现有技术具有以下优点(1)溶剂用量小，环境污染小，样品处理简单。整个测定时间在20 30min/样次， 可以批量测定样品。(2)不需要专业人员，只需配制小型仪器设备(紫外灯，微量注射器等)，携带方 便，可进行现场快速检测。(3)检测方法灵活，样品质量的确定和标准品的选择可以根据情况而定。(4)不再局限于使用现行国家标准中推荐的三氟乙酸作为衍生剂，带来两个明显 的好处，一是克服了三氟乙酸对操作者及环境的危害及污染，二是提高了方法灵敏度，降低 了检测限，本方法黄曲霉毒素Bl最低检出量0. 00032μ g，最低检出限3μ g/kg。本发明与国家标准中的薄层色谱法的详细比较可见表一
权利要求
一种快速检测黄曲霉毒素含量的方法，包括以下步骤(1)将待测样品粉碎后称取0.5～50g置于烧杯中，加入萃取剂10～100ml，振摇2～10min或超声萃取3～30min；所述的萃取剂为三氯甲烷、二氯甲烷、正丁醇、苯、异丁醇、异丙醇、甲基乙基酮、乙酸乙酯、四氢呋喃甲基异丁醇、醋酸丁酯、丙酮、乙腈或是甲醇浓度≥20％的甲醇乙腈混合物中的一种；(2)萃取物过滤后固液分离，滤液在水浴45～85℃下浓缩、挥发，定容至1～5ml得供试品；(3)在长度≥8cm的薄层硅胶板上分别点加同量的供试品和黄曲霉毒素B1标准品，然后分别在供试品和黄曲霉毒素B1标准品样点中点加5～30μl的衍生试剂；然后将薄层硅胶板上的供试品和黄曲霉毒素B1标准品用展开剂展开；(4)待供试品和黄曲霉毒素标准品B1挥干后，在波长300～400nm紫外灯下对两者的荧光强弱进行比较，衍生后黄曲霉毒素B1为蓝紫色，如果供试品样点出现与黄曲霉毒素标准品B1颜色相同、比移值相同的荧光条带，且供试品的荧光强度强于黄曲霉毒素标准品B1，则表示供试品中黄曲霉毒素含量超标，否则即为合格。
2.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于待测样品的 称取质量按下式确定待测样品质量=(黄曲霉毒素Bl标准品浓度yg/mlX供试品体积 ml)/黄曲霉毒素的限量标准；其中，黄曲霉毒素的限量标准参考GB 13078-2001《饲料卫生 标准》和GB 2715-2005《粮食卫生标准》；黄曲霉毒素Bl标准品浓度为0. 02 1 μ g/ml。
3.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于所述的待测 样品为饲料、花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果或辣椒类中的一种。
4.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于将待测样品 粉碎至过20目筛网。
5.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于所述的衍 生试剂为醋酸、盐酸、硝酸、硫酸、草酸、酒石酸、抗坏血酸、水杨酸、苹果酸或柠檬酸中的一 种；其中，盐酸、硝酸和硫酸的浓度为体积百分数0. 5 20%，其余酸的浓度为体积百分数 0. 5 50%。
6.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于所述的展开 方式为二次展开，展开剂分为1号展开剂和2号展开剂，其中，1号展开剂为乙醚、石油醚、己 烷、环己烷或四氯化碳中的一种，2号展开剂为苯-丙酮、氯仿-丙酮、环己烷-乙酸乙酯或 苯-乙酸乙酯的一种；二次展开的具体操作方式有两种一种是先使用1号展开剂竖向展 开，然后再使用2号展开剂竖向展开，1号展开剂展开直径> 5cm，2号展开剂展开直径比1 号展开剂展开直径小0. 3 1. 5cm ；另一种是先用1号展开剂横向展开，再用2号展开剂 竖向展开。
7.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于所述的供试 品与黄曲霉毒素Bl标准品点样总量相同，样点大小保持一致，直径在0. 2 0. 6cm ；点样一 次性点完或是少量多次点完。
全文摘要
本发明公开了一种快速检测黄曲霉毒素含量的方法。待测样品粉碎后置于烧杯中，加入萃取剂振摇或超声萃取。过滤，滤液水浴蒸发，定容后得供试品。在薄层硅胶板上分别点加同量的供试品和黄曲霉毒素B1标准品，并在样点中点加衍生试剂，再分别用展开剂展开。在紫外光灯下对两者的荧光强弱进行比较，以判断供试品中黄曲霉毒素的含量是否超标。本发明溶剂用量小，样品处理简单，测定时间短。不需要专业人员，只需配制小型仪器设备，特别适合现场快速检测。有效克服了三氟乙酸对操作者及环境的危害及污染，提高了方法灵敏度，其最低检出量0.00032μg，最低检出限3μg/kg。
文档编号G01N21/78GK101949854SQ20101028068
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月14日 优先权日2010年9月14日
发明者吕金玲, 李冉, 杨亚玲 申请人:云南健牛生物科技有限公司