专利名称：基于聚合物微球变化的编码检测方法
技术领域：
本发明涉及生物医用检测技术领域，主要涉及一种基于聚合物微球变化的编码检 测方法。本发明是建立在免疫反应以及基因杂交特异性反应的基础上，对编码技术的创新， 可同时实现多个待测样本或指标的检测，简单、快速、可靠。
背景技术：
在生物医学领域中，人们对生命现象的观察和研究已经深入到单细胞、单分子水 平。生物医学检测技术是现代生命科学与医学发展的重要手段和实验工具，尤其是对感染 性疾病、遗传性疾病和恶性肿瘤等的临床诊断具有极其重要的作用。流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种在功能水平上对细胞或其他生物粒子 定量检测和分选的分析方法，在生物床医学领域应用广泛。细胞或粒子在激光束的照射下 产生散射光和激发荧光，这两种光信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管 (PMT)接收。光散射信号在前向小角度进行检测，称为前向散射(forward scatter, FSC)， 这种信号反映了微球粒径或体积的大小；90°散射光又称侧向散射(side scatter, SSC)， 是指与激光束_液流平面垂直的散射光，其信号强度可反映微球内部复杂程度。检测后的 信号经计算机处理后即转化为可直观观察的一维直方图或二维散点图。流式细胞仪的分辨 率主要取决于仪器本身，常用变异系数(Cv)来表示，Cv = d/mX100% (d是分布的标准偏 差，m是分布的平均值)。近年来，流式细胞仪在技术原理和设计研制方面无突破性进展，但 在各种功能上却有了很大提高，尤其是荧光探针的不断推陈出新，使流式细胞仪新的参量 分析方面不断有新的发展，并使仪器不断向小型化，操作自动化、简单化方向发展。顾忠泽 等(CN1595149A)发明一种基于编码微球的微流控生物芯片，是基于流式细胞术原理发展 的一种新的检测技术。编码技术是目前用于医学检测以及科学研究的关键技术，是将待检测的信息转 换为微球颜色、粒径或者磁性等能快速、准确检测的信号，便于判断和筛选。Chandler等 (美国专利，US626822)利用聚苯乙烯纳米微球，溶胀吸附荧光物质实现了编码。颜晓梅等 (CN101392172A)制得了粒径均一的、羧基化荧光编码微球。苏星光等(CN101530766A)发 明了磁性荧光编码微球，集磁响应与荧光编码于一身，在应用方面具有很大优势。但是由于 荧光物质本身发光效率和稳定性难控制、不同波长荧光效率差别显著等引发的问题仍然存 在。目前应用较多微球聚合方法主要包括分散聚合、悬浮聚合、乳液聚合、种子聚合、SPG膜 乳化法等。20世纪八十年代Ugelstad等开发了种子溶胀聚合法，通过引入惰性溶剂和单体 一起溶胀单分散种子微球，可以用来制备单分散的聚合物微球。目前对种子溶胀聚合的理 论和方法已经相当成熟，通过二步种子溶胀聚合可以获得不同系列粒径、高度均勻的功能 化微球，不仅可以获得高交联度的致密微球，还能获得介孔或微孔球。由于微球表面带有功 能基团，特别是羧基基团，可以与抗体、抗原以及基因片段结合成为诊断微球。诊断微球基 于免疫反应或基因杂交特异性反应，特异地识别待测物质，通过流式细胞仪检测即可准确 判断样品中是否含有该物质或诊断患者是否患有某种疾病。
目前很多液相生物芯片的载体微球采用荧光微球，由于微球荧光负载不均勻、稳定性差、容易发生泄漏、不同荧光波长的荧光效率不同，且荧光染料的成本较高、过程复杂， 在生物医学检测方面应用受限；对微球的要求高，不但要求微球高度均勻，表面官能团富集 而且能有效、稳定的包埋小分子。如何既能实现多通量同时检测、又能使操作简单、检测信 号稳定性强、区分度高，且成本低廉的编码技术，一直受到研究人员的广泛关注。
发明内容
本发明旨在提供一种易于检测、准确区分，同时实现多通量检测的基于聚合物微 球变化的编码检测方法，可广泛应用于生物学、临床医学、免疫学、药学等生物医学检测领 域。本发明提供了基于聚合物微球变化的编码检测方法本发明采用表面偶联特异性的抗体、抗原、DNA或RNA片段的一系列不同粒径和内 部结构的聚合物微球，通过免疫反应或基因杂交反应特异性识别待测样品中的抗原、抗体、 DNA或RNA片段；用表面携带荧光物质的分子探针与待测的抗体、抗原、DNA或RNA片段特异 性偶联，使得微球表面呈现荧光颜色；在检测仪器中检测荧光信号，与阴性和阳性对照标本 或已知浓度的标准品对比，判断待测样品是阴性或是阳性；在检测仪器中对微球粒径和内 部结构进行表征，根据微球粒径和内部结构与检测信息的一一对应关系，从而对待测物质 进行准确判断。所述的聚合物微球是不同交联度的致密微球、介孔或微孔球；微球的粒径为2 30 μ m,相邻编码微球粒径间隔在1 10 μ m。所述的聚合物微球微球的粒径优选4 16 μ m。所述的聚合物微球为聚苯乙烯类微球、聚丙烯酸酯类微球、聚苯乙烯-丙烯酸共 聚微球或聚甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸共聚微球，分散系数低于15%。所述的微球表面带有氨基、羧基或氯甲基官能团，表面官能团负载率为0.5 1.5mm0l/g;与蛋白或基因结合成为诊断微球，从而建立不同微球与不同蛋白或基因的一一 对应关系。所述的抗体、抗原、DNA或RNA片段是抗结核杆菌抗体、抗乙肝病毒抗体抗微生物 抗体中的一种或几种；类风湿因子、抗甲状腺球蛋白抗体自身抗体中的一种或几种；抗小 鼠抗体、抗兔二抗第二抗体中的一种或几种；小鼠血清、兔血清动物血清抗原类中的一种或 几种；猪流感病毒NS1基因、胰岛素基因微生物体内的特异基因、人体或动物体内基因的转 录产物其中的一种或几种。所述的一一对应关系是表面偶联抗体的编码微球和荧光标记的同种抗体，对应检 测待测样品中的抗原；表面偶联抗原的编码微球和荧光标记的同种抗原，对应检测待测样 品中的抗体；表面偶联DNA片段或RNA片段的编码微球和荧光标记相同的DNA或RNA片段， 对应检测待测样品中的DNA或RNA片段。所述的检测仪器可分辨聚合物微球不同粒径和致密与介孔微球的散射光信号，优 选流式细胞仪。所述的检测仪器其检测信号的变异系数在20%以下；其前向角散射光信号最小 分辨尺寸为0. 3μπι ；其侧向角散射光信号反映微球密微球与介孔微球的散射信号强；将检测信号检转化为直观显示的一维直方图和二维散点图，以精确识别不同微球，通过一一对 应的关系确定待测物质的信息。所述的编码微球包括1)采用一系列粒径为 2um、4um、6um、8um、10um、12um、14um、16um、18um、 20 um,22u m、24 um,26u m、28 um,30um的致密微球，通过检测谱图能明显区分，可同时实 现16种不同待测物质的同时检测。2)采用一系列粒径为 2um、4um、6um、8um、10um、12um、14um、16um、18um、 20 um,22u m、24 um,26u m、28 um,30um的致孔微球，通过检测谱图能明显区分，可同时实 现16种不同待测物质的同时检测。3)采用 4 ii m、6 ii m、8 ii m、10 ii m、12 ii m、14 ii m、16 ii m粒径的微球，可编码 7 种诊断
微球，分别采用致密、致孔两种不同内部结构的微球，可使得微球种类增加一倍；当采用不 同交联度微球时，能使得编码微球种类增加多倍，可实现多通量检测。根据编码微球的粒径以及内部结构信息确定的检测标准，在生物反应前后偏差范 围在0. 2 y m左右，对检测信号影响很小，能够保证诊断微球标准粒径和内部结构信息的可靠性。总之，与现有的编码检测技术相比，本发明涉及的编码检测方法具有微球粒径分散 系数小于8%，内部结构多样；检测图谱峰半峰宽窄，重叠程度小于10%，检测信号区分度高， 能够实现多个待测样本、多个指标的同时检测；微球表面富集官能团，偶联生物分子能力强， 能有效地诊断疾病、判断药物疗效以及实现对抗体、抗原、DNA或RNA等的标记和识别。
图1 双抗夹心法检测的原理2:幻411111、511111、611111致密微球的前向角-侧向角二维散点图；B)4iim、5iim、6iim致密微球的前向角-个数一维直方图。图3 :A) 5. 7 ii m、9. 8umU2.3um致孔微球的前向角-侧向角二维散点图；B)5.7um,9.8umU2.3um致孔微球的前向角-个数一维直方图。图4 :A) 5.7 iim致密微球、7.3 iim致孔微球、12. 3 iim致密微球的前向角-侧向角 二维散点图；B)5. 7um致密微球、7. 3 u m致孔微球、12. 3 y m的前向角-个数一维直方图。C) 5. 7 u m致密微球、7. 3 u m致孔微球、12. 3 y m的侧向角-个数一维直方图。
具体实施例方式下面给出本发明的实施例，是对本发明的进一步说明，而不是限制本发明的范围。一、编码微球检测方法聚合物微球制备方法可以是分散聚合、乳液聚合、SPG膜乳化法、悬浮聚合、种子聚 合，优选二步种子溶胀聚合，通过改变种子微球粒径或适当改变溶胀聚合过程的单体和添 加剂的比例以获得粒径范围宽的系列微球。微球表面带有功能基团，可以是氨基、羧基、氯 甲基，优选羧基，羧基与生物小分子结合能力强。如分散聚合、乳液聚合、二步种子溶胀聚 合、SPG膜乳化法等均可制备粒径范围在2 30 y m的微球，可以是聚甲基丙烯酸-丙烯酸、聚苯乙烯-衣康酸微球、聚苯乙烯-丙烯酸微球、聚丙烯酸-二乙胺微球、聚苯乙烯-氯甲基苯乙烯微球，表面官能团负载率为0. 5 1. 5mmol/g。编码微球优选采用二步种子溶胀聚 合，粒径范围优选4-16 μ m，表面官能团负载率优选0. 7-1. Ommol/g的聚苯乙烯-丙烯酸微 球。实施例1选取4 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为7. 1 %，表面功能基团负载率为 0. 505mmol/g ；5 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为5. 0%，表面功能基团负载率为 为0. 571mmol/g ；6 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为5. 5 %，表面功能基团负载 率为0. 585mmol/g三种高交联度的微球，各5mg，分别用100 μ L PBS缓冲液分散然后超声， 标号为1、2、3。将1、2、3混合后，超声分散，用流式细胞仪进行检测，得到一维直方图和二维 散点图，保存并打印结果，如附图2。实施例2选取5. 7 μ m致孔的聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为6. 4%，表面功能基团负载 率为0. 597mmol/g、9.8ym致孔的聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为5.2%，表面功能基团 负载率为0. 633mmol/g、12. 3 μ m致孔的聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为7. 7%，表面功 能基团负载率为0. 693mmol/g，各5mg，分别用100 μ L PBS缓冲液分散然后超声，标号为1、 2、3。将1、2、3混合后，超声分散，用流式细胞仪进行检测，得到一维直方图和二维散点图， 保存并打印结果，如附图3。实施例3选取5. 7 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为5. 0 %，表面功能基团负载率 为0、670mmol/g ；7. 3 μ m致孔的聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为5. 2%，表面功能基团 负载率为0. 633mmol/g ； 12. 3 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，分散系数为5. 5%，表面功能 基团负载率为为0. 700mmol/g ；各5mg，分别用100 μ L PBS缓冲液分散然后超声，标号为1、 2、3，混合在一起后超声分散，用流式细胞仪进行检测，得到一维直方图和二维散点图，保存 并打印结果。如附图4。二、活性生物分子检测实施例5采用免疫夹心法，即采用表面偶联不同检测蛋白或基因的聚合物微球(简称检测 基元)，与血液中的蛋白或基因相互作用，再用待有荧光标记的检测蛋白或基因(简称报告 基元)识别，通过流式细胞仪进行检测，根据粒径和内部结构的信息判断血液中含有何种 蛋白或基因，并且根据流式一维直方图或二维散点图显示，可以建立微球个数与待测物质 的定量关系。1)选取2 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，偶联类风湿因子制备了诊断微球Α。诊 断微球A用以检测样品中的变性lgG。2)选取16 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，偶联抗甲状腺蛋白抗体制备了诊断微 球B。诊断微球B用以检测样品中的抗甲状腺蛋白。3)选取30 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，偶联抗神经原抗体制备了诊断微球B。 诊断微球C用以检测样品中的抗神经元蛋白。将A、B两种种诊断微球混合后对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得2 y m粒径和内部结构 信息，则证明样品中含有变性IgG ；若测得16i!m粒径和内部结构信息，则证明样品中含有 抗甲状腺蛋白，若测得30 ym粒径和内部结构信息，则证明样品中含有抗神经元蛋白，。若 同时检测到2 ii m、16 ii m和30 ii m微球的信息，则证明同时含有三种物质。检测图谱半峰宽 较窄，很容易分辨。实施例61)选取4 y m致密聚苯乙烯_丙烯酸微球，偶联抗结核杆菌抗体制备了诊断微球
A。诊断微球A用以检测样品中的结核杆菌，判断待测样品中是含有结核杆菌。2)选取10 y m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，偶联抗艾滋病病毒抗体制备了诊断微 球B。诊断微球B用以检测样品中的艾滋病病毒，判断待测样品中是含有艾滋病病毒。3)选取16 ym致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，偶联我抗乙肝病毒抗体制备了诊断微 球C。诊断微球C用以检测样品中的乙肝病毒，判断待测样品中是含有乙肝病毒。将A、B、C三种诊断微球混合后对血液样本采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光 颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得粒径和内部结构 信息，则证明样品中含有结核杆菌；若测得10 ym粒径和内部结构信息，则证明样品中含有 艾滋病病毒；若测得16ym粒径和内部结构信息，则证明样品中含有乙肝病毒。若同时检测 到4 y m、10 y m、16 y m的信息，则证明同时含有三种物质。检测图谱半峰宽较窄，很容易分 辨。实施例7检测原理同上。1)选取4. 1 P m聚苯乙烯-衣康酸微球，偶联小鼠血清制备了诊断微球A。诊断微 球A用以检测样品中的抗鼠抗体。2)选取6. 6 ii m聚苯乙烯-衣康酸微球，偶联兔血清制备了诊断微球B。诊断微球 B用以检测样品中的抗兔抗体。将A、B两种种诊断微球混合后对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光 颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得4. 粒径和内部结 构信息，则证明样品中含有抗鼠抗体；若测得6.6 ym粒径和内部结构信息，则证明样品中 含有抗兔抗体。若同时检测到4.1 i!m、6. 6 ym的信息，则证明同时含有两种生物分子。检 测图谱半峰宽较窄，很容易分辨。实施例8检测原理同上。1)选取2 ym聚甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸微球，偶联抗乙肝病毒抗体制备了诊断微 球A。诊断微球A用以检测样品中的乙肝病毒。2)选取lOym聚甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸微球，偶联类风湿因子制备了诊断微球
B。诊断微球B用以检测样品中的变性IgG。将A、B两种种诊断微球混合后对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光 颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得2 y m粒径和内部结构 信息，则证明样品中含有乙肝病毒；若测得10 ym粒径和内部结构信息，则证明样品中含有 抗兔抗体。若同时检测到ZiimUOiim的信息，则证明同时含有两种生物分子。检测图谱半峰宽较窄，很容易分辨。实施例9检测原理同上。1)选取5 μ m聚苯乙烯-氯甲基苯乙烯微球，偶联抗乙肝病毒抗体制备了诊断微球A0诊断微球A用以检测样品中的乙肝病毒。2)选取13 μ m聚苯乙烯-氯甲基苯乙烯微球，偶联类风湿因子制备了诊断微球B。 诊断微球B用以检测样品中的变性lgG。将A、B两种种诊断微球混合后对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光 颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得5 μ m粒径和内部结构 信息，则证明样品中含有乙肝病毒；若测得13μπι粒径和内部结构信息，则证明样品中含有 变性lgG。若同时检测到5μπι、13μπι的信息，则证明同时含有两种生物分子。检测图谱半 峰宽较窄，很容易分辨。实施例10检测原理同上。1)选取4μπι聚苯乙烯-丙烯酸微球，表面官能团负载率为0.5mmol/g，偶联抗乙 肝病毒抗体制备了诊断微球A。诊断微球A用以检测样品中的乙肝病毒。2)选取ΙΟμπι聚苯乙烯-丙烯酸微球，表面官能团负载率为0.7mmol/g，偶联抗甲 状腺球蛋白制备了诊断微球B。诊断微球B用以检测样品中的甲状腺球蛋白。将A、B两种种诊断微球混合后对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光 颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得4μπι粒径和内部结构 信息，则证明样品中含有乙肝病毒；若测得ΙΟμπι粒径和内部结构信息，则证明样品中含有 甲状腺球蛋白。若同时检测到4μπι、10μπι的信息，则证明同时含有两种生物分子。检测图 谱半峰宽较窄，很容易分辨。实施例11检测原理同上。1)选取4μπι聚苯乙烯-丙烯酸微球，表面官能团负载率为l.Ommol/g，偶联抗乙 肝病毒抗体制备了诊断微球A。诊断微球A用以检测样品中的乙肝病毒。2)选取ΙΟμπι聚苯乙烯-丙烯酸微球，表面官能团负载率为1. 5mmol/g，偶联抗结 核杆菌抗体制备了诊断微球B。诊断微球B用以检测样品中的结核杆菌。将A、B两种种诊断微球混合后对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光 颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式谱图信息，若测得4μπι粒径和内部结构 信息，则证明样品中含有乙肝病毒；若测得ΙΟμπι粒径和内部结构信息，则证明样品中含有 结核杆菌。若同时检测到4μπι、10μπι的信息，则证明同时含有两种生物分子。检测图谱交 叉重叠少，易于分辨。实施例12检测原理同上。选取3 μ m聚苯乙烯-二乙胺微球，偶联抗小鼠二抗制备了诊断微球A ；选取13 μ m 聚苯乙烯_ 二乙胺微球，偶联抗兔二抗制备了诊断微球B，将两种诊断微球混合在一起。对 待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光颜色，与阴性和阳性对照标本比较、判断。根据流式图谱能很好的区分A、B，A和B粒径不同，差别显著。实施例13检测原理同上。分别制备了表面偶联猪流感病毒NS1基因片段的5. 7 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球A、表面偶联胰岛素基因片段的5. 7 μ m致孔聚苯乙烯-丙烯酸微球B，将两种诊断微球 混合在一起。对待测样品采用免疫夹心法检测，根据所带的荧光颜色，与阴性和阳性对照标 本比较、判断。根据流式图谱能很好的区分A、B，A和B粒径相同但内部结构差别显著。若测得5. 7μπι粒径和致孔结构信息，则证明样品中含有互补的猪流感病毒基因 片段；若测得5. 7 μ m粒径和致密结构信息，则证明样品中含有互补的胰岛素基因片段。若 同时检测到两种内部结构的信息，则证明同时含有两种生物分子。检测图谱半峰宽较窄，很 容易区分。实施例14检测原理同上。分另Ij 选取粒径为 2 μ m、4 μ m、6 μ m、8 μ m、10 μ m、12 μ m、14 μ m、16 μ m、18 μ m、 20μπι、22μπι、24μπι、26μπι、28μπι、30μπι的致密聚苯乙烯-丙烯酸微球，表面分别偶联16 种不同的抗体、抗原、DNA或RNA片段，得到16种不同的诊断微球，建立粒径和内部结构与 抗体、抗原、DNA或RNA片段的一一对应关系，可同时检测16种不同待测物质，在检测图谱 能明显区分。实施例I5检测原理同上。分另Ij 选取粒径为 2 μ m、4 μ m、6 μ m、8 μ m、10 μ m、12 μ m、14 μ m、16 μ m、18 μ m、 20μπι、22μπι、24μπι、26μπι、28μπι、30μπι的致孔聚苯乙烯-丙烯酸微球，表面分别偶联16 种不同的抗体、抗原、DNA或RNA片段，得到16种不同的诊断微球，建立粒径和内部结构与 抗体、抗原、DNA或RNA片段的一一对应关系，可同时检测16种不同待测物质，在检测图谱 能明显区分。实施例I6检测原理同上。分别选取粒径为4 μ m、8 μ m、12 μ m、16 μ m的致密和致孔微球，表面分别偶联8种 不同的抗体、抗原、DNA或RNA片段，得到8种不同的诊断微球，建立粒径和内部结构与抗体、 抗原、DNA或RNA片段的一一对应关系，可同时检测8种不同待测物质。粒径间隔较大且内 部结构区别显著，容易区分。实施例17检测原理同上。制备了表面偶联类风湿因子的5. 7 μ m致密聚苯乙烯-丙烯酸微球分别对两份含 有不同浓度的变异IgG的样品1和2，进行双抗夹心法检测。根据流式图谱显示，两份样品 检测粒径均在5. 7 μ m左右，但是变异IgG的浓度高的样品谱峰明显高于浓度低的样品。根 据这一特点，可制得标准样品，以不同浓度的待测样和标样的比较判断患者所处的时期。本发明公开和揭示粒径和内部结构编码微球的检测技术，可通过借鉴本文公开内 容。尽管本发明的基于聚合物微球粒径和内部结构的编码检测方法已通过较佳实施例进行了描述，但是本领域技术人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法改动，更具体地说，所有相类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，他们 都被视为包括在本发明精神、范围和内容中。
权利要求
基于聚合物微球变化的编码检测方法，其特征在于采用表面偶联特异性抗体、抗原、DNA或RNA片段的一系列不同粒径和内部结构的聚合物微球，通过免疫反应或基因杂交反应特异性地识别待测样品中的抗原、抗体、DNA或RNA片段；用表面携带荧光物质的分子探针与待测的抗体、抗原、DNA或RNA片段特异性偶联，使得微球表面呈现荧光颜色；在检测仪器中检测荧光信号，与阴性和阳性对照标本或已知浓度的标准品对比，判断待测样品是阴性或是阳性；在检测仪器中对微球粒径和内部结构进行表征，根据微球粒径和内部结构与检测信息的一一对应关系，从而对待测物质进行准确判断。
2.如权利要求1所述编码检测方法的聚合物微球，其特征在于聚合物微球是不同交 联度的致密微球、介孔或微孔球；微球的粒径为2 30 ym，相邻编码微球粒径间隔在1 10 u m。
3.如权利要求2所述的聚合物微球，其特征在于聚合物微球微球的粒径优选4 16 u m。
4.如权利要求2或3所述的聚合物微球，其特征在于聚合物微球为聚苯乙烯类微球、聚 丙烯酸酯类微球、聚苯乙烯_丙烯酸共聚微球或聚甲基丙烯酸甲酯_丙烯酸共聚微球，分散 系数低于15%。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于微球表面带有氨基、羧基或氯甲基官能 团，表面官能团负载率为0. 5 1. 5mmol/g ；与蛋白或基因结合成为诊断微球，从而建立不 同微球与不同蛋白或基因的一一对应关系。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述的抗体、抗原、DNA或RNA片段是抗 结核杆菌抗体、抗乙肝病毒抗体抗微生物抗体中的一种或几种；类风湿因子、抗甲状腺球蛋 白抗体自身抗体中的一种或几种；抗小鼠抗体、抗兔二抗第二抗体中的一种或几种；小鼠 血清、兔血清动物血清抗原类中的一种或几种；猪流感病毒NSi基因、胰岛素基因微生物体 内的特异基因、人体或动物体内基因的转录产物其中的一种或几种。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于表面偶联抗体的编码微球和荧光标记的 同种抗体，对应检测待测样品中的抗原；表面偶联抗原的编码微球和荧光标记的同种抗原， 对应检测待测样品中的抗体；表面偶联DNA片段或RNA片段的编码微球和荧光标记相同的 DNA或RNA片段，对应检测待测样品中的DNA或RNA片段。
8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于检测仪器是分辨聚合物微球不同粒径和 致密与介孔微球的散射光信号。
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于所述的检测仪器为流式细胞仪，流式细 胞仪检测信号的变异系数在20%以下；前向角散射光信号最小分辨尺寸为0. 3pm ；侧向角 散射光信号反映微球密微球与介孔微球的散射信号强；将检测信号检转化为直观显示的一 维直方图和二维散点图，以精确识别不同微球，通过一一对应的关系确定待测物质的信息。
全文摘要
本发明是基于聚合物微球变化的编码检测方法。采用表面偶联特异性的抗体、抗原、DNA或RNA片段的一系列不同粒径和内部结构的聚合物微球，通过免疫或基因杂交反应特异性识别待测样品中的抗原、抗体、DNA或RNA片段；用表面携带荧光物质的分子探针与待测抗体、抗原、DNA或RNA片段特异性偶联；在检测仪器中检测荧光信号，与阴性和阳性对照标本或已知浓度的标准品对比，判断待测样品是阴性或阳性；在检测仪器中对微球粒径和内部结构进行表征，根据微球粒径和内部结构与检测信息的一一对应关系，从而对待测物质进行准确判断。本发明是建立在免疫以及基因杂交特异性反应的基础上，对编码技术的创新，可同时实现多个待测样本或指标的检测，简单、快速、可靠。
文档编号G01N33/68GK101846672SQ20101016566
公开日2010年9月29日 申请日期2010年5月7日 优先权日2010年5月7日
发明者宋涛, 常津, 张琦, 李云红, 逯超亮 申请人:天津大学