专利名称：蛹虫草子实体指纹图谱及构建方法
技术领域：
本发明涉及中药材的指纹图谱的构建方法，尤其是蛹虫草(Cordyc印smilitaris) 子实体高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的蛹虫草子实体 标准指纹图谱。
背景技术：
我国传统的中药及其制剂大多缺乏严密的质量标准和科学的检测手段，难以有效 控制其内在质量，不能保证用药的安全、有效，也不符合国际医药市场的要求，严重制约了 我国中药行业的发展。加强中药材质量控制研究是中药规范化、标准化的关键问题。只有 对中药材进行科学的质量控制，才能保证中药质量，实现中药的"安全、有效、稳定、可控"。
蛹虫草[Cordyc印s militaris (L. ) Link]又名北冬虫夏草，分类学上属真 菌门(Eumycota)，子囊菌亚门(Ascomycotina)，核菌纟冈(Pyrenomycetes)，球壳目 (Sphaeriales)，麦角菌科(Clavic印itaceae)，虫草属(Cordyc印s)，对哮喘及支气管疾 病、抗肿瘤、免疫调节、增强肾衰竭病人的肾功能等方面都有很好的治疗效果，且抗疲劳作 用显著。众说周知，蛹虫草子实体成分复杂。研究表明，蛹虫草子实体的多种化学成分有各 种具体的药理作用。因此，对其某一种或几种活性成分进行检测，就有失全面。不能真实反 映蛹虫草子实体药效的整体性。要全面有效地控制蛹虫草及其深加工产品的质量，必须对 它的物质群整体予以控制。 中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成 分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，指纹图谱 对于有效控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世 纪80年代就采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物的质量控制中 亦采用高效液相指纹图谱法。美国FDA近几年制定的植物草药指南中已经明确把指纹图谱 作为混合物质群的质量控制方法。指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已 成为国际共识。
发明内容
本发明的目的是为了有效控制蛹虫草子实体及其深加工产品的质量，使其质量控
制技术更加完善、科学而提供的一种蛹虫草子实体的标准指纹图谱及构建方法。 本发明的目的是这样实现的 —种蛹虫草子实体指纹图谱，特征点是该指纹图谱具有14个共有特征峰，14 个共有特征峰的保留时间tK分别为2. 5min、3. lmin、3. 5min、4. 0min、4. 9min、7. 7min、 8. 3min、9. 8min、 12. 6min、 14. 3min、 16. 8min、 18. lmin、 19. 0min禾卩22. 7min或者按此比例延 长或縮短保留时间。 上述指纹图谱的构建方法是通过高效液相色谱分析(HPLC)构建的，其具体步骤 如下
a)、供试品溶液的制备 精密称取蛹虫草子实体粉末0.广5g，水浴提取1 10次，每次加水3 15倍量，每次 水浴10min 60min，加入3倍量95%乙醇，静置0-24h，离心，合并上清液，定容至50mL容量 瓶中，用微孔滤膜(0. 45iim)滤过，滤液作为供试品溶液；
b)、高效液相色谱分析 自动进样供试品溶液10-50 y L，色谱条件色谱柱为Kromasil C18， 5 y m， 250X4. 6mm ;流动相为水_甲醇；采用梯度洗脱方式0min — 10min — 20min — 30min甲 醇0% — 15% — 15%—40% ;流速O. 8mL;柱温30。C ;DAD检测波长260nm :得到蛹虫草 子实体指纹图谱。 本发明具有方法简便、稳定、精密度高以及重现性好等特点。所建立的标准指纹图 谱能快速有效地区分蛹虫草子实体及其伪品，为蛹虫草子实体的深加工产品提供有效的定 性鉴定标准。 下面结合实例和附图对本发明做进一步的说明。
图1为本发明的蛹虫草子实体标准指纹图谱
具体实施例方式
实施例 1、仪器、样品、试药； 1. 1仪器美国DIONEX公司高效液相色谱仪；色谱柱Kromasil C18(5iim， 250X4. 6mm)。 1. 2样品蛹虫草子实体 1. 3试药液相色谱分析用试剂为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离子双蒸 水。 2、方法与结果 2. 1供试品溶液的制备精密称取蛹虫草子实体粉末lg，水浴提取6次，每次加水 10倍量，每次水浴30min，加入3倍量95 %乙醇，静置12h，离心，合并上清液，定容至50mL 容量瓶中，用微孔滤膜(0. 45iim)滤过，滤液作为供试品溶液； 2. 2HPLC分析自动进样供试品溶液10 y L，色谱条件色谱柱为 KromasilC18(5iim，250X4.6mm);流动相为水_甲醇；采用梯度洗脱方式 Omin — 10min — 20min — 30min甲醇0 % — 15 % — 15 % — 40 % ;流速0. 8m/min ;柱温 30°C ;DAD检测波长260nm :得蛹虫草子实体指纹图谱。 2. 3共有峰的确定将上述得到的22批蛹虫草子实体HPLC指纹图谱进行分析比 较，找出其共有特征峰(共14个峰)，得到蛹虫草子实体标准指纹图谱。14个共有特征峰 的保留时间(tK)分别为2. 5min、3. lmin、3. 5min、4. 0min、4. 9min、7. 7min、8. 3min、9. 8min、 12. 6min、14. 3min、16. 8min、18. lmin、19. 0min、22. 7min。它们构成了蛹虫草子实体的指纹 特征。
权利要求
一种蛹虫草子实体指纹图谱，其特征在于该指纹图谱具有14个共有特征峰，14个共有特征峰的保留时间tR分别为2.5min、3.1min、3.5min、4.0min、4.9min、7.7min、8.3min、9.8min、12.6min、14.3min、16.8min、18.1min、19.0min和22.7min或者按此比例延长或缩短保留时间。
2. —种权利要求1所述指纹图谱的构建方法，其特征在于该指纹图谱是通过高效液 相色谱分析(HPLC)构建，其具体步骤如下a、 供试品溶液的制备精密称取蛹虫草子实体粉末0. 1 5g，水浴提取1 10次，每次加水3 15倍量，每 次水浴10min 60min，加入3倍量95 %乙醇，静置0-24h，离心，合并上清液，定容至50mL 容量瓶中，用微孔滤膜0. 45 ii m滤过，滤液作为供试品溶液；b、 高效液相色谱分析自动进样供试品溶液10-50 ii L，色谱条件色谱柱为Kromasil C18， 5 y m， 250X4. 6mm ;流动相为水_甲醇；采用梯度洗脱方式0min — 10min — 20min — 30min甲 醇0%— 15%— 15% — 40% ;流速O. 8mL ;柱温30。C ;DAD检测波长260nm，得到蛹虫草子实体指纹图谱。
全文摘要
本发明公开了一种蛹虫草子实体指纹图谱及构建方法，其指纹图谱具有14个共有特征峰，14个共有特征峰的保留时间tR分别为2.5min、3.1min、3.5min、4.0min、4.9min、7.7min、8.3min、9.8min、12.6min、14.3min、16.8min、18.1min、19.0min和22.7min或者按此比例延长或缩短保留时间；构建方法包括供试品溶液的制备及高效液相色谱仪测定步骤；本发明与现有的蛹虫草子实体分析鉴定技术相比，具有方法简便、稳定、精密度高以及重现性好等特点。所建立的标准指纹图谱能快速有效地区分蛹虫草子实体及其伪品，为蛹虫草子实体的深加工产品提供有效的定性鉴定标准。
文档编号G01N30/86GK101710107SQ200910200300
公开日2010年5月19日 申请日期2009年12月11日 优先权日2009年12月11日
发明者张红霞, 陈伟, 高新华, 黄开华 申请人:上海市农业科学院