专利名称：一种检测尿囊素的关-开型荧光分子探针的设计的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及药物活性分子的荧光化学传感领域，特别涉及一种对尿囊素具有 关-开(OfT-On)型荧光响应的分子探针的设计方法。
背景技术：
尿囊素又名1-脲基间二氮杂戊烷_2，4- 二酮或5-脲基海因，具有促进细胞生长、 加快伤口愈合、软化角质蛋白等生理功能，临床上主要用于皮肤干燥皲裂、手部皮炎、胃及 十二指肠溃疡等的治疗。尿囊素能与许多物质形成金属盐或加合物，既保持了尿囊素原有 的功效，又具有加合物的固有特性，因此，尿囊素也用作美容、护肤等化妆品的特效添加剂。 同时，尿囊素在农业上又是优良的植物生长调节剂，可刺激植物生长，对一些农作物具有显 著的固果、早熟和增产作用。尿囊素属咪唑类杂环化合物，目前已开发出的检测方法有分光光度法、薄层层析 法、红外光谱法和高效液相色谱法(紫外检测器)等。但由于其紫外吸收较弱，溶液中存 在酮式与烯醇式两种相互转换的构型，这种平衡的存在会导致检测灵敏度下降，且测定结 果不稳定，因而，迄今高效液相色谱法尚未收载入药品的检测标准(秦雪梅等，药物分析杂 志，2008，Vol28 No. 10,1648) 0所以，开发选择性检测尿囊素的新技术有着显著的实用价 值。半导体量子点(QDs)的尺寸效应使其具有独特的光学特性。自从水相合成QDs的 诸多方法报道以来，QDs在免疫生物学和临床检验学等研究中用作生物分子的荧光标记物 即荧光分子探针，其潜在的应用价值已引起科学工作者的广泛关注。与传统免疫荧光分析 法所采用的罗丹明6G或其它有机染料分子探针相比较，用QDs特别是经过表面结构修饰、 调控或功能化的QDs作荧光探针，具有选择性强、灵敏度高、对生物体系无明显侵害等优 势。同时，还可消除有机荧光染料分子因发生光漂白和光降解现象所引起的分析体系不稳 定等问题。水相合成的II-VI族QDs的荧光常被一些外部引入的过渡金属离子所猝灭，而咪 唑分子中的胺氮原子又能与某些特定的金属离子结合使QDs的荧光得到一定程度的恢复。 基于这种思想，本发明利用过渡金属离子作猝灭剂，尿囊素通过与金属离子的作用使QDs 荧光恢复的原理，设计出对尿囊素产生荧光信号响应的Off-On型荧光分子探针，并以此建 立尿囊素的灵敏检测方法。所以，本发明所涉及的设计思想对咪唑类杂环药物检测用荧光 探针的开发具有一定的学术研究和应用推广价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对尿囊素产生选择性响应的OfT-On型荧光探针的设 计策略。本发明所提供的一种检验尿囊素的OfT-On型荧光分子探针的设计与检验方法， 是选择N-乙酰-半胱氨酸(Ac-Cys)包覆CdTe量子点(CdTeOAc-Cys QDs)为本底荧光源QDs,以Fe3+作CdTeOAc-Cys QDs荧光猝灭剂，并通过以下步骤来实现(1)在50mL三口瓶中加入0. Ig 二水柠檬酸钠，按Cd Ac-Cys Te的摩尔比为 1 2.0 (0. 2-0. 25)的比例加入Ac-Cys、CdCl2溶液和一定量的水，搅拌下溶解。在密闭 条件下通高纯氮保护30min后，先后用注射器注入K2TeO3和KBH4溶液，加热回流，在密闭或 敞口条件下反应2. 5小时。反应结束后，用无水乙醇将CdTeOAc-Cys QDs沉淀提纯，并重新 分散到超纯水中。(2)分别移取适量CdTeOAc-Cys QDs溶液于一组比色管中，各加入一定量Fe3+，室 温下静置15-20min，分别加入不同浓度的尿囊素，在最佳实验条件下测定CdTeOAc-Cys QDs 的荧光恢复值(AF)。根据AF与尿囊素浓度的定量关系，建立CdTeOAc-Cys QDs荧光Off-On 型分子探针检验尿囊素的方法。
图1为不同浓度的Fe3+对1. lX10-7mol/L CdTeiAc-Cys QDs荧光发射的猝灭曲 线；其中1 — 7 所对应的 Fe3+的浓度(Xl(T7mol/L)依次为:0· 5、1. 0、2· 5、3· 0、4· 0、5. 0 和 6. 0。图2为在3. 0Xl(Tmol/L Fe3+存在下，不同浓度尿囊素对1. 1 X 10_7mol/LCdTe@ Ac-Cys QDs荧光恢复曲线；其中1 — 5所对应的尿囊素的浓度(X10_9mol/L)依次为0. 5、
2.0,10. 0,20. 0 和 30. 0。图3为尿囊素对不同金属离子猝灭CdTeOAc-Cys QDs荧光后的恢复性能比较。 其中金属离子的浓度均为3.0X10_7mol/L;QDS浓度1. 1 X 10_7mol/L，尿囊素的浓度均为
3.0Xl(T8mol/L。
具体实施例方式实施例(I)CdTeOAc-Cys QDs 的合成按照Cd Ac-Cys Te = 1 2. 0 (0.2-0.25)的摩尔比，分别称取 0. 0656g Ac-Cys (0. 4mmol)和0. Ig 二水柠檬酸钠加到50mL三口瓶中，加45mL纯水搅拌下溶解，再加 入0. 2mol/L CdCl2溶液lmL。在全密封的条件下，通入高纯氮保护30min后，先后用注射器 注入0. 04mol/L K2TeO3溶液ImL和含0. 05g的KBH4 (0. 05g KBH4用少量水溶解)溶液，加热 至回流，在密闭或敞口条件下反应2. 5小时后，自然冷却至室温。反应结束后，用无水乙醇 将CdTeOAc-Cys QDs沉淀提纯，再重新分散到超纯水中，该QDs的浓度为7. 6 X 10_6mol/L， 使用时稀释10倍。(2) Off-On型探针的荧光测定分别移取0. 15mL CdTeiAc-Cys QDs使用液于一组IOmL比色管中，各加入0. 3mL 1.0X10_5mol/L Fe3+使用液，室温下静置15-20min后，配制尿囊素的标准溶液系列，在最佳 实验条件下测定不同浓度尿囊素对CdTeOAc-Cys QDs的荧光恢复值(Δ F)。在试验的浓度 范围内，AF与尿囊素浓度存在良好的线性关系，R2 = 0.99。
权利要求
一种检测尿囊素的关 开(Off On)型荧光分子探针的设计，其特征在于利用金属离子作猝灭剂将量子点(QDs)的本底荧光猝灭，尿囊素通过与金属离子的作用使QDs的荧光得以恢复的原理来建立尿囊素的检测方法。
2.权利要求1所述的一种检测尿囊素的OfT-On型荧光分子探针的设计，其特征在于选 择的QDs为水相合成的N-乙酰-半胱氨酸(Ac-Cys)包覆CdTe量子点(CdTeOAc-Cys QDs)。
3.权利要求1所述的一种检测尿囊素的OfT-On型荧光分子探针的设计，其特征在于所 选择的金属离子是一种过渡金属离子。
4.根据权利要求2所述的CdTeOAc-CysQDs的合成，其特征在于碲源为亚碲酸钠 (Na2TeO3)或亚碲酸钾(K2TeO3)中的任意一种。
5.根据权利要求2所述的CdTeOAc-CysQDs，其特征在于Cd Ac-Cys Te的摩尔比 为 1 2. 0 (0. 2-0. 25)。
6.根据权利要求3所述的过渡金属离子，其特征在于适用的金属离子为Fe3+。
全文摘要
本发明涉及一种检测尿囊素的关-开型荧光分子探针的设计。本发明所提供的关-开型荧光分子探针的设计是利用过渡金属离子作猝灭剂，尿囊素通过与金属离子的作用使N-乙酰-半胱氨酸包覆CdTe量子点荧光恢复的原理，设计出对尿囊素产生荧光信号响应的关-开型荧光分子探针，并以此建立尿囊素的检测方法。
文档编号G01N21/64GK101986141SQ200910154000
公开日2011年3月16日 申请日期2009年11月30日 优先权日2009年11月30日
发明者李芳 , 杨燕, 许丹萍, 贾文平, 韩得满 申请人:贾文平;韩得满;李芳;杨燕;许丹萍