专利名称：检测人血清纤维蛋白原的免疫同步散射光谱试剂盒及其使用方法
技术领域：
本发明涉及生化分析技术，具体是检测人血清纤维蛋白原的免疫同步散射光谱试
剂盒及其使用方法。
背景技术：
纤维蛋白原(Fg)是由肝脏合成，类似球蛋白的一种大分子可溶性糖蛋白。它能与 凝血酶作用，是影响血液粘度的重要因素，它在细胞的迁移、生长、分化、伤口的修复等过程 中都担负着重要的生理作用。目前，对于Fg的检测，国内外报道了多种检测方法，如盐析 法、免疫比浊法、热浊度法、双縮脲法、von Clauss法、紫外光度法、电泳法、PT演算法等。其 中常规多采用较为简便的von Clauss法，该法的线性范围是O. 82-4. 90mg"mL—1。其次应 用相对较多的为盐析法，这类方法快速简便，但是特异性不强，影响因素多。免疫比浊法较 为简便、快速、特异和准确性较高，但灵敏度不高。
发明内容
本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供一种能简便、快速、灵敏度高、抗 干扰强的检测人血清纤维蛋白原的免疫同步散射光谱试剂盒及其使用方法。
实现本发明的目的技术方案是本试剂盒利用Fg与羊抗人Fg在一定温度水浴条 件下，生成免疫复合物，二者之间的反应具有较高的特异性，生成的免疫复合物存在瑞利散 射乃至同步散射。在一定Fg浓度范围内，随着其浓度的增加，体系在340nm和470nm处的 同步散射强度线性增强，据此可绘制Fg浓度与A^的标准曲线。按照使用方法测定样品 的同步散射强度，与标准曲线体系空白的同步散射强度相减，即计算AIKS= (IK)#-(IK)b， 根据标准曲线即能得出样品中纤维蛋白原的浓度。 本发明检测人血清纤维蛋白原的免疫同步散射光谱试剂盒，由下列三种试剂组 成 (1)纤维蛋白原(Fg)标准液； (2) Rl :含24. 6 122,l/LNa2HP04和56 175. 4,l/LNaH2P04和100-400g/L
聚乙二醇6000 ; (3)R2 :含稳定剂和1. OOmg mL—1羊抗人纤维蛋白原抗体。
本试剂盒的使用方法包括如下步骤
—、绘制标准曲线 (1)准备6支试管，依次移取0. 30mL Rl，0.20mL R2，不同量Fg标准溶液，其中第 一管不加Fg标准溶液，于5mL带刻度的试管中，用蒸馏水定容至3mL，混匀，在37。C温育 15min ;以不加Fg作空白对照体系； (2)分别取适量上述体系于石英池中，置于荧光分光光度计上，在激发波长A^等 于发射波长A em的条件下，同步扫描得到体系的同步散射光谱。分别测定340nm和470nm处的同步散射光强度I，并测定空白体系同步散射光强度Ib，计算AI = I_Ib ;
(3)以A I对Fg的浓度关系绘制标准曲线；
二、制备样品检测体系 (1)取医院处理过的待测人血浆样品，用24. 6 122mmol/L Na2HP04和56 175.4mmol/LNaH2P04将样品稀释50倍，取稀释后的样品50iiL，依照步骤一的(1)和(2)的方法制备检测体系，求出样品的AI#; 三、依据绘制的标准曲线，计算出血浆样品Fg的浓度。
本发明的优点是 (1)与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，抗干扰强，灵敏度高，选择性好，反应条件容易达到。 (2)试剂仅为纤维蛋白原(Fg)标准液，Rl :含24. 6 122,l/LNa2HP04和56 175. 4,1/L NaH2P04和100-400g/L聚乙二醇6000， R2 :含稳定剂禾口 1. OOmg mL—1羊抗人
纤维蛋白原抗体，所用羊抗人Fg抗体溶液和Fg溶液浓度较低，试剂用量少且均无毒。
具体实施例方式本试剂盒由独立分装下列三种试剂组成纤维蛋白原(Fg)标准液；R1 :含24. 6
122mmol/LNa2HP04和56 175. 4mmol/LNaH2P04和100-400g/L聚乙二醇6000 ;R2 :含稳定剂和1. OOmg mL—1羊抗人纤维蛋白原抗体； 用本试剂盒测定人血清纤维蛋白原的方法，包括如下步骤
—、绘制标准曲线 (1)准备6支试管，依次移取0. 30mL Rl，O. 20mL R2，不同量的Fg标准溶液，其中第一管不加Fg标准溶液，于5mL带刻度的试管中，用蒸馏水定容至3mL，混匀，在37t:温育15min ;以不加Fg作空白对照体系； (2)分别取适量上述体系于石英池中，置于荧光分光光度计上。用低灵敏档，纵坐标为6，在激发波长A ex等于发射波长A 的条件下，在RF-540型荧光分光光度计(日本岛津)同步扫描得到体系的同步散射光谱。测定340nm或470nm处的同步散射光强度I，并测定空白体系同步散射光强度Ib，计算AI = I_Ib ;
(3)以A I #对Fg的浓度关系绘制标准曲线；
二、制备样品检测体系 取医院处理过的待测人血浆样品，用24. 6 122mmol/LNa2HP04和56
175. 4mmOl/LNaH2P04混合液将样品稀释50倍，取稀释后的样品50 y L，依照步骤一的(1)和
(2)的方法制备检测体系，求出样品的AI#; 三、依据绘制的标准曲线，计算出血浆样品Fg的浓度。 本试剂盒纤维蛋白原的检出范围为0. 13-5. 33ii g/mL。
权利要求
用于检测人血清纤维蛋白原的免疫同步散射光谱试剂盒，其特征是它由下列三种试剂组成(1)纤维蛋白原，即Fg标准液；(2)R1含24.6～122mmol/LNa2HPO4和56～175.4mmol/LNaH2PO4和100-400g/L聚乙二醇6000；(3)R2含稳定剂和1.00mg·mL-1羊抗人纤维蛋白原抗体。
2. 如权利要求1所述试剂盒的使用方法，其特征是包括如下步骤(1) 绘制标准曲线1) 准备6支试管，依次移取0. 30mLRl， 0. 20mLR2，不同量Fg标准溶液，于5mL带刻度的 试管中，用蒸馏水定容至3mL，混匀，在37t:温育15min ;以不加Fg作空白对照体系；2) 分别取适量上述体系于石英池中，置于荧光分光光度计上，在激发波长入^等于发 射波长A em的条件下，同步扫描得到体系的同步散射光谱，分别测定340nm和470nm处的同 步散射光强度I，并测定空白体系同步散射光强度Ib，计算AI = I_Ib ;3) 以A I对Fg的浓度关系绘制标准曲线；(2) 制备样品检测体系取医院处理过的待测人血浆样品，用24. 6 122mmol/LNa2HP04和56 175. 4mmo1/ LNaH2P04混合液将样品稀释50倍，取稀释后的样品50 y L，依照步骤(1)的1)和2)的方法 制备检测体系，求出样品的AI#;(3) 依据绘制的标准曲线，计算出血浆样品Fg的浓度。
3. 如权利要求2所述的试剂盒的使用方法，其特征是纤维蛋白原的检出范围为 0. 13-5. 33ii g/mL。
全文摘要
本发明涉及一种检测人血清纤维蛋白原的免疫同步散射光谱试剂盒及其使用方法。本试剂盒由下列三种试剂组成，1、纤维蛋白原标准液；2、R1含24.6～122mmol/LNa2HPO4和56～175.4mmol/L NaH2PO4和100-400g/L聚乙二醇6000；3、R2含稳定剂和1.00mg·mL-1羊抗人纤维蛋白原抗体。具体使用方法是按一定比例制备标准系列，并测定其同步散射强度，绘制同步散射强度-浓度标准曲线，然后测定样品的同步散射强度，根据标准曲线求出其Fg含量。这种试剂盒操作简便、快速，灵敏度高，抗干扰强，同时与Clauss法测定结果相比，一致性较好，为临床诊断治疗冠心病、心肌梗死、脑血管病等疾病提供可靠的实验数据。
文档编号G01N33/53GK101718782SQ200910114508
公开日2010年6月2日 申请日期2009年10月29日 优先权日2009年10月29日
发明者孙双娇, 张静, 李纪顺, 蒋治良 申请人:广西师范大学