专利名称：检测人血清IgG的同步散射光谱试剂盒及使用方法
技术领域：
本发明涉及生化分析技术领域，具体是一种用于检测人血清IgG的同步散射光谱 试剂盒及使用方法。
背景技术：
免疫球蛋白G(IgG)是血清中一类重要的免疫球蛋白。它具有中和毒素和病毒，激 活补体，凝集等功能。目前测定IgG主要有化学发光法、电化学法等。同步散射(RS)光谱 分析具有灵敏度高和简便等特点，已用于蛋白质分析、生化和纳米微粒研究等。在蛋白质的 RS分析中，所用试剂多为磺酸基和羧基的酸性染料如酸性三苯甲烷类染料、酸性占吨染料、 酸性偶氮染料，其灵敏度较高。但该类方法主要基于小分子的缔合作用，其选择性不好。因 此，将高选择性反应与RS检测结合是提高其选择性的重要途径之一。已知免疫反应和催化 反应具有较高的选择性。它们与RS检测结合可望获得高灵敏度和高选择性的分析新方法。 目前，在众多检测IgG的方法中，只有免疫透射比浊法有商品化的试剂盒，该试剂盒使用简 便，但是线性范围窄，而且灵敏度不高，限制了其在检测低浓度样品中的应用。
发明内容
本发明的目的是要提供一种用于检测人血清IgG的同步散射光谱试剂盒及该试 剂盒的使用方法，这种试剂盒操作简便快速、灵敏，检出限低，检测浓度范围宽，且样品消耗 实现本发明目的的技术方案是 本发明的原理是基于羊抗兔IgG与兔IgG发生特异性反应后，免疫复合物可聚集 形成疏水的免疫复合物微粒，该免疫复合物与PEG之间存在较强的分子间作用力和疏水作 用力而自动聚集形成免疫复合物-PEG颗粒和固液界面，从而使体系的散射信号增强，增强 的同步散射强度增强值与IgG浓度成正比，通过测定同步散射强度增强值，可对照标准工 作曲线确定样品中IgG的含量。 —种用于检测人血清IgG的免疫金同步散射光谱试剂盒，由下列三种试剂组成， 其中试剂1含0. 04 0. 06mol/L Tris、0. 0275 0. 045mol/L HC1和30. 0 50. Omg/mL PEG20000溶液；试剂2为250 ii g/ml羊抗兔IgG ;试剂3为兔IgG校准品。
本试剂盒测定的线性范围为1.0iig/ml-133iig/ml，相关系数为0.9966，检出限 为0. 5 li g/ml。 储存与有效期试剂避光储存于4t:冰箱中，可稳定半年。 用于检测人血清IgG的免疫金同步散射光谱试剂盒的使用方法，包括如下步骤
1、制备标准曲线 (1)准备6支试管，每支试管加入800iiL试剂l，混匀；
(2)每支试管加入300uL试剂2，混匀； (3)各试管依次加入不同体积的试剂3，第一管不加IgG校准品作为空白对照管；
(4)每支试管加入蒸馏水定容，使每根试管溶液最终体积为3.0mL，混匀后，在超 声波反应器中37t:温育30min后，取适量于石英池中，置于荧光分光光度计上，在激发波长 等于发射波长的条件下同步扫描，得到体系的同步散射光谱，确定其同步散射峰，分别测定 每一管同步散射峰处的同步散射光强度； (5)结果处理多点定标法，以第一管同步散射光强度作为试剂空白值Ib，每一个 样本的同步散射值为I，最终同步散射值AI按下式计算最终同步散射值AI = I-L，以 IgG浓度为横坐标，最终同步散射值AI为纵坐标绘制工作曲线；
2、制备检测样品测试体系 用步骤1的(1) (4)测得样品测试体系的最终同步散射值A 1# ;
3、用样品的最终同步散射值参照标准曲线，求到最终浓度值。 本发明的优点是本试剂盒操作简便、快速、灵敏、检出限低、检测浓度范围宽，不 需繁琐的相分离步骤，样品消耗量少，适用于大多数生物样品分析。
具体实施例方式
下面用具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例 主要仪器和试剂5mL刻度试管若干，可加0 1000 y L的加样枪一支，RF-540型 荧光分光光度计(日本岛津)。试剂1含0. 045mol/L Tris和0. 04mol/L HC1和40. 0mg/ mL PEG20000溶液，试剂2含250 y g/ml羊抗兔IgG (上海午立生物技术公司)；试剂3含 3000ug/mL的兔IgG校准品(上海午立生物技术公司)，所用试剂均为分析纯，实验用水为 二次蒸馏水。样品人血清由桂林市第五医院提供。
测定方法包括如下步骤
1、制备标准曲线 (1)准备6支试管，每支试管加入800 ii L试剂1，混匀；
(2)每支试管加入300 ii L试剂2，混匀； (3)各试管依次加入10. Oii L、20. Oii L、40. Oii L、80. Oii L、 120. OuL浓度为 3000 i！ g/mL的试剂3兔IgG校准品，其中第一管不加兔IgG作为空白对照管；
(4)每支试管加入蒸馏水定容，使每根试管溶液最终体积为3.0mL，混匀后，在超 声波反应器中37t:温育30min后，取适量于石英池中，置于荧光分光光度计上，用低灵敏 档，纵坐标为6，同步扫描激发波长A^和发射波长Aem(Aex= AJ，得到体系的同步散射 光谱，确定其同步散射波峰为470nm，分别测定每一管同步散射峰处的同步散射光强度；
(5)以第一管同步散射光强度作为试剂空白值Ib，每一个样本的同步散射值为I， 最终同步散射值AI按下式计算最终同步散射值AI = I-Ib。以IgG浓度为横坐标，最 终同步散射值AI为纵坐标绘制工作曲线；回归方程为AI 二 0.269c+0.34，线性范围是 1. 0 133 ii g/ml ，相关系数为0. 9966 ;
2、制备检测样品测试体系 取人血清样品和标准体系一样的顺序测定样品，求得其A I # ;
3、根据同步散射值A I样对照标准曲线，求得最终浓度值；
本发明的检出限为0. 5ii g/ml。
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对比试验，本发明血清样品测定结果与免疫比浊法测定结果相对照，结果基本一 致，证明了本发明的可靠性。
权利要求
一种检测人血清IgG的同步散射光谱试剂盒，其特征是它由下述三种试剂组成，其中试剂1含0.04～0.06mol/L Tris、0.0275～0.045mol/L HCl和30.0～50.0mg/mL PEG20000溶液，试剂2为250μg/ml羊抗兔IgG；试剂3为兔IgG校准品。
2. 权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征是包括以下步骤(1) 制备标准曲线1) 准备6支试管，每支试管加入800 L试剂1，混匀；2) 每支试管加入300 ii L试剂2，混匀；3) 各试管依次加入不同体积的试剂3，第一管不加IgG作为空白对照管；4) 每支试管加入蒸馏水定容，使每根试管溶液最终体积为3.0mL，混匀后，在超声波反应器中37t:温育30min后，取适量于石英池中，置于荧光分光光度计上，在激发波长等于发射波长的条件下同步扫描，得到体系的同步散射光谱，确定其同步散射峰，分别测定每一管同步散射峰处的同步散射光强度；5) 结果处理多点定标法，以第一管同步散射光强度作为试剂空白值Ib，每一个样本的同步散射值为I，最终同步散射值AI按下式计算最终同步散射值AI = I-Ib，以IgG浓度为横坐标，最终同步散射值AI为纵坐标绘制工作曲线；(2) 制备检测样品测试体系用步骤(1)的1) 4)测得样品测试体系的最终同步散射值A 1# ;(3) 用样品的最终同步散射值参照标准曲线，求到最终浓度值。
3. 根据权利要求l所述的试剂盒，其特征是本试剂盒测定的线性范围为1.0yg/ml-133 ii g/ml ，相关系数为0. 9966，检出限为0. 5 y g/ml 。
全文摘要
本发明公开了一种用于检测人血清IgG的同步散射光谱试剂盒及使用方法，本试剂盒由下述三种试剂组成，其中试剂1含pH6.0～8.0的Tris-HCl缓冲溶液和30.0～50.0mg/mL PEG20000溶液，试剂2为250μg/ml羊抗兔IgG，试剂3为兔IgG校准品。本试剂盒的测试步骤为(1)制备标准曲线；(2)制备检测样品测试体系；(3)用样品的最终同步散射值参照标准曲线，求到最终浓度值。本发明试剂盒可以精确定量检测IgG，具有操作简便、快速、灵敏、检出限低、线性范围宽，不需繁琐的相分离步骤，样品消耗量少的优点。
文档编号G01N21/47GK101718781SQ20091011450
公开日2010年6月2日 申请日期2009年10月29日 优先权日2009年10月29日
发明者孙双娇, 李纪顺, 范燕燕, 蒋治良 申请人:广西师范大学