专利名称：一种快速检测奶油饼干中三聚氰胺的方法
专利说明一种快速检测奶油饼干中三聚氰胺的方法 发明领域 本发明属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是涉及一种快速检测奶油饼干中三聚氰胺的方法领域。
背景技术：
三聚氰胺(Melamine，MEL)，学名1，3，5-三氨基-2，4，6-三嗪(1，3，5-Triamine-2，4，6-Triazine)，分子式C3N3(NH2)3，分子量126.12。简称三胺、又称2，4，6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺等，白色结晶粉末，无味，是一种三嗪类含氮杂环化合物，重要的有机化工原料，广泛用于塑料、涂料、粘合剂、食品包装材料、消毒剂、化肥和杀虫剂的生产。三聚氰胺最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂(MF)的原料。由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标，因此三聚氰胺也被人称为“蛋白精”。资料表明，三聚氰胺可能从环境、食品包装材料等途径进入到食品中，其含量很低。三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加到食品中。
蛋白质主要由氨基酸组成，其含氮量一般不超过30％，而三聚氰胺的分子式含氮量为66.7％左右。通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过测出含氮量来估算蛋白质含量，因此，添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。但是食用添加了三聚氰胺的食品，会导致中毒和肾结石。2007年，美国报道了宠物猫、狗因食入含三聚氰胺饲料而死亡的事件，事后调查表明掺杂了6.6％三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的原因。随后美国食品药品管理局(FDA)制订了相应的检验方法。2008年9月11日，有关部门披露，某些奶粉中含有三聚氰胺，导致了一些婴幼儿因食用含三聚氰胺奶粉而出现肾结石症状，少数婴幼儿抢救无效而死亡。随后在一些液体奶、乳制品及含乳食品中也检出三聚氰胺，给整个食品行业带来巨大的冲击，社会影响极坏。在检出三聚氰胺的产品中，石家庄三鹿牌婴幼儿配方奶粉三聚氰胺含量很高，其中最高的达2563mg/kg。2008年10月，国家有关部门参考美国食品药品管理局(FDA)和美国食品化学品法典(FCC)三聚氰胺检测方法，制定了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》国家标准(GB/T223888-2008)。2008年10月7日，卫生部等5部门公布了乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值，含乳15％以上的食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的产品一律不得销售。
测定三聚氰胺的方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)。HPLC的灵敏度较低且无法提供结构信息，一般常作为筛选方法；GC-MS、HPLC-MS/MS能够进行确证分析。GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》规定了原料乳与乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即HPLC法、GC-MS法、HPLC-MS/MS法。上述方法均是测定原料乳与乳制品、饲料、宠物食品、植物源性蛋白质等中的三聚氰胺，测定奶油饼干中三聚氰胺的方法未见公开报道。
目前公开报道检测食品中的三聚氰胺主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法，但是现有三聚氰胺的检测方法样品前处理繁琐，需耗用大量试剂、费时、成本高，而且每次检测样品有限，不适应大量标本的筛查，也不适合现场快速的检测，不能高通量的检测样品中三聚氰胺。因此，探索和研究简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的检测食品中三聚氰胺的方法，对于维护食品安全，保护人民的身体健康和消费者的合法权益，促进食品行业的快速发展均具有重要意义。
发明内容
针对目前未见公开报道测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，现有三聚氰胺的检测方法样品前处理繁琐，需耗用大量试剂、费时、成本高，而且每次检测样品有限，不适应大量标本的筛查，也不适合现场快速的检测，不能高通量的检测样品中三聚氰胺的缺陷。
本发明的目的在于提供了一种测定奶油饼干中三聚氰胺的简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法。
本发明具体提供了一种测定奶油饼干中三聚氰胺的确证和定量方法。
本发明的技术方案通过建立了GC-MS法测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，用乙酸-乙腈-水溶液超声提取奶油饼干中的三聚氰胺，离心后过滤，滤液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，微波加热衍生化反应，缩短反应时间，通过对选择离子监测模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。从而建立了一种测定奶油饼干中三聚氰胺简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法。
本发明具体提供了一种测定奶油饼干中三聚氰胺的方法步骤如下 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取10-30min，4500r/min离心5-10min，过滤后经固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化，3-5mL水平衡，准确移取4-6mL滤液上柱，依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L盐酸溶液，3-5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3-5mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在45-75℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应2-8min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
本领域所熟知，三聚氰胺微溶于水(3.1g/L，20℃)、乙醇、弱酸和弱碱等，可溶于甲醇、吡啶、二甲基亚砜，水溶液呈弱碱性。三聚氰胺属于极性化合物、碱性化合物，因此提取溶剂一般都选用稀酸溶液、有机溶剂和水的混合溶液、极性较强的有机溶剂或缓冲溶液。本发明选择乙酸-乙腈-水溶液为提取溶剂，加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率，加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白，减少干扰，采用的乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀奶油饼干样品中的蛋白质和部分脂肪，过滤迅速，滤液澄清。
本发明通过对选择离子监测模式(SIM)离子选择的优化，有效消除复杂基体干扰三聚氰胺的特征离子为99、171、197、285、327、342，GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中GC-MS法使用的特征离子为99、171、327、342。经对奶油饼干加标样品的分析，样品基质中含有99、171离子碎片，对定量测定干扰大，本发明最终选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342离子组合来定量和确证。
本领域熟知，衍生化反应一般为70℃下加热45min，本发明经过反复试验确定采用在微波高档800W条件下，衍生化5min，进一步缩短了反应时间。
通过实施本发明技术方案，实现本发明内容，可以达到以下有益效果 1.高回收率本发明中采用乙酸-乙腈-水溶液提取奶油饼干样品中的三聚氰胺，使得三聚氰胺以正离子态被吸附在阳离子交换柱上，用0.1mol/L盐酸代替水来淋洗，既可以使三聚氰胺保持正离子态被吸附在阳离子交换柱上，又可以有效除去样品中的水溶性杂质、无机盐和非离子化的脂溶性杂质，可减少进样口和离子源的污染，三聚氰胺回收率介于87-102％。
2.精确度高相对标准偏差小于12.4％。
3.样品前处理时间短2人在180min内可处理30份样品，可实现对奶油饼干样品中三聚氰胺进行高通量检测。
4.沉淀蛋白质效果好本发明提供的检测方法中，创造性的选择了乙酸-乙腈-水溶液为提取溶剂，加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率，加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白，减少干扰，实验发现，乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀牛奶样品中的蛋白质和部分脂肪，过滤迅速，滤液澄清。
5.净化效果好样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量。
6.样品称样量少，溶剂使用量少，污染小，环保样品称样量仅为1克，通过对提取溶剂的筛选和优化，选择出提取效率最佳的溶剂组合，每份奶油饼干样品溶剂使用量仅为22mL，且不使用含氯化物溶剂，废弃物少。
7.流程简单操作性强，易于掌握，无需良好训练和较高技能便能很好完成。
8.使用很少的玻璃器皿只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管、5mL刻度试管、1.5mL高回收率样品瓶。
9.样品制备过程中所使用装置简单只需小型超声波清洗器、小型离心机、12孔固相萃取装置、氮吹仪、涡旋混合器等，便于推广应用。
10.所需空间小，在小型实验室便可完成样品奶油饼干的前处理可在10平方的房间内完成，易于实现现场检验。
11.成本低使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少。
12.本发明通过对选择离子监测(SIM)模式离子选择的优化，有效消除复杂基体干扰选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342，采用上述离子组合来定量和确证，为该发明为首创。
13.本发明首次采用微波加热衍生化反应，缩短反应时间衍生化反应一般为70℃下加热45min，本发明经过试验确定采用在微波高档800W条件下，衍生化5min，大大缩短了反应时间，为该发明为首创。
图1所示为三聚氰胺衍生物质谱图； 图2所示为添加2.5mg/kg三聚氰胺奶油饼干样品SIM质谱图。
具体实施例方式 下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。另外，在下述的说明中，如无特别说明，％皆指重量百分比。
本发明中设备和材料有 Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱仪(美国Agilent公司)，配备7683自动进样器、增强型化学工作站；18790干热样品浓缩装置(美国Pierce公司)；微波炉(格兰仕公司，800W)；小型离心机；超声波清洗器；1.5mL螺纹口高回收率样品瓶(美国Agilent公司，P/N5183-2030)。
三聚氰胺标准品纯度为99.5％，Chemservice公司提供；
混合型阳离子交换固相萃取柱，60mg/3mL，北京振翔公司；衍生化试剂N，O-双三甲基-硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+1％三甲基氯硅烷(TMCS)，德国Macherey Nagel公司；吡啶(优级纯)；甲醇、乙腈(色谱纯)；冰乙酸(分析纯)；盐酸(分析纯)；氨水(分析纯)；水为超纯水。
实施例一 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取10min，4500r/min离心5min，过滤后经固相萃取柱依次用3mL的甲醇活化，3mL水平衡，准确移取4mL滤液上柱，依次用3mL的0.1mol/L盐酸溶液，3mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在45℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应2min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺，使得三聚氰胺以正离子态被吸附在阳离子交换柱上，用0.1mol/L盐酸代替水来淋洗，既可以使三聚氰胺保持正离子态被吸附在阳离子交换柱上，又可以有效除去样品中的水溶性杂质、无机盐和非离子化的脂溶性杂质，可减少进样口和离子源的污染，获得高的回收率，三聚氰胺回收率达87％，相对标准偏差小于12.4％，精确度高；本实验实现2人在180min内可处理30份样品，实现了对样品中三聚氰胺进行高通量检测，样品前处理时间短；选择乙酸-乙腈-水溶液为提取溶剂，过滤迅速，滤液澄清，沉淀蛋白质效果好；样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量，净化效果好；不使用含氯化物溶剂，每份样品溶剂使用量仅为22mL，样品称样量少，溶剂使用量少，废弃物少，污染小，环保；使用很少的玻璃器皿，只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管、5mL刻度试管、1.5mL高回收率样品瓶；样品制备过程中所使用装置简单，只需小型超声波清洗器、小型离心机、12孔固相萃取装置、氮吹仪、涡旋混合器等，便于推广应用；所需空间小，在小型实验室便可完成样品的前处理可在10平方的房间内完成，易于实现现场检验；使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少，成本低。
本发明通过对选择离子监测(SIM)模式离子选择的优化，有效消除复杂基体干扰三聚氰胺的特征离子为99、171、197、285、327、342，GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中GC-MS法使用的特征离子为99、171、327、342。经对奶油饼干加标样品的分析，样品基质中含有99、171离子碎片，对定量测定干扰大，本最终选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342，采用上述离子组合来定量和确证；本发明采用微波加热衍生化反应，大大缩短了反应时间，以上两点为该发明为首创。
实施例二 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取30min，4500r/min离心10min，过滤后经固相萃取柱依次用5mL的甲醇活化，5mL水平衡，准确移取6mL滤液上柱，依次用5mL的0.3mol/L盐酸溶液，5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用5mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在75℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应8min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺，既可以使三聚氰胺保持正离子态被吸附在阳离子交换柱上，又可以有效除去样品中的水溶性杂质、无机盐和非离子化的脂溶性杂质，可减少进样口和离子源的污染，获得高的回收率，三聚氰胺回收率达102％，相对标准偏差小于12.4％，精确度高，且过滤迅速，滤液澄清，沉淀蛋白质效果好。
本实验2人在180min内可处理30份样品，实现了对样品中三聚氰胺进行高通量检测，样品前处理时间短；样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量，净化效果好；不使用含氯化物溶剂，每份样品溶剂使用量仅为22mL，样品称样量少，溶剂使用量少，废弃物少，污染小，环保；使用很少的玻璃器皿，只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管、5mL刻度试管、1.5mL高回收率样品瓶；样品制备过程中所使用装置简单，只需小型超声波清洗器、小型离心机、12孔固相萃取装置、氮吹仪、涡旋混合器等，便于推广应用；所需空间小，在小型实验室便可完成样品的前处理可在10平方的房间内完成，易于实现现场检验；使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少，成本低。
本发明通过选择离子监测(SIM)模式离子选择的优化，有效消除复杂基体干扰，经对奶油饼干加标样品的分析，样品基质中含有99、171离子碎片，对定量测定干扰大，选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342组合来定量和确证。
实施例三 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取20min，4500r/min离心8min，过滤后经固相萃取柱依次用4mL的甲醇活化，4mL水平衡，准确移取5mL滤液上柱，依次用4mL的0.2mol/L盐酸溶液，4mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用4mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在60℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应4min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
本实验采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺获得高的回收率达90％，相对标准偏差小于12.4％，精确度高，且过滤迅速，滤液澄清，沉淀蛋白质效果好；实现了对样品中三聚氰胺进行高通量检测，样品前处理时间短；样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量，净化效果好；不使用含氯化物溶剂，溶剂使用量少，污染小；样品制备过程中所使用装置简单，所需空间小，在小型实验室便可完成，便于推广应用和实现现场检验；使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少，成本低；本发明通过选择离子监测(SIM)模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。
实施例四 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取25min，4500r/min离心9min，过滤后经固相萃取柱依次用4mL的甲醇活化，3.5mL水平衡，准确移取4.5mL滤液上柱，依次用3.5mL的0.2mol/L盐酸溶液，3.5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在46℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应3min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
本实验采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺获得高的回收率达88％，相对标准偏差小于12.4％，精确度高，且过滤迅速，滤液澄清，沉淀蛋白质效果好；实现了对样品中三聚氰胺进行高通量检测，样品前处理时间短；样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量，净化效果好；不使用含氯化物溶剂，溶剂使用量少，污染小；样品制备过程中所使用装置简单，所需空间小，在小型实验室便可完成，便于推广应用和实现现场检验；使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少，成本低；本发明通过选择离子监测(SIM)模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。
实施例五 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取29min，4500r/min离心9min，过滤后经固相萃取柱依次用5mL的甲醇活化，5mL水平衡，准确移取5.5mL滤液上柱，依次用4.5mL的0.3mol/L盐酸溶液，5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用5mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在74℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应7min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
本实验采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺获得高的回收率达101％，相对标准偏差小于12.4％，精确度高，且过滤迅速，滤液澄清，沉淀蛋白质效果好；实现了对样品中三聚氰胺进行高通量检测，样品前处理时间短；样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量，净化效果好；不使用含氯化物溶剂，溶剂使用量少，污染小；样品制备过程中所使用装置简单，所需空间小，在小型实验室便可完成，便于推广应用和实现现场检验；使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少，成本低；本发明通过选择离子监测(SIM)模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。
实施例六 称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取11min，4500r/min离心7min，过滤后经固相萃取柱依次用3mL的甲醇活化，3mL水平衡，准确移取4.5mL滤液上柱，依次用3mL的0.1mol/L盐酸溶液，3mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在50℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高档条件下反应6min，冷却，转移至1.5mL高回收率样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
本实验采用乙酸-乙腈-水溶液提取样品中的三聚氰胺获得高的回收率达95％，相对标准偏差小于12.4％，精确度高，且过滤迅速，滤液澄清，沉淀蛋白质效果好；实现了对样品中三聚氰胺进行高通量检测，样品前处理时间短；样品加标谱图“干净”，在三聚氰胺衍生物出峰时间无干扰，利于准确确证和定量，净化效果好；不使用含氯化物溶剂，溶剂使用量少，污染小；样品制备过程中所使用装置简单，所需空间小，在小型实验室便可完成，便于推广应用和实现现场检验；使用的试剂为实验室常用试剂，价格便宜，易于采购，用量少，成本低；本发明通过选择离子监测(SIM)模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。
实施例七 衍生化反应一般为70℃下加热45min，通过实验微波加热衍生化反应，固定其它条件不变，改变微波加热时间，分别衍生2、3、4、5、6、7、8min，结果在微波高档800W条件下，衍生化5min，三聚氰胺衍生化产物的相对含量最大，峰面积与在70℃下，加热45min基本相当。最优选定衍生时间5min，大大缩短了反应时间。
实施例八 参见附图1为三聚氰胺的全扫描(SCAN)质谱图。选择离子监测(SIM)经常被用于降低检测限和提高定量重现性。SIM的离子选择应能有效消除复杂基体干扰，三聚氰胺的特征离子为99、171、197、285、327、342，经对奶油饼干加标样品的分析，样品基质中含有99、171离子碎片，对定量测定干扰大，最终选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342，采用上述离子组合来定量和确证，附图2为添加2.5mg/kg三聚氰胺奶油饼干样品SIM色谱图，三聚氰胺的保留时间为6.958min。
实施例九 三聚氰胺的保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子的相对丰度见表1。
定性依据进行样品测定时，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致(变化范围在±0.5％之内)；并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度相差不大于20％，则可判断样品中存在三聚氰胺。
定量方法外标法定量，采用本领域常规技术可知。
表1三聚氰胺的保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子的相对丰度 实施例十 配制三聚氰胺标准系列工作溶液，三聚氰胺浓度为0.05-2.50μg/mL之间，衍生后上机测试。通过软件计算线性范围、相关系数。检出限(LOD)是指信噪比(S/N)大于3时的最低检测浓度。线性方程、相关系数、检出限见表2。
表2三聚氰胺线性范围、相关系数、线性方程及检出限测定结果 实施例十一 以不同类别的奶油饼干为样品，做三个水平的添加试验，分别为0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.5mg/kg，每个添加水平重复6次，方法回收率和相对标准偏差符合国内外有关标准和法规的要求，见表3。
表3奶油饼干样品三聚氰胺添加回收率测定结果(n＝6)
权利要求
1、一种快速测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，奶油饼干经前处理后，气相色谱-质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量，其特征在于，所述的前处理步骤如下
称取1.00克奶油饼干样品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度离心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振摇，乙酸-乙腈-水溶液按照体积比1∶70∶29配制，超声提取10-30min，4500r/min离心5-10min，过滤后经固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化，3-5mL水平衡，准确移取4-6mL滤液上柱，依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L盐酸溶液，3-5mL的甲醇淋洗，用吸耳球将小柱吹干，用3-5mL5％氨水甲醇洗脱，用5mL刻度试管收集洗脱液，在45-75℃氮吹浓缩至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化试剂，用玻璃磨口塞密封，经微波加热衍生化反应后转移至样品瓶中，供气相色谱-质谱测定。
2、按照权利要求1的测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的选择离子监测模式，选定三聚氰胺的特征离子为197、285、327、342离子组合来定量和确证。
3、按照权利要求1的测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的微波加热衍生化反应在微波高档800W条件下，衍生化2-8min。
4、按照权利要求3的测定奶油饼干中三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的衍生化5min。
全文摘要
本发明公开了一种快速检测奶油饼干中三聚氰胺的方法，通过用乙酸-乙腈-水溶液超声提取奶油饼干中的三聚氰胺，离心后过滤，滤液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，微波加热衍生化反应，缩短反应时间，通过对选择离子监测模式选择离子的优化，消除基质影响，增强抗干扰能力，降低检测限和提高定量重现性。从而建立了一种测定奶油饼干中三聚氰胺简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法，广泛应用于奶油饼干为代表的食品中三聚氰胺的检测技术领域。
文档编号G01N30/02GK101576544SQ20091011329
公开日2009年11月11日 申请日期2009年4月21日 优先权日2009年4月21日
发明者李锋格, 田延河, 忠 杨, 姚伟琴, 李世雨, 敏 苏, 辉 窦, 朱慧萍, 胡建民 申请人:新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心