专利名称：比色法测定奶粉中游离l-羟脯氨酸的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及奶粉中游离L-羟脯氨酸含量的测定。
背景技术：
L-羟脯氨酸(L-HYP)是人体胶原蛋白的组成成分，但不属于20种常见的氨基酸。 我国最近出台的《食品添加剂使用卫生标准2760-2007》并不允许其作为食品添加剂添加到 各类食品中。但一些企业为了追求利润，以次充好，使自己产品的蛋白质含量达标而在生产 奶粉利含乳饮料过程中非法添加了游离L-HYP，蒙混通过质量监管部门的监督检查而在市 场上销售，这种劣质的乳制品将严重危及到人体健康。L-HYP的测定主要包括比色法、氨基 酸分析仪法和电泳法等，其中以比色法最为常用。我国于1990年将比色法定为《肉与肉制 品L-羟脯氨酸含量测定》的国家标准方法，并且一直沿用至今。但遗憾的是，目前还未出现 对奶粉中游离L-HYP进行测定的方法。
发明内容
本发明专利的目的在于提供一种快速测定奶粉中游离L-羟脯氨酸含量的方法。本发明专利包括对奶粉中蛋白质进行沉淀处理，然后采用经典的比色法对其中的 游离L-HYP进行测定获得相关结果。作为本发明专利的特征，蛋白质沉淀剂为219g/L乙酸锌和106g/L亚铁氰化钾。作为本发明专利的特征，显色剂为对二氨基苯甲醛。本发明专利所建立的方法，实验的精密度在2. 6% -4. 9%之间，完全可以满足定 量分析的需要，表明用此方法测定奶粉中的游离L-HYP是可行的。此外，实验操作简单、快 捷、并且检测成本低。
具体实施例方式准备好主要仪器，包括紫外可见分光光度计、电热恒温水浴锅和电子天平。称取 L-HYP标准品若干克待用。蛋白质沉淀剂包括219g/L乙酸锌(称取219g醋酸锌，加30ml 冰醋酸，溶于水并定容至1000ml)和106g/L亚铁氰化钾(称取106g亚铁氰化钾溶于水， 并定容至IOOOmL)。缓冲溶液(pH 6)称取50. Og柠檬酸，26. 3g氢氧化钠和146. Ig乙酸 钠，蒸馏水溶解，定容至1000mL。再加入200mL蒸馏水和300mL正丙醇，混勻，保存。氯胺 T溶液(此溶液现用现配)称取1. 41g氯胺T溶解IOmL蒸馏水，依次加入IOmL正丙醇和 80mLpH6缓冲液。显色剂(此溶液现用现配)称取10. 09对二氨基苯甲醛，35mL高氯酸溶 解，混勻后缓慢加人65mL异丙醇。配制L-HYP标准贮备液(500 μ g/mL)准确称取L-HYP标准品0. 2500g,加入1滴 lmol/L盐酸溶解，蒸馏水定容至500mL，4°C冰箱保存。标准曲线工作母液配制(现用现 配)分别吸取500 μ g/mL L-HYP标准贮备液0、0. 5、l、2、4、6、8mL至IOOmL容量瓶，定容至 IOOmL,得到浓度分别为0,2. 5、5、10、20、30、40μ g/mL的L-HYP标准曲线工作母液。以蒸馏水为空白，吸取L-HYP标准工作母液lmL，加入氯胺T2mL溶液，充分混勻后室温条件下反 应20min后，加入显色剂2mL，于60°C水浴恒温反应20min，迅速冷却至室温后定容至25ml， 558nm测定吸光度。以L-HYP浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程 和相关系数。 准确称取20g奶粉(精确至0. OOOlg)于250mL容量瓶中，边转动容量瓶边加入亚 铁氰化钾溶液20ml，摇勻后，再加入醋酸锌溶液20ml，以沉淀蛋白质。然后，加水至刻度，混 勻，放置半小时后，弃去上层脂肪，清液用滤纸或脱脂棉过滤，弃去初滤液5 10ml，滤液备 用。从制备好的待测液中吸取2mL于25mL具塞试管。吸取待测液lmL，加入氯胺T2mL溶 液，充分混勻后室温条件下反应20min后，加入显色剂2mL，于60°C水浴恒温反应20min，迅 速冷却至室温后定容至25ml，以蒸馏水为空白，558nm测定吸光度。每个样品做3次重复。 将吸光度代人回归方程求出羟脯氨酸含量。
权利要求
比色法测定奶粉中游离L-羟脯氨酸，包括对奶粉中蛋白质进行沉淀处理，然后采用经典的比色法对其中的游离L-HYP进行测定从而获得相关结果。
2.根据权利要求1所述的比色法测定奶粉中游离L-羟脯氨酸，其特征在于蛋白质沉 淀剂为219g/L乙酸锌和106g/L亚铁氰化钾。
3.根据权利要求1所述的比色法测定奶粉中游离L-羟脯氨酸，其特征在于显色剂为 对二氨基苯甲醛。
全文摘要
比色法测定奶粉中游离L-羟脯氨酸，是一种快速测定奶粉中游离L-羟脯氨酸含量的方法。我国相关法规不允许L-羟脯氨酸作为食品添加剂添加到各类食品中，但一些企业为了追求利润，在生产奶粉过程中非法添加游离L-HYP，使产品的蛋白质含量达标。但目前国内还未出现对奶粉中游离L-HYP进行测定的方法。本发明对奶粉中蛋白质进行沉淀处理，然后采用经典的比色法对其中游离L-HYP进行测定从而获得相关结果。实验的精密度在2.6％-4.9％之间，完全可以满足定量分析的需要。此外，实验操作简单、快捷、并且检测成本低。
文档编号G01N21/78GK101871893SQ20091004966
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月21日 优先权日2009年4月21日
发明者陈延霞 申请人:陈延霞