专利名称：H5亚型猪流感病毒抗体检测试剂盒的利记博彩app
技术领域：
本实用新型涉及猪的一种病毒抗体的快速诊断器具，具体是H5亚型猪流感病毒抗体检 测试剂盒。
背景技术：
猪流感(swine influenza, SI)是由正粘病毒A型流感病毒(SIV)引起的猪的一种急性、传染 性呼吸道疾病，以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为主要特征。 由于SIV可损害呼吸道上皮细胞，患病猪容易继发和并发猪呼吸繁殖障碍综合征、猪伪狂犬 病、猪呼吸道冠状病毒感染、猪圆环病毒病、猪传染性胸膜肺炎、猪传染性萎縮鼻炎、猪巴 氏杆菌病等其它疾病，使疫情变得复杂而反复，是集约化养猪场普遍存在且难以根除的猪呼 吸道病之一，对养猪业危害极大。近年来，对我国部分省市猪群猪流感的血清学调査表明近 年我国猪群中Hl、 H3亚型猪流感的污染相当普遍，甚至猪群中还出现了 H5N1和H9N2亚 型SI的感染。由于猪上皮细胞同时具有人流感病毒和禽流感病毒的病毒受体，其作为毒株间 基因重组的流感病毒"混合器"，在流感病毒跨种属障碍而感染新宿主的过程中，扮演着流感 病毒中间宿主及多重宿主的作用，在人和动物流感的病原学、生态学及流行病学中占有举足 轻重的地位，具有重要的公共卫生意义，因此，对猪SIV感染的监测是预测和防止流感大暴 发的最重要手段。
目前，用于猪流感病原和抗体检测的方法主要有病毒的分离鉴定、血凝和血凝抑制试验、 神经氨酸酶抑制试验、中和试验、琼脂凝胶扩散试验、免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、聚 合酶链式反应、实时荧光定量PCR和NASBA法等方法，上述技术和方法虽然可以检测猪流 感病毒及其抗体水平，在实践中也取得一定的效果，但均存在试验操作复杂，耗时长，需要 特定的专业技能和仪器设备等，成本昂贵，常限于实验室内进行，很难在基层普及和推广。 因此，研制开发适用于养殖基层的快捷、简便的H5亚型猪流感病毒抗体检测器具，对猪群 H5亚型猪流感病毒抗体水平进行实时监测，对流感的预防和控制有重要意义。
发明内容
本实用新型的目的是克服上述已知技术存在的不足，提供一种快捷、简便的H5亚型猪 流感病毒抗体检测试剂盒，可有效检测H5亚型猪流感病毒抗体水平，用于H5亚型猪流感病 毒感染的血清学监测。本实用新型的目的是这样实现的-
本设计的H5亚型猪流感病毒抗体检测试剂盒有一个盒体10，该盒体10内有采用重组表 达的H5亚型猪流感病毒血凝素HA1蛋白为包被抗原的密封包装的检测板1，作为洗涤和稀 释使用的20倍浓縮的洗涤液或样品稀释液2，阴性血清对照3，阳性血清对照4，酶结合物 工作液5，显色液A 6，显色液B7，终止液8和操作说明书9;上述液体试剂均分装在小瓶 内。
用于包被密封包装的检测板1的重组表达的H5亚型猪流感病毒血凝素HA1蛋白保留了 H5亚型猪流感病毒血凝素蛋白的抗原活性，用于检测H5亚型猪流感病毒的血凝素特异性抗 体。
与现有技术相比，本实用新型具有下列优点-
本实用新型以基因工程表达的重组血凝素HA1蛋白为检测抗原，该重组蛋白为非全病毒 抗原、安全性好，不含无关杂蛋白，只与H5亚型猪流感病毒血凝素抗体特异结合，不与猪 的其它疫病血清发生交叉反应，特异性强，敏感性高；使本实用新型检测H5亚型猪流感病 毒抗体，无需另配其它试剂，样品无需无菌处理，按试剂盒说明书操作单一样品在2-3小时 内即可判定结果，操作简便快速，人人都可操作，能较好满足不同层次人员的需要，如疫病 监测、海关检疫、卫生防疫、集约化养殖到个体养殖等，易于大范围推广应用，具有良好的 应用前景。
图l是本实用新型主视图。 图2是本实用新型内部俯视图。
图中，1、密封包装的检测板；2、 20x浓縮洗涤液或样品稀释液；3、阴性血清对照； 4、阳性血清对照；5、酶结合物工作液；6、显色液A; 7、显色液B; 8、终止液；9、操作 说明书；10、 盒体。
具体实施方式使用步骤如下
1) 使用前将20x浓縮洗涤液或样品稀释液2恢复至室温，摇动使沉淀的盐溶解，然后用
蒸馏水或去离子水作20倍稀释(如50mL浓縮液定容到1000mL)，即为洗涤液或样品稀释液；
2) 将待检血清用样品稀释液作1: 400稀释(如2nL待检样品加入到800^iL稀释液中)；
3) 取出检测板l，分别在相应孔中加入阳性血清对照4和阴性血清对照3(不用稀释)、稀 释好的待检血清各lOOpL，可各重复1孔。置37'C孵育30分钟；
4) 甩掉步骤3中液体，每孔加洗漆液20(HiL，洗涤6次，每次间隔l分钟，拍干；5) 每孔加入酶结合物工作液5 100|xL， 37'C孵育30分钟；
6) 甩掉酶结合物工作液5，每孔加洗涤液200pL，洗涤6次，每次间隔l分钟，拍干；
7) 将显色液A 6和显色液B 7按1:1混合，每孔加入100ML， 37'C避光孵育5-15分
钟；
8) 加终止液8 50jiL，用酶标仪在450nm波长下读取每孔光吸收值(OD45Q,值)。
9) 结果判定
① .试验结果同时符合下列条件，方为有效两孔阳性对照OD45o平均值应^0.6;阴性对 照平均值芸0.25;
② 临界值的计算临界值上限=(阳性对照孔OD45C均值-阴性对照0045()均值)><0.20+阴性 对照OD45Q平均值；临界值下限=(阳性对照孔OD柳均值-阴性对照OD45Q均值)x0.15+阴性对 照OD450平均值
③ 结果判定被检样品0045()平均值<临界值下限，为H5亚型猪流感病毒抗体阴性；被
检样品OD45o平均值^临界值上限，为H5亚型猪流感病毒抗体阳性；介于二者之间，判为可 疑，应复检，复检OD45o值S临界值上限(复检时)，判为H5亚型猪流感病毒抗体阳性，反之
则判为阴性。
备注不用时，应于2 8'C避光保存，开封后，应在3个月内用完。
权利要求1.H5亚型猪流感病毒抗体检测试剂盒，其特征在于该检测试剂盒有一个盒体(10)，盒体(10)内有采用重组表达的H5亚型猪流感病毒血凝素HA1蛋白为包被抗原的密封包装的检测板(1)，作为洗涤和稀释使用的20倍浓缩的洗涤液或样品稀释液(2)，阴性血清对照(3)，阳性血清对照(4)，酶结合物工作液(5)，显色液A(6)，显色液B(7)，终止液(8)和操作说明书(9)；上述液体试剂均分装在小瓶内。
专利摘要H5亚型猪流感病毒抗体检测试剂盒涉及猪的一种病毒抗体的快速诊断器具。其组成包括一个盒体(10)，盒体(10)内有采用重组表达的H5亚型猪流感病毒血凝素HA1蛋白为包被抗原的密封包装的检测板(1)，作为洗涤和稀释使用的20倍浓缩的洗涤液或样品稀释液(2)，阴性血清对照(3)，阳性血清对照(4)，酶结合物工作液(5)，显色液A(6)，显色液B(7)，终止液(8)和操作说明书(9)；上述液体试剂均分装在小瓶内。用于包被密封包装的检测板的重组表达的H5亚型猪流感病毒血凝素HA1蛋白保留了H5亚型猪流感病毒血凝素蛋白的抗原活性，用于检测H5亚型猪流感病毒的血凝素特异性抗体。
文档编号G01N33/569GK201319032SQ200820166369
公开日2009年9月30日 申请日期2008年10月20日 优先权日2008年10月20日
发明者周继勇, 可 尹, 焰 颜 申请人:浙江大学