专利名称：：一种新的复方头孢曲松钠他唑巴坦钠的检测方法一种新的复方头孢曲松钠他唑巴坦钠的检测方法发明背景头孢曲松钠(CeftriaxoneSodium)是1978年研制成功的第三代半合成头孢菌素类抗生素，已经被英、美、德、日以及我国药典收载。其抗菌谱与青霉素钠和头孢噻吩铵钠相似。对肠杆菌科细菌有强大的活性，对流感杆菌、淋球菌和脑膜炎球菌的抗菌活性在第三代头孢菌素中最强。该产品上市多年，在全世界多个国家与地区使用，受到广泛好评，至今仍是临床一线用药。由于大量和广泛的临床应用，甚至近年来滥用的出现，临床上产生了耐头孢曲松的耐药菌。这类耐药菌大多数是通过产0-内酰胺酶降解头孢曲松起作用的，这样降低了头孢曲松钠的抗菌活性。针对这种情况开发的e-内酰胺酶抑制剂与抗生素合用后可有效抑制细菌的耐药性，恢复抗生素的活性，因此，采用"抗生素+P-内酰胺酶抑制剂"的复方组合能有效地抑制了产酶菌的耐药问题。由这种思路开发的复方制剂如"阿莫西林克拉维酸"、"头孢哌酮钠舒巴坦钠"、"哌拉西林钠舒巴坦钠"等在临床上获得了很大的成功。另外湘北威尔曼制药有限公司生产的注射用头孢曲松钠与注射用舒巴坦钠的组合包装在临床上己应用多年，其作用早已得到临床医师的广泛认可。按照协同式药物组合的研发思路，故开发了本品种。但从制剂的角度来看，因为头孢曲松钠含有一定水分，而他唑巴坦钠遇水降解，不稳定，如果简单的将两者混合到一起，则无法解决产品的稳定性问题，须在制剂工艺上解决产品的稳定性问题。同时由于之前没有复方制剂，均是单一成分做检测，两者混合后的复方检验需要建立新的检测方法，这样的检测方法能够检测出复方中单一成分的含量和有关杂质，同时，这一检测方法对单一成分的测定还不能受到另一成分的影响，而且能够达到专属灵敏、简便操作等要求，并能够在制剂工厂以及各地检测机构或医院对产品质量进行检查，针对这样的要求我们建立了一个新的检测复方头孢曲松钠他唑巴坦钠的方法。
发明内容我们釆用在工厂、药品检验所、医院等常见的高效液相色谱法(HPLC)通过优化流动相、流速、检测波长等指标，建立了一种新的检测方法，这种方法可以检测复方头孢曲松钠他唑巴坦钠中两种单一成分的含量和有关物质，而不会出现两种成分相互影响与干扰，该方法简便易行、操作步骤少，方法专属性强、灵敏度高、线性范围大、重复性好等，可用于复方制剂和原料的常规检测。专利实例实施例一、复方原料与制剂的初步检测实验采用"注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠"，比例为6:1，规格为1.0g，因其他配比和规格在制剂上简单的装量变化，其原料来源、制备工艺均无显著差异。故用该配比、规格样品进行研究。试验样品为白色、类白色或微黄白色粉末，进行以下各种试验。1、鉴别试验两种组分他唑巴坦和头孢曲松均以钠盐形式存在，灼烧时应呈现钠盐的火焰反应。取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取本品，在无色的火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。两种组分他唑巴坦钠和头孢曲松钠极性不同，可通过HPLC法进行分离，并用对照品进行对照鉴别。取本品和他唑巴坦和头孢曲松的标准品，分别用流动相制成每lml含O.48mg头孢曲松钠和O.08mg他唑巴坦钠的溶液，按照本专利以下描述的含量测定项下高效液相色谱法试验，结果供试品峰与对照品峰一致。(试验方法见实施例二、三)2、检测试验试验样品酸度检查取试验样品加注射用水制成每ml含100mg的溶液，用酸度计测定，结果试验样品的pH在5.0-7.5之间，为合格产品。试验样品溶液澄清度检查取试验样品5瓶，分别加水制成每lml中约含本品0.lg的溶液，与1号浊度标准液进行比较，检査澄清度。结果试验样品为澄明液体，未超过1号浊度标准液，澄清度符合相关规定，为合格样品。试验样品溶液颜色检査取试验样品5瓶，加水溶解，置于25ml的纳氏比色管中，加水稀释至10ml，与黄色色调标准比色液比较。结果试验样品为澄明液体，颜色不深于5号黄色标准比色液，符合相关规定，为合格样品。试验样品澄明度检查取试验样品五瓶，分别加水制成每ml中含100mg的溶液，置光照度为10001500Lx的澄明度检査仪上检査，不合格率均小于5%，符合澄明度检査细则和判断标准规定，为合格样品。试验样品水分检查取试验样品lg，按水分检测法测定，结果试验样品水分含量均在8%左右符合标准，为合格样品。由于该制剂是由无菌原料直接分装的，所以，原料与制剂的成分、含量上完全一样，没有差别。采用本专利的检测方法对复方的原料进行的检测，得到与制剂相同的结果。实施例二、制剂的分析和质量控制方法为控制产品的质量，必须对产品中的有可能出现的杂质进行分析研究。之前由于没有将两个物质混合在一起使用的经验，所以现有的资料也只有对单一头孢曲松钠(或他唑巴坦钠)中有关杂质的检验方法。这样的检验方法虽然是对单一物质检验有效，但是否能够检验混合物中的有关杂质还不清楚,因为制备成混合制剂以后，两种主要成分是否会相互影响对方的检测，两种杂质是否也会影响对方的检测有很多不确定因素，需要进行大量的试验来验证。所以，我们根据头孢曲松钠、他唑巴坦钠单一物质检测方法，建立了相应的对复方物质中杂质的检测方法。1、有关杂质物质检测由于HPLC方法巳经能够很好地用于单一的两种成分检测，因此我们采用HPLC方法建立复方的杂质检测方法。试验首先进行破坏性试验，1)、头孢曲松在4000Ix光强度下照射24小时；2)、含头孢曲松0.9mg/ml溶液10ml，加入0.25mol/L的氢氧化钠溶液0.5ml，放置30分钟；3)、他唑巴坦O.15mg/ml溶液lOml;加入0.25mol/L的氢氧化钠溶液0.5ml，摇匀，立即进样；4)、含头孢曲松0.9mg/ml与他唑巴坦0.15mg/ml的混合溶液10ml,分别加入0.25tnol/L的氢氧化钠溶液0.5ml,放置10分钟。取经过上述三种破坏性试验的溶液精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相(配方见后)稀释至刻度，在下述色谱条件下测试，检测他唑巴坦钠、头孢曲松钠是否有明显降解，以降解产物峰与主峰分离>2.0,头孢曲松钠降解产物与他唑巴坦钠主峰分离度〉1.5为合格标准的判断指标。我们首先采用如下的色谱条件进行筛选最佳的检测方法色谱条件(l):试验采用Waters515泵，Waters2487紫外检测器；色谱柱UltimateXB-NH2正相分析柱；规格5utn，4.6*50證;流动相正己烷-氯仿溶液(2:1);检测波长220nm—260咖;流速0.13ml/min;进样量1030ul。色谱条件(2):试验采用Waters515泵，Waters2487紫外检测器;色谱柱Di柳onsil頂"250X4.6mm5um;流动相乙腈-磷酸二氢钾溶液(0.015mol/L)-四丁基氢氧化钠溶液(10%)(290-305:675-690:35-5)(用磷酸调pH值为4.0);检测波长220nm—260nm;流速0.l3ml/min;进样量1030ul。色谱条件(3):试验采用Waters515泵，Waters2487紫外检测器;色谱柱DiamonsilC18250X4.6mm5um;流动相乙腈-磷酸二氢钾溶液(O.015mol/L)-甲醇(10%)(290-305:675-690:35-5)(用磷酸调pH值为4.0);检测波长220nm—260nm;流速0.13ml/min;进样量1030u1。色谱条件(4):试验采用Waters515泵，Waters2487紫外检测器；色谱柱DiamonsilC18250X4.6mm5um;流动相乙腈-磷酸二氢钾溶液(O.015mol/L)-乙醇(20X)(290-305:675-690:35-5)(用磷酸调pH值为4.0);检测波长220nm—260nm;流速0.13ml/min;进样量1030ul。采用上述方法检测发现，色谱条件(1)、(3)、(4)虽然也可以用于检测但两者的分离度都小于l.O，两组分都分不开，而色谱条件(2)的分离度较好，但还需优化。经过三种破坏性试验的样品在色谱条件(2)试验条件下他唑巴坦钠、头孢曲松钠均无明显降解，头孢曲松钠杂质峰与他唑巴坦钠主峰分离度〉1.5。哪是不是方法学不够灵敏没检测出杂质？还是本身就没有出现杂质？对此，我们首先采用LC-MS对样品进行了检验，发现经过上述破坏试验的样品，在LC-MC检测条件下也没有发现有新的杂质的出现，说明本检验方法是可靠。更进一步，我们提取头孢曲松峰、他唑巴坦峰在200nm400nm的二极管阵列光谱图，进行峰纯度检查，结果头孢曲松峰、他唑巴坦峰的纯度角均小于他们的纯度阈值，表明头孢曲松峰、他唑巴坦峰均为纯色谱峰。根据头孢曲松钠和他唑巴坦钠的自身特性，头孢曲松钠具有光不稳定性，他唑巴坦钠具有碱性容易中的不稳定性，因此，采用光降解头孢曲松钠和碱破坏他唑巴坦钠获得相应的降解物，采用含量测定的色谱条件进行分离，有关物质均能与主组分分离，因此，该色谱条件对含量测定具有专属性。我们以上述溶液作为检测对象，对我们建立的HPLC检测方法进行了优化，最后确定了以下方法作为最佳鉴定方法试验采用Waters515泵，Waters2487紫外检测器;色谱柱DiamonsilC,8250X4.6mm5咖；流动相乙腈-磷酸二氢钾溶液(0.03mol/L)-四丁基氢氧化钠溶液(10%)(300:685:15)(用磷酸调pH值为4.0);检测波长220咖；流速lral/min;进样量20ul。我们以上述检验方法，对检验样品进行了检测，结果如下样品溶液制备取本品适量，精密称定，用流动相溶解制成每ltnl中含头孢曲松钠0.48mg和他唑巴坦钠0.08mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取0.33ml至10ml量瓶，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液。精密量取供试品溶液lml，置100rnl量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20U1注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的2025%，再取供试品溶液20u1注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。试验检验了三批生产样品有关物质检查结果均符合规定。结果见表1及图广3。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结论注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠的有关物质含量较低，三批样品杂质含量均在1.0%1.9%;任一峰面积最大杂质含量均小于0.5%0.9%。2、头孢曲松钠聚合物由于头孢曲松钠还有聚合物产生，如果聚合物含量高会导致不良反应的发生，需要在产品中控制聚合物的含量，按照相关要求必须对聚合物进行检测。以往，只有在单方头孢曲松钠中进行聚合物的检测，还没有关于复方头孢曲松他唑巴坦钠混合后中进行聚合物测定的研究报告，是否单方测定的条件可以准确反应复方中的情况，或者说，复方混合物是否会影响原来条件的检测的准确性，对此，我们也进行了研究。我们首先进行了头孢曲松聚合物色谱条件与测定方法试验。色谱条件与系统适用性试验用葡聚糖凝胶G-10(40120ntn)为填充剂，玻璃柱内径为1.31.5cm，床体积为5060ml;流动相A为磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠21.85g和磷酸二氢钠5.38g，加水1000ml使溶解，混匀，调节pH值为7.0)，流动相B为0.01%的十二垸基硫酸钠溶液；流速为每分钟linl;检测波长为254nrn。以流动相A为流动相，用lmg/L蓝色葡聚糖2000溶液进样20(Vl进行测定，理论板数以蓝色葡聚糖2000峰计算应不低于700，拖尾因子应在0.75~1.5之间。对照品溶液以流动相B为流动相，重复进样200yil，峰面积的相对标准差应小于5.0%。对照品溶液的制备取头孢曲松对照品约25mg,精密称定，置250ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。测定法取本品约0.2g，精密称定，置lOml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，立即取200]il注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另取对照品溶液20(Hil注入色谱仪，以流动相B为流动相，记录色谱图，按外标法计算。他唑巴坦钠干扰性实验取他唑巴坦钠原料适量，精密称定，加流动相A溶解并制成每ml含他唑巴坦20mg的溶液，作为供试品溶液，照头孢曲松钠聚合物方法测定(见图3)。结果表明他唑巴坦钠对本品头孢曲松钠聚合物测定无干扰。检出限取头孢曲松对照品，依次稀释成不同浓度，用上述色谱条件进行检测，结果见图4。头孢曲松的最低定量限(LOQ)为2.23ng，最低检出限(LOQ)为0.67ng。测定结果及限度取三批试制样品，测定头孢曲松聚合物，结果见表2及图4-7。表5头孢曲松聚合物检査结果批号Wm9901Wm9902沐m9903聚合物％0.40.50.5根据测试结果和注射用头孢曲松钠的质量标准要求，质量标准中拟定本品头孢曲松聚合物以头孢曲松计不得过1.0%。为了进一步验证这样的情况，我们对于上述方法采用了LC-MS验证，结果发现，采用上述方法测定的结果和LC-MS方法测定的结果能够很好的对应，说明复方药物虽然是混合物，但是这样的混合物并不影响原来测定聚合物方法的专属性和灵敏度。实施例三、用于该复方制剂的新检测方法的建立和制剂含量测定验证为控制产品的质量，对复方制剂中两个主要成分的含量控制是个重要指标，对于单一头孢曲松钠、他唑巴坦钠两种含量检测已经有比较多的研究方法建立，中国药典也有指定的方法。但是，在制备成混合物后，是否这样的方法仍然能够用于混合物中成分的检测？或者说，混合物中两个物质是否会相互影响对方的检测？这样的问题尚无人进行研究，其中还有很多不确定因素需要面对和解释。对此，我们对于如何开展复方制剂中两种成分的含量进行检测方法进行了研究。由于HPLC方法已经能够很好地用于单一的两种成分检测，同时HPLC方法也是中国药典推荐的方法，因此，我们采用HPLC方法建立复方的两个成分含量的检测方法。色谱条件选用试验采用Waters515泵，沐aters2487紫外检测器；色谱柱Di柳onsil"1C18250X4.6咖5um;流动相乙腈-磷酸二氢钾溶液(0.03mol/L)-四丁基氢氧化钠溶液(10%)(300:685:15)(用磷酸调pH值为4.0);检测波长220nm;流速lml/min;进样量20ul。流动相的选择和优化本品为复方制剂，流动相的选择主要考虑两主峰的出峰时间，分离效果以及主峰与杂质峰的分离情况，选用乙腈-磷酸二氢钾溶液(0.015mol/L)-甲醇(10%)时，两组份的分离度太小，而且头孢曲松钠的保留时间过长，不适于测定。适当调节流动相组成。为避免头孢曲松保留时间过长，采用乙腈-磷酸二氢钾溶液(O.03mol/L)-四丁基氢氧化铵溶液(10W(300:685:15)(用磷酸调pH值为4.0)作为本品的流动相，该流动相能够使样品中的两个组分有效检出，分离度均大于1.5，能获得较佳的分离效果。pH对色谱峰形状与分离度的影响分别考察了不同pH条件下的流动相对样品的洗脱情况，实验结果表明，头孢曲松与他唑巴坦随流动相pH的增高(大于4.2)，峰形变宽，柱效降低；若流动相pH太低(小于3.8),头孢曲松与他唑巴坦不能分离，因而流动相的最佳pH值为4.0。流动相比例对色谱峰形状与分离度的影响分别考察了不同流动相比例条件下的流动相对样品的洗脱情况，实验结果表明，头孢曲松与他唑巴坦随流动相中有机相比例增高(35%)，色谱峰不能分离；若流动相中有机相比例降低至20%以下，头孢曲松峰形变宽，柱效降低；因而流动相的最佳比例为含30%的有机相。检测波长的选择和优化提取头孢曲松与他唑巴坦色谱峰的二极管阵列色谱图与光谱图，结果头孢曲松在200nm400nni均有强吸收，在243nra波长处有最大吸收；他唑巴坦为末端吸收，头孢曲松反式异构体在200nm400nm均有强吸收，在236nm波长处有最大吸收，同时他唑巴坦的量为头孢曲松的1/6，所占比例较小，为不使他唑巴坦的吸收度太小、并兼顾头孢曲松与头孢曲松反式异构体的检测，选择220nm为含量测定与有关物质测定的检测波长。在上述研究的基础上，我们采用选定的色谱条件首先进行了系统适用性试验，在上述色谱条件下,溶剂峰保留时间约3min，不干扰主成分测定。分别称取头孢曲松钠原料和他唑巴坦钠原料，按照含量测定方法制备单组份及混合组分的样品溶液作为供试品溶液，按照上述色谱条件进行测定。结果头孢曲松和他唑巴坦的理论板数均大于3000,两组份之间以及与其它杂质峰之间的分离度均符合规定。我们进一步对检测方法的线性范围进行了研究精密称取经头孢曲松对照品0.0537g和他唑巴坦对照品0.0815g，同置50ml棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别取贮备液适量，加流动相分别稀释至下列浓度，照含量测定项下的方法进行实验。结果(见表3-4与图8-9):头孢曲松与他唑巴坦的峰面积与浓度线性关系均良好，线性范围为头孢曲松一0.018ug54.0ug,r=0.9997:他唑巴坦一Q.015ug9.0ug，r-0.9999。表9他唑巴坦的线性与范围(见图31)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表10头孢曲松的线性与范围(见图32)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>再进一步，我们对这个检测方法的精密度进行了试验，分别配制高、中、低三个样品浓度的溶液，照含量测定项下的方法进行实验，各进样3次，计算精密度，结果见表5及图10-15。表5精密度实验<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>我们对这个方法的灵敏度也进行了最低检测限(LOD)与最低定量限(LOQ)研究取含量测定项下的贮备液适量，加流动相稀释至下列浓度0.9ug/ml、5ug/ml，照含量测定项下的方法进行实验，见图16-17。结果按信噪比(S/N)计算，头孢曲松的最低检测限(LOD)(S/N=3)为7.7ng;头孢曲松的最低定量限(LOQ)(S/N=10)为25.7ng;他唑巴坦的最低检测限(LOD)(S/N=3)为8.8ng;他唑巴坦的最低定量限(LOQ)(S/N=10)为26.7ng。我们还对这个检测方法进行了稳定性试验，配制含量测定样品浓度的溶液(头孢曲松0.9呵/ml与他唑巴坦0.15mg/ml)，照含量测定项下的方法进行实验，放置0、0.5、1、2、3、4、5、6、7小时后，分别照含量测定项下的方法进行实验，结果见图16-17。结果含量测定溶液在7小时内稳定，头孢曲松峰面积的RSD呢为1.4%;他唑巴坦峰面积的RSTO为1.8%。我们还进行了样品检测的回收率试验，该复方制剂为原料直接分装，未添加辅料，故准确度以标准品的不同浓度测定回收率。分别配制样品浓度的80%、100%、120%的溶液，照含量测定项下的方法进行实验，各测定3次，计算回收率，结果见表6及图18-22。表6回收率实验％(n=3)浓度80%100%120%平均回收率％他唑巴坦97.799.8跳199.2RSD%0.30.00.10.1头孢曲松98.3100.3100.199.6RSD%0.30.10.10.1从上述的回收率结果来看，该方法的准确度较好，能够保证含量测定的准确性。从上面的试验结果表明，我们建立的这个含量测定方法，具有灵敏度、稳定性好，重复性高。是个理想的用于检验复方药物两个成分的方法。由于该制剂是由无菌原料直接分装的，所以，原料与制剂的成分、含量上完全一样，没有差别。采用本专利的检测方法对原料进行的检测，得到与制剂相同的结果。实施例四、采用新的检测方法对复方头孢曲松钠他唑巴坦钠样品进行检测进一步，我们采用这个新的检验方法对三批GMP条件下生产的试验样品含量测定。按照前述含量测定方法进行，取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成每ml含头孢曲松钠0.5nig和含他唑巴坦钠0.25mg的溶液，精密量取10ul，注入色谱仪；另取头孢曲松钠和他唑巴坦钠对照品适量，同法稀释并测定，按外标法计算供试品中他唑巴坦钠和头孢曲松钠的含量。A样xW对x对％xW装标小量%x100%A对x样xW样x标示量说明W对对照品的称样量，W样样品的称样量，W装样品的平均装量，A标对照品的峰面积，A样样品的峰面积，对％:对照品的纯度，标示量样品的标示量按照上述色谱条件，对三批样品的含量进行检测，结果见表7及附图23-30。表7含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>由于该制剂是由无菌原料直接分装的，所以，原料与制剂的成分、含量上完全一样，没有差别。采用本专利的检测方法对原料进行的检测，得到与制剂相同的结果。实施例五、新检测方法对不同配比的复方原料与制剂的检测釆用上述实例建立的检测方法，我们对不同配比的头孢曲松钠他唑巴坦钠的复方制剂进行了检测，以观察这样的方法是否可以用于不同的配比的复方制剂的检测，结果发现，对于头孢曲松钠/他唑巴坦钠20:1,10:1，8:1,6:1,4:1，5:1，3:1,2:1,1:1,1:2，1:4，1:5，1:6，1:8，1:10,1:20等17个不同配比的样品的检测，本专利建立的新方法均能很好的对两个组成成分进行测定，该方法有很好的灵敏度和可靠性。由于该制剂是由无菌原料直接分装的，所以，原料与制剂的成分、含量上完全一样，没有差别，采用本专利的检测方法对复方的原料进行的检测，得到与制剂相同的结果。实施例六、采用该种检验方法评判为合格制剂的进行动物试验的结果根据GMP规范进行三批样品制备，按照本专利实例一、二、三的方法对三批样品进行检验，采用上述标准检验合格的制剂样品进行动物试验，检査通过上述新检测方法检验合格的样品是否能够符合动物试验的要求。试验样品首先进行无菌检査。在无菌室内进行无菌操作，取三批试验样品各6支，分别加入lOOml0.9%无菌氯化钠溶液使溶解，摇匀，打开滤器盖，在火焰旁打开样品供试液的塞子使瓶口通过火焰，立即倒入滤器中，并闭滤器盖，打开排液架的阀门，启动真空泵进行减压抽滤，待干后，用灭菌生理盐水照上述操作冲洗滤膜3次，每次100ml。打开抽气瓶排气管，将过滤器取下，用灭菌镊子将滤膜取出放入灭菌双碟中。用灭菌剪刀将滤膜平均分成3份，分别置于各含50ml硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中，其中一份做阳性对照。按规定的温度培养14天。培养期间逐日观察并记录是否有菌生长。结果无细菌生长，无菌试验符合规定，为合格产品。试验样品进行异常毒性检査取三批试验样品，加氯化钠注射液制成每lml中含O.15g的溶液，取15只小鼠分成三组，每组5只尾静脉注射同一批号的溶液0.5ml，观察48小时的内无异常反应也无死亡，结果为合格产品。试验样品进行热原检查取三批试验样品，加灭菌注射用水制成每lml中含0.15g的溶液，取9只家兔分成3组，每组3只，测定其正常体温后15分钟内，剂量按家免体重每lkg注射lml，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至38'C的供试品溶液，然后每隔30分钟测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度。各兔体温升高均低于0.6'C，而且每组家兔体温升高总和低于1.4'C，因此三批样品可判断为热源检査符合规定，三批样品为合格产品。结果见表9<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>图25是9902他唑巴坦含量图图27是标准品中头孢曲松图图29是9恥2头孢曲松含量图图31是他唑巴坦的线性与范围图图26是9903他唑巴坦含量图图28是9901头孢曲松含量图图30是9903头孢曲松含量图图32是头孢曲松的线性与范围图。权利要求1、一种新的用于头孢曲松钠与他唑巴坦钠复方原料和制剂的检测方法。2、根据权利要求l所述的方法，其特征在于该方法采用高效液相色谱法，所采用的流动相可以是正已垸，氯仿，二氯甲垸，四丁基氢氧化胺、乙腈、磷酸二氢钾、甲醇、水等，其中优选的采用四丁基氢氧化胺，磷酸二氢钾溶液和乙腈。3、根据权利要求1、2所述的方法，其特征在于该方法所采用的检测波长可以是21(T260nm,优选的波长采用220nm。4、根据权利要求1、2、3所述的方法，其特征在于该方法所采用的流动相流速可以是0.1~3.Oml/tnin,优选地流速采用1.Oml/min;5、根据权利要求l、2、3、4所述的方法，其特征在于该方法所采用的色谱柱可以是胺基柱，氰基柱，十八烷基硅垸键合硅胶柱，八烷基硅烷键合硅胶柱，四烷基硅垸键合硅胶柱，苯基硅烷键合硅胶柱等；优选地采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(C18柱)。6、根据权利要求l、2、3、4、5所述的方法，其特征在于该方法对于不同比例的头孢曲松钠他唑巴坦钠复方均能检测，头孢曲松钠他唑巴坦钠两者成分的比例可以包括1:5050:1，优选地用于1:2(T20:1。7、根据权利要求l、2、3、4、5、6所述的方法，其特征在于该方法可以用于头孢曲松钠他唑巴坦钠复方的原料检测，也可以用于该复方的制剂检测。8、根据权利要求l、2、3、4、5、6、7所述方法，这种检测头孢曲松钠他唑巴坦钠复方的方法，对两个组分的含量及杂质能很好地检测，并且这样的检验不受另一成分的干扰，有很好的灵敏度、专属性、简便易行，该方法可以用于制药公司在该复方的原料与制剂生产过程中对于产品质量的检测，也可以用于药检所、医院等单位对制剂质量的监控。全文摘要一种新的高效液相色谱(HPLC)方法，可以同时检测头孢曲松钠他唑巴坦钠复方中两种单一成分的含量及有关杂质，两种成分不相互干扰与影响，该方法操作简单易行，专属性强，灵敏度高，线性范围大，稳定性好，可用于复方制剂与原料的检测。文档编号G01N30/00GK101592635SQ20081002834公开日2009年12月2日申请日期2008年5月28日优先权日2008年5月28日发明者孙明杰,霆王,邓桂兴,马宏强申请人:广州威尔曼新药开发中心有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